4种中药对30株广泛耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用

庞载元 吴贤丽 华毅

（攀枝花市中心医院，四川 攀枝花 617067）

4种中药对30株广泛耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用

庞载元 吴贤丽 华毅

（攀枝花市中心医院，四川 攀枝花 617067）

目的：探讨黄芩等4种中药对广泛耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用。方法：采用中药抗菌试验试管法测定药物的最低抑菌浓度（M IC）。结果：黄芩、连翘、黄连、金银花对30株广泛耐药铜绿假单胞菌有不同程度的体外抑菌作用，M IC均值分别为475.00，345.83，60.94，379.17 mg/m L，与标准菌株ATCC27853的M IC相近。其中黄连的抑菌作用最强。结论：4种中草药对30株广泛耐药铜绿假单胞菌均有不同程度的抑菌作用，本地与外地收集的菌株，抑菌作用无显著性差异（P＞0.05）。

黄芩；连翘；黄连；金银花；广泛耐药铜绿假单胞菌；体外抑菌试验

随着抗菌药的广泛使用，细菌的耐药问题变得越来越突出，严重威胁着人类健康，己成为人们必须面对的难题，特别是广泛耐药菌的出现使临床感染治疗面临严峻的挑战，由于缺乏有效的抗菌药治疗，已成为院内感染致死的一个重要原因。

广泛耐药铜绿假单胞菌[1]是院内感染的重要条件致病菌，对碳青霉烯类、氟喹诺酮类、氨基苷类及β-内酰胺类抗菌药同时耐药，多黏菌素可能是目前对碳青霉烯类抗菌药耐药铜绿假单胞菌或鲍曼不动杆菌最为有效的抗菌药物之一，但毒副作用较大，临床较少使用；替加环素具有广谱抗菌活性，是目前治疗广泛耐药菌感染的首选，但对铜绿假单胞菌无抗菌活性[2]。开发新的抗菌药是克服该菌耐药性的有效途径，但新药开发周期长、投资大，医药经费负担重。

中药治疗感染性疾病有悠久的历史，常用的抗菌中草药有近百种[3]，因而从中药中筛选出能对广泛耐药铜绿假单胞菌具有较强作用的药物或相关成分可能是一条捷径。经文献检索，有关中药抑菌的研究较多，但未见中药对广泛耐药铜绿假单胞菌抑菌、杀菌的研究报道，因此，研究中药对广泛耐药铜绿假单胞菌的体外抗菌活性具有重大的现实意义。

本实验采用中药抗菌实验试管法，参考了有关文献[4]并根据多年来的经验作了适当的改进。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

孵箱，1 000μL无菌吸头，1 000μL加样枪，带帽无菌试管若干，比浊仪，API 0.85%3 m L无菌盐水管，试管架若干。

1.2 菌株的选择

收集近期（2010年4月 -2011年4月）来自本院和外地（浙江大学医学院附属第一医院）的广泛耐药铜绿假单胞菌30株，选择标准菌株ATCC 27853，ATCC25922，ATCC25923做对比分析。

1.3 中药的选择

通过查阅文献，选择有抗菌活性的4种中药配方颗粒（本院药房提供），由四川新绿色药业科技发展股份有限公司生产的黄芩、连翘、黄连、金银花，产品批号分别为0906004，1011091，1008054，1001002。

1.4 中药药液的制备

取50 m L的无菌烧杯，用无菌蒸馏水溶解中药配方颗粒，使其药液相当于生药的质量浓度为1 000 mg/m L。

1.5 细菌的培养与稀释

将选定的实验菌株,接种血平板培养基37℃孵育24 h。取API 0.85%3 m L无菌盐水管，挑取菌落配制成0.5麦氏比浊单位，相当于菌含量1.5× 108cfu/m L。

1.6 最低抑菌浓度（M IC）的测定

按临床标准化协会（CLSI）推荐的液体稀释法测定实验菌株的M IC值。具体应用倍比稀释法对药物进行稀释，稀释液为梅里埃的非苛养革兰阴性杆菌药敏专用肉汤。

1.7 操作步骤

在10支无菌试管中加入1 m L肉汤，于第1管加1 m L中药（1 000 mg/m L），混匀后取出1 m L加入第2管，混匀后取出 1 m L加入第3管，反复操作至第9管，第10管不加药液做阳性对照，在每个试管中加入 0.5麦氏单位的菌液 20μL，第9管不加菌液做阴性对照，充分混匀后放置37℃孵箱中培养，24 h后观察细菌生长情况。在阳性对照管细菌生长正常，阴性对照管无菌生长的条件下，判断无浑浊的试管的最小浓度即为M IC。以上所有无菌操作均需在生物安全柜中进行。

2 结果

黄芩、连翘、黄连、金银花对30株广泛耐药铜绿假单胞菌有不同程度的体外抑菌作用，M IC均值分别为475.00，345.83，60.94，379.17 mg/m L，与标准菌株ATCC27853的M IC相近。其中黄连的抑菌作用最强。见表1。

3 讨论

由表1可见，黄芩、连翘、黄连、金银花对30株广泛耐药铜绿假单胞菌有不同程度的体外抑菌作用。其中黄连的抑菌作用最强。连翘和金银花的抑菌作用与冷会勇[5]报道的多重耐药鲍曼不动杆菌的抑菌作用相似，黄连的抗菌活性，与李建志[6]报道的铜绿假单胞菌体外抗菌活性相似。4种中药对本地与外地收集的菌株，抑菌作用无显著性差异（P＞ 0.05）。

表1 4种中药对30株广泛耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用

选择适当的给药途径方能发挥中药的抗菌作用。常用的抗菌中药有近百种，然而其抑菌浓度远高于抗菌药[7]，按常规剂量口服血药浓度远远达不到抑菌浓度。以本试验为例：黄连M IC均值为60.94 mg/m L，按成人5 000 m L体液算，需要一次口服 304.7 g生药才可能在体内达到抑菌浓度，而黄连的常规剂量为2～ 10 g[8]，远远达不到应有的血药浓度。如果用此剂量口服治疗胃肠道感染，因为不必吸收入血，理论上能达到抑菌浓度；如果用此剂量口服治疗肺部感染，因为血药浓度远远达不到抑菌浓度，感染治疗难以奏效。

中药治疗呼吸道感染，吸入给药是不错的选择。由于呼吸道面积大，毛细血管丰富、致密，药物吸收快，吸收速率仅次于静脉给药[8]，药物用量少，可以克服口服血药浓度过低的瓶颈，通过雾化吸入，药物可直达病所。张卫东[9]报道：13例患者用多黏菌素E进行雾化吸入治疗广泛耐药铜绿假单胞菌性肺炎取得较好临床疗效，有效率为69.2%，研究中13例均未发生严重不良反应。中药雾化吸入治疗肺炎[10-12]和上呼吸道感染[13-15]的报道较多，疗效肯定。本研究资料显示，虽然4种中药对广泛耐药铜绿假单胞菌有不同的体外抗菌活性，但按常规剂量口服在体内远远不能达到应有的抑菌浓度。中药雾化吸入治疗广泛耐药菌引起的肺炎是值得一试的方法。

在中药抗菌研究的过程中，前人的研究结果提示中药在抗菌作用方面蕴藏着巨大潜力。中药的给药途径有很多，在应用研究方面需要打破常规，不断创新与开拓，才能使中药更好地造福于人类。

[1] 倪语星.泛耐药细菌[J].辽宁医学杂志，2005，19（6）：281-283.

[2] 张小江，徐英春，原英，等.替加环素等14种抗菌药物对多重耐药菌的体外抗菌活性研究[J].中国感染与化疗杂志，2009，9（5）：365-368.

[3] 刘锋，孔美然.中药抗菌作用研究概述[J].中国民族民间医药，2010，19（2）：14.

[4] 曾祥吉，李东霞.中药抑菌实验方法的研究[J].现代中西医结合杂志，2011，2（4）：518-520.

[5] 冷会勇，闫志勇，王斌，等.十八种中药制剂对多重耐药鲍曼不动杆菌体外抗菌作用的研究[J].中外医疗，2010，30（17）：132.

[6] 李建志，刘旭红，杨丽珍，等.11种中草药抗菌作用实验研究[J].中医药信息，2009，26（3）：82-83.

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[12] 李贵平，马君蓉，沈玉蓉.化痰平喘汤雾化吸入治疗小儿肺炎79例疗效观察[J].中医儿科杂志，2005，1（2）：33-34.

[13] 熊学美.中药结合气动雾化吸入治疗婴幼儿毛细支气管炎75例[J].湖北中医杂志，2014，（7）：46.

[14] 胡元生，邹柳燕.野菊花中药雾化治疗小儿急性上呼吸道感染89例疗效观察[J].齐齐哈尔医学院学报，2013，34（8）：1166-1167.

[15] 高瑞丽.中药雾化吸入治疗咽炎、鼻炎的临床研究[J].现代中西医结合杂志，2009，18（18）：2156-2157.

The Bacteriostatic Effect of Four K inds of Traditional Chinese Herbal M edicines on Thirty Strains of Extensively Drug-resistant Pseudomonas Aeruginosa

Pang Zaiyuan，Wu Xianli，Hua Yi(Center Hospital of Panzhihua City,Sichuan Panzhihua 617067，China)

Objective：To evaluate bacteriostatic effects of four kinds of Chinese herbal medicines,including baicalin,on the extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa.M ethods:The antibacterial medicine test tube method for TCM was adopted to determine the minimum inhibitory concentration （M IC）of the tested drug.Results：Scutellaria,Forsythia,Coptis and Honeysuckle showed a different degree of bacteriostatic effect in vitro antibacterial test on 30 strains of extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa.The M IC mean value was 475.00,345.83,60.94 and 379.17 mg/m L respectively,which was sim ilar to the M IC of the standard strain ATCC27853,and Coptis chinensis showed the strongest inhibitory effect.Conclusion:Four kinds of Chinese herbal medicines had different antibacterial effects on 30 strains of extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa，and there was no significant difference of bacteriostasis（P＞0.05）between the strains collected locally and from other places.

Scutellaria；Forsythia；Coptis；Honeysuckle；Extensively Drug-resistant Pseudomonas Aeruginosa；in Vitro Antibacterial Test

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.02.006

2014-10-08）

庞载元，男，副主任技师。研究方向：临床微生物检验。E-mail：yangfan621225@qq.com