RP-HPLC法测定吡嘧司特钾片的含量及有关物质

刘春亮

(滁州市食品药品检验中心，安徽 滁州　239000)



RP-HPLC法测定吡嘧司特钾片的含量及有关物质

刘春亮

(滁州市食品药品检验中心，安徽 滁州239000)

摘要：目的采用RP-HPLC测定吡嘧司特钾片的含量及有关物质，为片剂的质量控制提供有效的分析方法。方法采用C18分析柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为：甲醇∶水∶冰醋酸(20∶30∶0.1)，检测波长为260 nm，流速1.0 mL·min-1。结果在选定的色谱条件下，吡嘧司特钾与有关物质完全分离；制剂中辅料对主药无干扰，吡嘧司特钾在19.66～393.2 mg·L-1浓度范围内，峰面积与浓度线性关系好，相关系数r=0.999 9，平均回收率为100.08% ，RSD= 0.21%。结论该法简便，准确，专属性强，可用于吡嘧司特钾片的有关物质检查及含量测定。

关键词：高效液相色谱；吡嘧司特钾片；有关物质

吡嘧司特钾为肥大细胞稳定剂,制成片剂用于治疗过敏性鼻炎、支气管哮喘。国内三家生产此药品的原标准[1-4]均采用高效液相色谱法对本品有关物质进行测定,但是流动相比例和限度不一致，同时含量测定方法有紫外分光光度法和高效液相法两种方法，故我们建立统一的高效液相标准方法，并建立统一的限度对质量加以控制，方法更为合理，高效。

1仪器、试剂与材料

1.1仪器安捷伦1260型高效液相色谱仪，安捷伦化学工作站，PDA检测器。Sartorius BS21S电子天平。

1.2试剂甲醇、乙腈为色谱纯，冰醋酸为分析纯。

1.3材料吡嘧司特钾对照品(A厂家提供，由原料精制而成，化学标定含量为99.8%)，样品(吡嘧司特钾片，由A，B，C三厂家提供，批号分别为101001，1006004，100301)。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱： C18分析柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇∶水∶冰醋酸(20∶30∶0.1)；检测波长：260 nm；流速：1 mL·min-1；柱温：30℃。

2.2破坏实验和干扰实验取本品经酸、碱、高温、氧化和光照破坏后，在本实验条件下各降解物均与主峰完全分离，片剂辅料和溶剂对主峰无干扰，见图1。

2.3有关物质检查

2.3.1样品测定取吡嘧司特钾样品适量，置100 mL的容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度摇匀，制得浓度为0.4 g·L-1的供试液。精密量取供试液1 mL，置100 mL的容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度摇匀，制得浓度为2 mg·L-1的对照液。

同时取经过日光灯(3 000 lx)光照72 h的对照溶液10 mL(1 g·L-1)作为系统适用性溶液,照色谱条件试验,取系统适用性溶液20 μL注入液相色谱仪,光照分解杂质对主峰的相对保留时间约为0.8 min,与主峰分离度应符合规定。

另取对照溶液20 μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为记录仪满量程的10%～25%；再精密量取供试品溶液与对照溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的5倍，检查杂质。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积和不得大于对照溶液中主成份峰面积1.5倍(1.5%)。色谱图见图2。

2.3.2测定结果测定A、B、C三厂有关物质的结果分别为(0.53±0.08)%、(0.30±0.06)%、(2.31±0.14)%。

2.4片剂含量测定

2.4.1标准曲线的线性范围精密称取吡嘧司特钾对照品19.66 mg,置100 mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液5 mL，置50 mL量瓶中，用水稀释制成标准溶液，在上述色谱条件下分别进样1、2、5、10、20 μL记录色谱图，以对照品溶液进样浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标做线性回归。吡嘧司特钾在19.66～393.2 g·L-1浓度范围内，相应峰面积A与其对照品浓度呈良好的线性关系，回归方程为：A=2.445 88C-0.082 55，r=0.999 9。

2.4.2精密度实验 取对照品溶液20 μL,重复进样6次，测定吡嘧司特钾峰面积，结果RSD为0.06%。

2.4.3重复性试验 取同一批样品(A厂)，配制供试品溶液6份，按上述色谱条件测定，取对照品同法操作，记录色谱图，按外标法计算含量，平均值为99.2%，RSD为1.0%。

2.4.4稳定性实验同一份对照溶液，在0、1、2、3、4、8、10 h按上述色谱条件分别进样分析，吡嘧司特钾面积分别为478.9、478.3、478.2、478.8、479.0、479.7、478.8，峰面积的RSD为0.1%，样品峰面积在10 h内稳定。

2.4.5回收率实验精密称取吡嘧司特钾10.31 mg置100 mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液，精密量取上述溶液10 mL，置50 mL量瓶中，用水稀释至刻度作为对照品溶液。另取相应的混合辅料9份，分别置50 mL量瓶中，加水适量使溶解，精密量取对照溶液液4、5、6 mL配制成相当于80%，100%和120%浓度的样品溶液各3份，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；照含量测定项下的方法，进样10 μL，计算回收率，结果见表1，平均回收率为100.08%，RSD为0.21%。

表1　回收率实验结果

2.4.6样品含量测定取本品精密称取约20 mg，置100 mL量瓶中，加水适量使超声溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，至50 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成每1 mL约含20 μg的溶液。精密量取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取干燥至恒重的吡嘧司特钾对照品适量，同法测定，计算，即得。见图3。

A 样品B 对照品

图3含量测定图谱

2.4.7样品测定结果测定A、B、C三厂样品质量分别为(99.5±0.3)% 、(100.8±0.2)%、(98.5±0.2)%。

3讨论[5-7]

3.1吸收波长的选择通过使用DAD检测器分别对本品进行光谱扫描，结果表明在波长为260 nm处吸收最大，所以确定测定波长选在260 nm。

3．2检测方法的确定考察不同的流动相比例：基本是用水∶冰醋酸∶甲醇系统，但是比例不一样，主要是冰醋酸的量，用样品考察了4种比例：(1)水∶冰醋酸∶甲醇(400∶20∶600)；(2)水∶冰醋酸∶甲醇(550∶3∶450)；(3)水∶冰醋酸∶甲醇(600∶2滴∶600)；(4)水∶冰醋酸∶甲醇(300∶1∶200)，看分离情况。选择水∶冰醋酸∶甲醇(300∶1∶200)这个比例较好。在破坏试验中，光照实验在主峰前均有较大杂质峰，考察了WATERS Sunfire C18、Agilent eclipse XDB-C18和大连依利特Hpersil C18三种色谱柱，此杂质峰相对主峰保留时间约为0.8 min，并以此达到有效分离，作为系统适用性考察使方法更为合理。一般有关物质考察到主峰保留时间的3倍，但是C厂记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍时，还有明显杂质出现，故标准定为记录色谱图至主成分峰保留时间5倍。

3.3检测的结果由于有关物质标准不一，综合考虑将限度定为1.5%， C厂家杂质较多，按照原标准合格，按本文方法改进后明显超限，是时间长降解还本身样品不纯，这需要进一步考证。含量试验结果表明，紫外方法结果偏高，易受辅料的影响，高效液相色谱法则能准确测定其含量，不受辅料的影响。

总之，以上实验可以看出，采用高效液相色谱法，通过专属性、线性、回收率等研究证明此检测方法具有灵敏、准确、重现性好等优点，可更有效测定吡嘧司特钾片中有关物质和含量。

参考文献:

[1]国家药典委员会.中国药典(二部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010.

[2]国家食品药品监督管理局标准.YBH13992006[S],2006.

[3]国家食品药品监督管理局标准.YBH39572005[S],2005.

[4]国家食品药品监督管理局标准.YBH06832008[S],2008.

[5]沈卫阳,于清峰,马越峰,等.RP-HPLC检查吡嘧司特钾中有关物质及其片剂的含量测定[J].中国药学杂志,2004,39(1):63-64.

[6]沈卫阳,陈蓉,胡育筑.吡嘧司特钾胶囊的RP-HPLC测定[J].中国医药工业杂志,2003,34(11):573-574.

[7]赵喆,王昕,左文坚.HPLC法测定醋酸可的松有关物质及其注射液的含量[J].中国药品标准,2006,7(3):38-41.

(收稿日期：2014-04-17，修回日期：2015-02-10)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.08.013