基地重点病种多囊卵巢综合征患者血标本的质量可控性※

黄 晶 李 威 廖立艳 吴效科

（黑龙江中医药大学附属第一医院妇科实验室，哈尔滨 1 5 0 0 4 0）

临床样本资源的搜集是开展科学研究的基础，利用样本资源开展研究，阐释疾病的病因，旨在为疾病的临床诊断和治疗提供理论基础[1]，为基础医学和临床转化医学研究奠定生物数据基础[2]。如何保存和提供高质量的生物样本资源和数据以用于科学研究是应该重视的问题[3]。

多囊卵巢综合征是一种多起因、临床表现多样性的女性生殖内分泌系统疾病，以雄激素过多和持续无排卵为临床主要特征，表现为月经稀发、闭经、不孕、多毛、肥胖、痤疮、卵巢多囊性改变等。随着中西医研究的深入，多囊卵巢综合征日益显示出其复杂性和重要性，本病已成为妇科生殖内分泌研究的热点和难点[4-5]。我院妇科国家临床研究基地的建立，为多囊卵巢综合征疑难疾病的防控和治疗提供了中医药研究领域的领先平台，给多囊卵巢综合征患者带来了福音。为了确定多囊卵巢综合征疗效的靶点[6]，提高排卵率、着床率、妊娠率、活产率[7]，为中医药的临床治疗研究提供可靠的检测数据依据，对多囊卵巢综合征患者进行血标本的质控[8]尤为重要。

多囊卵巢综合征血标本质控流程见图1：

图1多囊卵巢综合征血标本质控流程

多囊卵巢综合征血标本采集运输流程、检测指标的确定、血标本的保存及送检、存档意义报告如下：

1 多囊卵巢综合征血标本采集运输流程

1.1采血时间 按照纳入标准的时间进行采血，访问类型（0个月/3个月/6个月）。

1.2采血前的准备 受试者需空腹8~12小时，再进行实验室检查。

1.3采血的操作要求

1.3.1 收集血清样本 ①各分中心采用的静脉采血方式。②装满两个5毫升的黄管。③上下轻摇管子5次（避免溶血），室温下静置15分钟后离心，不得超过30分钟。不要在4℃冰箱贮存后再离心。④静置15分钟后，室温下离心20分钟，3000转/分钟。然后将血清转移至EP管中，每个EP管内的最大容量不要超过1.3ml，并且需要用黑色标记笔在EP管上标记出分中心名称代号、受试者药物编号和姓名缩写、采血日期、访问类型等详细情况。最后定期（3个月）运往中心实验室检测。⑤标本量要适中。如果标本量过少，将无法检测。如果标本过满，冻存后膨胀导致标本溢出。每一访问类型的总血清量不要少于3ml的血清放入管内，送往中心实验室（每个EP管中血清体积约1-1.3ml，如有少量剩余也要单独装在EP管中标记清楚）。

1.3.2 全血D N A①采集每个受试者的血液，将全血装在2个5ml的紫色抗凝管中（包含EDTA），上下轻摇管子8次后，静置于试管架上室温放置10分钟，然后将全血转移至黄色的全血冻存管中。②在冻存管外用黑色的标记笔进行标记，标记内容包括：分中心名称代号、受试者药物编号和姓名缩写、采血日期、访问类型等详细情况，先由分中心保存在-20℃或-70℃的冰箱/冰柜中直到装运。

1.4采血注意事项

1.4.1 医生及患者准备 医生向患者告知检验目的、样品采集时的注意事项及要点和采集时间。

1.4.2 血液样品采集前患者的准备 ①由医护人员告知患者需要静脉采血及采血时间。②在采血的前一天晚上不应有剧烈的运动，采血当日早晨应避免剧烈运动和劳动，采血前应有10分钟的休息。采血时，患者要保持相对安静和情绪稳定。冬季采血时应要求患者暖和后保持血液循环通畅并休息10分钟后采血，以保证检验结果的准确性。③一般采血前24小时要素食。避免食用或少食用高脂类食物及水果，同时停止饮用咖啡/咖啡类饮料、浓茶类饮料及酒类。空腹时间不宜过长，最好是空腹8～12小时采血，尤其是早晨空腹采血。④一般采血前要避免吸烟或饮酒。⑤某些用药患者根据具体情况，尽量避免药物干扰。一般要求病人停用药物2天后采血。⑥体位影响血液循环，因此采血病人的体位应相对固定，一般采用坐位采血，采血前应让病人有10分钟的时间稳定自己的体位。⑦采血前应向患者做适当的解释，以消除患者的疑惑及恐慌。⑧血脂：血脂采血前3天禁止食用高脂肪食物，应在禁食12小时后采血检测，采血前不要过量饮水。患者最好于采血前3周不要改变饮食习惯，采集样品前4周，体重应处于稳定状态。并于前3天至采血前禁饮咖啡或酒。患者若服用降血脂类药，需在检查前24小时内停止服用，以保证结果的准确性。

1.5血标本的标记 制作实验室标本记录，内容包括：分中心名称代号、受试者药物编号和姓名、采血日期、访问类型、管的数量。

1.6血标本的登记管理 ①将标本放入-70℃冰箱内储藏，可永久贮存。或放入-20℃冰箱中，非无霜冰箱，贮存时间不得超过3个月，3个月后需转移至-70℃冰箱。同时更新补充完善血标本登记EXEL表格。②每个人的标本需要装在一个独立的四封袋里，四封袋里要装有血清和血样贮存登记卡。每次将标本放入贮存的盒中都应将信息添加至血样收集登记表汇总表中。信息包括序号、受试者药物编号、访问类型、冻存管的数量、EP管的数量。

1.7血标本的运输 每次装运前形成一个新的电子版血样收集登记表（此次运输的血样收集登记情况电子版）。此外，还需在原有的word版血样收集登记汇总表上进行添加更新，以保证采血汇总记录的全面性。①血样收集后，定期由专门的冷链运输公司负责将标本运往中心实验室，具体运输频率由中心实验室统一确定。如分中心标本已经存满需要转运的，请及时通知中心实验室以便确定运输事宜。②冷链公司由中心实验室指定并与之签订运输合同，每次运输前由中心实验室通知分中心研究助手，运输公司将直接与研究助手联系确定具体的运输时间。③每次运输前研究助手须填写运输标本信息登记表，登记内容包括：当次运输标本的总数量、每份标本的药物编号及采血次序标记（0个月/3个月/6个月），并将登记表格电子版发给项目办。④标本托运当日，研究助手与运输公司进行交接时须填写运输公司的运输表格，内容包括托运者的姓名、起运的单位、所托运标本的总数目、收件地址为黑龙江中医药大学附属一院妇科实验室。⑤之前填写的标本信息登记表纸质版须与标本一同运输回中心实验室。⑥标本由冷链运输公司采用干冰包埋的方式进行运输及保温，要求研究助手在标本装箱过程中必须在场。保证标本从冰箱中取出后尽快转移至运输保温箱中。⑦如出现运输标本过多，冷链公司运输箱容量不足的情况时，可由研究助手酌情减少所运输标本的数量，并将取出的标本尽快放回存储的冰箱中。

2 多囊卵巢综合征血标本检测指标的确定

根据多囊卵巢综合征临床症状，制定检测指标与检测方案，确定检测项目[9-11]。

2.1性激素相关指标 促黄体生成素（LH）、促卵泡生成素（FSH）、泌乳素（PRL）、雌二醇（E2）、孕酮（P）、睾酮（T）、17羟基孕酮、雄烯二酮（A）、硫酸脱氢表雄酮（DHEAS）。

2.2炎性因子 C反应蛋白。

2.3胰岛素代谢相关指标 胰岛素、胰岛素原、C肽。

2.4药物安全性指标 肝功：GPT、GOT、AKP；肾功：BUN、CRE、BMG。

2.5脂代谢相关指标 血脂系列：TG、CHO、HDL、LDL、APOAL、APOB、TBA、ADA、脂蛋白 （a）。

2.6着床相关因子 胰岛素样生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）、白血病抑制因子（LIF）、糖链接蛋白（Glycodelin）、抗苗勒氏管激素（AMH）。

3 中心实验室血标本信息的录入、血标本保存、质量的确认及送检

3.1采血与记录 分别将全国25个分中心第一次采血（0个月）、第二次采血（3个月）、第三次采血（6个月）的血标本数进行横向及纵向统计，横向统计出每个分中心三次采血的血标本数及纵向统计所有分中心分别三次采血的总标本数，做成表格，分别用纸质与电子版的形式记录，并及时反馈给项目管理办公室，作为监管的数据依据。

3.2挑选与分装 将分中心送来的血标本进行挑选、分装，全血标本装在一起，血清标本装在一起，分别装在全血及血清各81孔的盒子中，盒子外面分别标上课题名称、全血或血清、分中心名称、盒子编号，用橡皮套套牢。在分装的同时，将标有药物编号的全血或血清在81孔盒子中的准确定位分别标注在相应的纸质登记上，再将纸质登记以电子版的形式输入表格，做为以后备查。分装好的全血和血清标本盒放入-70℃的超低温冰箱中储存，并记好在冰箱中的定位。

3.3编码标注与送检 检测前，按照检测方法及指标类型重新分类（化学发光法、放免法、生化测定、酶免法），将分装好的各分中心标有药物编号的血标本进行重编码。表格横向依次设计为：重编码、药物编号、患者姓名、所属分中心；表格纵向按顺序依次为：A11-A19、A21-A29……A91-A99(A为盒子编号，B盒依次类推：B11-B19、B21-B29……)。血清标本送检前需进行性状及体积的确认及标注。异常血标本，如溶血、微溶、重溶血、浑浊等，要标注准确，记录详细。同时，送检项目、送检人、送检时间、记录时间，一并标注在“送检前标本质量登记”纸质本（按重编码的顺序）上，由专人保管。送检到检测部门时及检测后，都要与对方进行血标本数量的清点，检测结果由检测部门签字盖章。检测项目、检测人、检测时间、记录时间，一并标注在“检测结果”纸质本上，由专人保管。检测结果的电子版取回备查，并提交给项目管理办公室一份，录入网络数据送检后取回的血标本，需进行剩余体积的确认及标注，以备再次检测时用。取检项目、取检人、取检时间、记录时间，一并标注在“送检后标本质量登记”纸质本（按重编码的顺序）上，由专人保管。

3.4登记与存档 按送样批次及检测项目进行登记，设计出“十一五血标本检测目录”，如表1，以便于对已检测项目、取检标本数量及异常、缺失标本有一个总的统计，其电子版反馈给项目管理办公室存档。

表1血标本检测目录

4 存档意义

检测结果纸质版保存在中心实验室，检测结果电子版及血样本检测目录电子版保存在项目管理办公室，检测结果电子版录入网络数据库。原始检测结果在检测部门电子病历系统中还留有备份。严格的管理、周密的流程、得当的保存，可确保多囊卵巢综合征血标本的高质量，为多囊卵巢综合征的中医药研究提供可靠的检测数据支持。同时支持临床研究结果的溯源、返查，为临床研究充当坚实的后盾。

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