泰山磐石散加味对大鼠流产模型母胎界面Th1/Th2型细胞因子平衡的调控*

申 剑，浦佳希，孙 亮，张小花，武权生，王虎平

(1.甘肃中医学院中医妇科教研室， 甘肃 兰州 730000； 2.定西市妇幼保健院，甘肃 定西 743000)

·实验研究·

泰山磐石散加味对大鼠流产模型母胎界面Th1/Th2型细胞因子平衡的调控*

申 剑1，浦佳希1，孙 亮2，张小花1，武权生1，王虎平1

(1.甘肃中医学院中医妇科教研室， 甘肃 兰州 730000； 2.定西市妇幼保健院，甘肃 定西 743000)

目的：通过观察泰山磐石散加味对大鼠流产模型白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)的影响来了解其对母胎界面Th1/Th2型细胞因子平衡的调控，探究其作用机制。方法：将56只已孕Wistar大鼠按随机数字表分为空白对照组、流产模型对照组、环境模型对照组、泰山低剂量组、泰山中剂量组、环境泰山低剂量组、环境泰山中剂量组7组。以米非司酮建立流产模型，涉及环境的组别在其基础上再置于辐射和烟雾的环境造模。在妊娠第1天至第15天予以灌胃，分别给予低剂量 (7.26 g/kg)、中剂量 (14.52 g/kg)的泰山磐石散，空白对照组、模型对照组每日以4 mL蒸馏水灌胃1次。于大鼠妊娠第16天股动脉采血，ELISA法检测IL-4、IFN-γ。结果：与流产模型对照组对比，泰山低、中剂量组IL-4升高、IFN-γ降低，差别有统计学意义(P<0.01)。与环境流产模型对照组对比，环境泰山低、中剂量组IL-4升高、IFN-γ降低，差别有统计学意义(P<0.01) 。环境泰山低剂量组与泰山低剂量组、环境泰山中剂量组与泰山中剂量组之间二指标对比，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论：泰山磐石散加味对流产模型、环境流产模型能有效上调Th2细胞因子并抑制Thl细胞因子，Th1/Th2倾斜使母体排异反应降低，对环境模型Th1/Th2倾斜调节效果更明显。

泰山磐石散/药效学;流产;IL-4;IFN-γ;环境

泰山磐石散出自《古今医统大全·胎产须知/治怀胎惯堕之病》，“泰山磐石散：治妇人气血两虚，身体素弱，或肥而不实，或瘦而血热，或脾胃少食，四肢倦息，素有坠胎之患……戒欲恼，远酒酸辛热之味，永保无堕”。[1]临床常用其治疗先兆流产、习惯性或复发性流产。本实验通过观察泰山磐石散加味对大鼠流产模型白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)的影响来了解其对母胎界面Th1/Th2型细胞因子平衡的调控，探究其作用机制。

1 材料与方法

1.1 动 物

选取10～12周龄、体质量180～220 g的SPF级Wistar大鼠84只，其中雌性未孕大鼠56只，雄性大鼠28只。所有大鼠均由甘肃中医学院动物实验中心提供，许可证号：SCXK(甘)2004-0006。

1.2 药品、试剂与仪器

泰山磐石散加味的药物组成：党参15 g，黄芪35 g，白术20 g，山药15 g，白芍15 g，熟地黄12 g，川续断15 g，桑寄生12 g，杜仲12 g，砂仁6 g，炙甘草6 g。根据人与实验动物药物剂量体质量折算系数[2]计算，煎煮2次后，药液混合，浓缩到630 mL, 由甘肃中医学院附属医院中药房提供；米非司酮片，25 mg/片，北京紫竹药业有限公司产品，批号43121703，由甘肃中医学院附属医院西药房提供。IL-4、IFN-γ ELISA分析药盒，购自北京市福瑞生物工程公司，批号分别为20130711A、20130601A。

1.3 动物分组、给药与模型的建立

将SPF级wistar大鼠按雌雄2∶1比例合笼，自由进食饮水，每日清晨观察雌鼠阴栓，发现阴栓计为妊娠第1天。将56只已孕Wistar大鼠按随机数字表法分为空白对照组、流产模型对照组、环境模型对照组、泰山低剂量组、泰山中剂量组、环境泰山低剂量组、环境泰山中剂量组7组。各药物组在妊娠第1天至第15天予以相应药物灌胃，根据文献[2]给予低剂量 (7.26 g/kg)、中剂量 (14.52 g/kg)的泰山磐石散；空白对照组、模型对照组每日以4 mL蒸馏水灌胃1次。

先兆流产模型的建立：参照冯晓玲等[2]的造模方法及预实验情况。除空白对照组外，在妊娠第10天给其余6组大鼠灌服米非司酮3.75 μg/g建立模型，观察大鼠阴道出血及胚胎排出情况。

环境污染模型的建立：在米非司酮流产模型基础上，建立辐射和烟雾的环境流产模型。在妊娠后将环境泰山低剂量组、环境泰山中剂量组、环境流产模型对照组放置于电话辐射、烟雾环境。参考陈镇燕等[3]及张瑞等[4]被动吸烟造模，吸烟用玻璃箱容积 0. 25 m3(100 cm× 50 cm× 50 cm)。所有大鼠妊娠后开始吸烟,每日2次,每次1 h, 1 h内迅速燃完4支香烟。烟选甘肃烟草公司的兰州烟，焦油含量7 mg，烟气烟碱量0.6 mg,烟气一氧化碳量8 mg。同时，参考李乐等[5]手机辐射造模：电话为常用三星手机s7562，孕鼠每次通话时间分别为30 min，每日于早、中、晚固定时间辐射，直至孕鼠处死。

1.4 检测指标

各组大鼠于妊娠第16天股动脉采血后处死。将所采血液静置30 min后，3 000 r/min离心10 min，取血清。采用ELISA法检测各组大鼠血清IL-4、IFN-γ水平，操作方法严格按照试剂盒说明书。

1.5 统计学方法

2 结 果

2.1 各组一般情况对比

大鼠在造模前后进食量、饮水量均未发生明显变化。除空白对照组外，其余各组孕鼠均出现不同程度的易激惹、阴道流血症状，但无妊娠物排出。

2.2 各组血清IL-4、IFN-γ水平对比

与空白对照组对比，流产模型对照组、环境流产模型对照组IL-4降低、IFN-γ升高，差别有统计学意义(P<0.01)，提示造模成功。与流产模型对照组对比，泰山低、中剂量组IL-4升高、IFN-γ降低，差别有统计学意义(P<0.01)；与环境流产模型对照组对比，环境泰山低、中剂量组IL-4升高、IFN-γ降低，差别有统计学意义(P<0.01)；环境泰山低剂量组与泰山低剂量组、环境泰山中剂量组与泰山中剂量组之间对比，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表1。

表1 各组大鼠血清IL-4、IFN-γ水平对比

组 别动物数IL-4IFN-γ空白对照组81.245±0.05 0.45±0.05 流产模型对照组80.819±0.06**0.81±0.01**环境流产模型对照组80.728±0.14**0.86±0.03**泰山低剂量组81.059±0.131##0.59±0.10##泰山中剂量组81.53±0.09## 0.43±0.05## 环境泰山低剂量组81.262±0.01△△**0.459±0.05△△**环境泰山中剂量组81.690±0.02△△▲▲0.361±0.05△△▲

注：与空白对照组对比，**P<0.01；与流产模型对照组对比，##P<0.01；与环境流产模型对照组对比，△△P<0.01；与泰山低剂量组对比，＊＊P<0.01；与泰山中剂量组对比，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

3 讨 论

导致流产的原因很多，免疫因素是其中之一。妊娠表达父母双亲的基因，因此母胎界面的滋养层细胞同时表达父系和母系双方的同种异型抗原，可诱发同种异体的免疫识别或排斥反应。神经—内分泌—免疫组成了母胎界面的完整的调节网络[6]。母胎界面的免疫调节对妊娠成败非常重要。

细胞因子分为Thl与Th2型细胞因子两类。Thl型细胞因子有白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、α肿瘤坏死因子(TNF-α)等，参与细胞介导的免疫过程。Th2型细胞因子有白细胞介素4(IL-4)、IL-6、IL-10等，主要为IL-4驱动诱发，辅佐B细胞产生抗体，促进抗体介导的体液免疫反应过程。Th2细胞因子作用增强而Thl细胞因子作用减弱在母胎界面中表现为正常妊娠。多量的Thl炎性细胞因子，具有流产倾向，不利于妊娠；但少量的炎性细胞因子不仅不会危害妊娠，而且还有助于蜕膜免疫微环境的保持，在一定程度上能够清除异常的胎儿及入侵的微生物，对妊娠起到免疫防御作用[6]。免疫细胞因子在母胎界面的调节网络中起着关键的作用。

泰山磐石散加味对流产大鼠干预结果表明：可使IL-4值升高，Th2表达上调，IFN-γ值降低，Th1表达下调，Th1/Th2倾斜使母体排异反应降低，泰山磐石散加味可通过对母胎界面调节达到维持妊娠，可防治流产目的，所有治疗中剂量更有效。

环境因素是生活中难以避免的因素，张瑞等[4]、李乐等[5]都报道了环境对妊娠的影响。本实验中流产模型对照组与环境流产模型对照组之间没有统计学意义，可见辐射、烟雾因素累加后对孕鼠的影响与单独米非司酮造成的影响没有大的差别。环境泰山低剂量组与泰山低剂量组、环境泰山中剂量组与泰山中剂量组之间IL-4、IFN-γ值对比，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，表明泰山磐石散在有环境因素影响模型中上调Th2细胞因子并抑制Thl细胞因子的效果更明显，提示其对有环境因素影响者更为有效。

方中人参(党参代)、黄芪、白术、山药、甘草补中益气以载胎；川续断、桑寄生养肝益肾以固胎，白芍、熟地黄补血滋阴以养胎；砂仁健脾理气，防补药之腻。原方当归、川芎有活血功能，因此剔除不用。全方益气健脾，开后天之源；养血固肾，摄先天之本。现代药理研究表明：白术具有抗菌、抗凝、调节免疫功能、抑制子宫收缩的作用[8]。黄芪可影响多种免疫细胞活性、细胞因子的产生和分泌、抗体生成等[9]。党参多糖能明显增强实验动物的细胞免疫。杜仲化学活性成分包含黄酮类、多糖类、苯丙素类，有提高机体免疫作用的重要作用[10]。杜仲、川续断等补阳药可促进垂体对促性腺激素释放激素的反应性，促进卵泡发育，改善母胎界面Th1 / Th2型细胞的比值，调节滋养细胞的增殖与凋亡作用，对子宫平滑肌有镇静、镇痛作用[11]。桑寄生能使卵巢hCG/LH受体结合力及受体数目增加，对下丘脑—垂体—性腺轴有调整作用[12]。

泰山磐石散加味临床使用，对有流产史者，可预培其损；对检查无异常但欲孕而未得者，可夯基址安心志；对因虚而经乱者，可补气血调经水；对先兆流产、胎萎不长等，可补气以托载固摄，养血以滋养濡润；对不孕、胚胎停育、自然流产，复发性流产、习惯性流产等免疫因素导致者，疗效显著。

[1]徐春甫，崔仲平，王耀廷.古今医统大全[M]. 北京：人民卫生出版社，1991：774.

[2]冯晓玲,赵敏,匡洪影.优生宁Ⅲ号对先兆流产模型大鼠内分泌水平影响的实验研究[J].中国医药导报,2010,12(12):850-851.

[3]陈镇燕,李静,黄光英.被动吸烟诱导的胎儿生长受限大鼠胎盘血管结构异常及其机制[J].华中科技大学学报：医学版,2012,41(3):268-273.

[4]张瑞,苟文丽,黄谱.不同孕期被动吸烟对仔鼠学习记忆行为及海马神经元凋亡的影响[J].现代妇产科进展,2009,18(9):664-665.

[5]李乐，唐双阳，陈玉海，等.手机辐射对孕鼠及子代 IFN-γ 和 IL-4 的影响[J].微生物学免疫学进展, 2011,39(3):33-34.

[6]林秋华.疑难妇产科学[M]. 武汉：湖北科学技术出版社，2002:33.

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[10]刘丽君.杜仲化学活性成分及奠药理孝研究概况[J].亚太传统医药,2013,9(5):82-83.

[11]张景慧,姚美玉.常见补阳药物治疗先兆流产药理研究进展[J].长春中医药大学学报,2012,28(5):929.

[12]魏方方.安子汤剂治疗脾肾两虚型先兆流产的临床研究[D].南京：南京中医药大学，2010.

(编辑 陶 珠)

1001-6910(2015)05-0071-03

R285.5

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.05.33

张小花，讲师，硕士，283005688@qq.com

甘肃中医学院中青基金项目(ZQ2011-19)

2014-12-08；

2015-03-20