Periostin在肾细胞癌中的表达情况及其临床意义

林建群，陈锡彬，章锐鸿

(汕头市第二人民医院泌尿外科，广东汕头 515000)

·临床研究·

Periostin在肾细胞癌中的表达情况及其临床意义

林建群，陈锡彬，章锐鸿

(汕头市第二人民医院泌尿外科，广东汕头 515000)

目的 检测肾细胞癌患者癌组织中Periostin基因表达的改变，探讨其相关的临床意义。方法 收集我院2012年12月至2014年3月泌尿外科收治的肾细胞癌患者64例，每例另取癌旁3 cm非癌肾组织作为对照。荧光定量PCR检测Periostin基因表达量。结果 Periostin基因在肾癌组织和癌旁正常肾组织中的表达量分别为0.318±0.076和0.142±0.043，癌旁组织中的表达量显著低于肾癌组织(t=5.36，P<0.01)。Periostin 基因的表达量在不同的年龄、性别和病理类型之间无显著性差异(P>0.05)，高分化患者Periostin 基因表达量为0.242±0.051显著低于中、低分化的0.358±0.086(t=2.62，P<0.05)，无淋巴结转移患者Periostin 基因表达量为0.257±0.057，显著低于有淋巴结转移的0.361±0.082(t=2.51，P<0.05)，临床Ⅰ、Ⅱ期患者Periostin 基因表达量为0.273±0.053，显著低于临床Ⅲ、Ⅳ期的0.354±0.079(t=2.33，P<0.05)。结论 Periostin基因的异常高表达参与了肾细胞癌的发生发展过程，有可能成为肾细胞癌分级以及预后评估的分子标记物。

肾细胞癌；Periostin基因；荧光定量PCR

肾细胞癌是泌尿道常见的恶性肿瘤，早期肾细胞癌往往局限于肾组织局部，肾脏病变部位比较隐蔽，早期诊断困难，患者就诊时多已经发展到中、晚期，错过了最佳治疗时间，因此肾细胞癌的早期诊断和病情的判断是临床急需解决的问题[1]。Periostin又称为成骨细胞特异性因子2 (osteoblast-specific factor-2，OSF-2)，是一种胞外基质分泌性蛋白，近年来的研究显示Periostin蛋白具有抗凋亡以及促进恶性肿瘤新生血管形成的作用，在多种人类恶性肿瘤的细胞系以及实体肿瘤中高表达[2]。本研究检测了肾细胞癌患者肿瘤组织中Periostin基因表达的改变，以探讨其与肾细胞癌的关系及相关的临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集我院2012年12月至2014年3月泌尿外科收治的肾细胞癌需行根治性肾切除术的患者64例，所有病例均经病理证实为肾细胞癌，其中男36例，女28例；年龄41～78岁，平均(61.3±12.2)岁；肾透明细胞癌40例，乳头状肾细胞癌24例；美国癌症联合委员会(American Joint Committee on Cancer，AJCC)分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期22例，Ⅲ期18例，Ⅳ期10例；有淋巴结转移48例，无淋巴结转移16例；Fuhrman分级高分化肿瘤26例，中、低分化肿瘤38例。所有病例术前均未行放化疗或其他肿瘤相关治疗。每例另取手术切除癌旁约3cm非癌肾组织作为对照，均经病理证实未见癌细胞。

1.2 主要试剂和仪器 Trizol、逆转录试剂盒购自美国Invitrogene公司，SYBR Green 荧光定量-PCR试剂盒购自大连宝生物科技有限公司，Periostin和内参引物由上海赛百盛基因技术有限公司合成。7100荧光定量PCR仪为美国ABI公司产品。

1.3 Periostin基因表达的荧光定量PCR检测 每例标本肿瘤和瘤旁对照组织各50 mg，加入PBS淹没组织，超声组织匀浆，1 500 g×10 min，去上清，沉淀组织加入1 mL Trizol混匀，按照试剂盒要求提取组织细胞总RNA，50 μL DEPC双蒸水溶解RNA，每例取2 μg RNA按照试剂盒说明书加入逆转录试剂，反转录出cDNA第一条链，每例取5 μL 加入SYBR Green和引物进行PCR反应，按照Real-试剂盒说明书使用荧光定量PCR仪检测Periostin 基因表达的变化。Periostin引物序列为5′- GGCTAATTGCGGTGCATGGCTGCAAGT-3′(上游)和5′- CCTAATTGCGCCCGGTATAATTGC-3′(下游)，反应条件为：94 ℃ 4 min；94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s 35个循环；72 ℃ 5 min。△Ct值=Ctperiostin值- Ct内参值，Periostin表达量使用2-△Ct评估。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行分析，两组样本均数比较采用t检验，P<0.05为统计学有显著性差异。

2 结 果

2.1 Periostin基因在肾细胞癌组织中的表达 Periostin基因在癌旁组织中的表达量为0.142±0.043，显著低于肾癌组织的0.318±0.076(t=5.36，P<0.01，图1)。

图1 Periostin基因的荧光定量PCR检测

2.2 肾癌组织中Periostin基因表达量与临床各相关指标的关系 Periostin 基因的表达量在不同的年龄、性别和病理类型之间无显著性差异(P>0.05)，高分化患者Periostin 基因表达量显著低于中、低分化(P<0.05)，无淋巴结转移患者Periostin 基因表达量显著低于有淋巴结转移(P<0.05)，临床Ⅰ、Ⅱ期患者Periostin 基因表达量显著低于临床Ⅲ、Ⅳ期(P<0.05)。详见表2。

表2 肾癌患者不同临床指标中Periostin基因表达量的比较

临床指标例数Periostin(2-△Ct)t值P值性别 男280．314±0．062 女240．322±0．0750．820．426年龄(岁) ≥60310．316±0．064 <60350．319±0．0710．790．522病理类型 透明细胞癌400．317±0．068 乳头状细胞癌240．325±0．760．860．604分化程度 高分化180．242±0．051 中、低分化340．358±0．0862．620．024淋巴结转移 无210．257±0．057 有310．361±0．0822．510．029临床分期 Ⅰ、Ⅱ期230．273±0．053 Ⅲ、Ⅳ期290．354±0．0792．330．037

3 讨 论

恶性肿瘤的发生、发展是一个复杂的过程，其中涉及到多种基因的激活或者失活[3]。为了便于客观地明确病变性质、评估病变进展程度，一些与肿瘤相关的分子生物标志物也越来越受到学者们的重视[4]。Periostin是近几年来新确定的一个间质特异基因(mesenchyme specific gene)，位于染色体13q13.3，具有细胞粘附作用的细胞外基质蛋白[5]。由“种子”和“土壤”学说衍生的“土壤”-肿瘤微环境假说使学者们开始关注间质特异基因在肿瘤微环境中的作用[6]，WU等[7]学者在非小细胞肺癌的研究显示基因沉默Periostin可以显著减弱肿瘤细胞的增殖，以及与侵袭相关的上皮向间皮的转变。KYUTOKU等[8]学者的研究显示Periostin基因与乳腺癌的进展和转移密切相关，沉默Periostin基因可以提高乳腺癌化疗的敏感性，并且在乳腺癌干细胞中也发现了Periostin基因高表达。本研究显示了肾癌组织中Periostin基因表达量显著高于癌旁的正常对照组织，提示了Periostin基因的激活也可能参与了肾癌的发生发展过程。

侵袭和转移是恶性肿瘤最主要的特征，肿瘤的侵袭转移是一个复杂、多因素参与的过程，但其具体机制仍不十分清楚[9]。本研究观察到肾癌患者组织中Periostin基因表达量在高分化组显著低于中、低分化组，说明了Periostin基因的上调与肾癌组织分化程度密切相关。Periostin基因表达量在有淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组，说明了Periostin基因的高表达可能参与了肾癌的侵袭和转移，这可能与Periostin可以促进血管生成、提供肿瘤局部增殖的微环境相关。Periostin基因表达量在临床Ⅰ、Ⅱ期组显著低于Ⅲ、Ⅳ期组，说明了Periostin基因表达量的检测可用于患者预后的评估。在一项小细胞肺癌的ELISA分析中也检测到了Ⅰ、Ⅱ期患者血清中Periostin蛋白表达量显著低于Ⅲ、Ⅳ期患者[10]。另外有研究提示Periostin蛋白可作为肿瘤细胞发生上皮间质转化的标志，Periostin蛋白在肿瘤侵袭转移的作用也日益受到关注[9]。上述资料提示了Periostin有可能成为肾癌的一个潜在的治疗靶点。

综上所述，本研究显示肾癌组织中存在Periostin基因的异常高表达，Periostin基因表达量的检测有可能成为肾癌分级以及预后评估的新分子标记物。

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(编辑 何宏灵)

The expression of Periostin in renal cell carcinoma and its clinical significance

LIN Jian-qun, CHEN Xi-bin, ZHANG Rui-hong

(Department of Urology, the Second People’s Hospital of Shantou City, Shantou 515000, China)

Objective To detect the mRNA expression of Periostin in renal cell carcinoma and to explore its clinical significance. Methods A total of 64 patients with renal cell carcinoma treated in our hospital during Dec. 2012 and March 2014 were enrolled in this study. The adjacent healthy tissues of each case served as controls. The mRNA expression of Periostin was detected with Real-time PCR. Results The mRNA expression of Periostin in renal cell carcinoma was 0.318±0.076, which was significantly higher than that in the healthy tissues (0.142±0.043), (t=5.36,P<0.01). There was no difference between patients with different gender, age, and pathological type (P>0.05). The mRNA expression of Periostin in well differentiation group was 0.242±0.051, lower than that in median and low differentiation group (0.358±0.086), (t=2.62,P<0.05). The mRNA expression of Periostin in non-lymph node metastasis group was 0.257±0.057, lower than that in lymph node metastasis group (0.361±0.082), (t=2.33,P<0.05). The mRNA expression of Periostin in stage I and II group was 0.273±0.053, lower than that in stage Ⅲ and Ⅳ group (0.354±0.078), (t=2.33,P<0.05). Conclusion The upregulation of Periostin is involved in the occurrence and development of renal cell carcinoma, which can be used as a biomarker to estimate the differentiation and prognosis of renal cell carcinoma.

renal cell carcinoma; Periostin；Real-time PCR

2015-01-12

2015-03-06

林建群(1974-)，男(汉族)，副主任医师，研究方向为泌尿外科.E-mail：linlin1978@163.com

文献标志码:A DOI：10.3969/j.issn.1009-8291.2015.05.011