不同体质量学龄儿童肠道菌属分布特征分析

杨 华 (内蒙古包头市一机医院，内蒙古包头014030)

0 引言

肠道菌数是一种Gram阴性杆菌，存在于人和动物的肠道中，机体免疫力下降时，容易发生肠道杆菌感染.肠道菌是人体中一种重要的调控元件，能够帮助机体进行能量管理、代谢调控及免疫应答.随着肥胖问题逐渐出现，儿童肥胖问题甚得关注.自1980年以来，全球肥胖发病率不断上升，其中肥胖/超重的成年人比率增长了28%，儿童增长了47%［1］.导致肥胖的因素多是患者肠道菌属分布存在问题.据相关研究发现，儿童肥胖与肠道菌群的分布存在着密切的联系.为了进一步明确肠道菌分布情况与儿童肥胖的关系，本研究对124例不同体质量学龄儿童肠道菌属分布特征进行研究和分析.

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取本地区2013-12/2014-12分层随机抽样出的124例不同体质量的儿童为研究对象，儿童年龄7～13(平均10.3)岁.按照体质量指数BMI分为正常组(n=62)和肥胖组(n=62).分别采集所有患者清晨空腹大便样本，并在30 min之内置于-20℃的冰箱中冷冻保存.所有儿童均根据WHO［2］的肥胖判定标准，结合我国肥胖工作组标准选择，排除患有内分泌、遗传及代谢和中枢神经等疾病的儿童.

1.2 纳入标准 肥胖组纳入标准:儿童年龄在7～13岁，符合我国肥胖工作组标准判定，排除有多重内分泌及遗传和神经系统疾病.收集大便样本前2周内未服用抗生素，排除有应急状态、腹痛、便秘等多种胃肠道症状的儿童.

1.3 测定方法 大便基因组DNA提取方法:所有大便样本均统一使用电子天平秤取，取200 mg置于离心管中，以13，000 r/min的速度在离心机上做3 min离心，去除渣质，除去沉淀物后置于PBS缓冲液中再次进行离心.去除上清液直到澄清为止，将样本放置到5 mL的离心管中并置于-20℃的冰箱保存备用.使用 Omega DNA Stool Mini Kit试剂盒［3］，提取大便基因组的DNA，并通过紫外分光光度法来检验DNA的纯度.

16SrRNA鉴定方法:采用荧光定量聚合酶链反应检测常见菌属的数量，首先，提取大便DNA中的6种细菌做荧光定量聚合酶链反应，每个样品要做3个平行复孔，并详细记录其Ct值.根据埃希菌属、双歧杆菌属、拟杆菌属及乳酸杆菌属、梭菌属、肠球菌属的16SrRNA 的基因 V3-V6 序列，通过 Premier5.0［4］来设计相应的菌属PCR引物，并由BLAST基因库进行引物序列特异性对比，并计算Ct的值，最后经转换后得出菌属基因拷贝数.

1.4 统计学处理 采用SPSS20.0统计学软件进行数据分析，计量资料以±s表示，行 t检验，计数资料行χ2检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义.

2 结果

2.1 两组儿童6种肠道菌属的分布特点 肥胖组儿童乳酸杆菌属、梭菌属及肠球菌属基因拷贝数显著高于正常组，差异具有统计学意义(P＜0.05);而两组埃希菌属、双歧杆菌及拟杆菌数量相比，差异无统计学意义(P ＞0.05，表1).

表1 两组儿童6种肠道菌属的分布特点 (±s)

表1 两组儿童6种肠道菌属的分布特点 (±s)

aP ＜0.05 vs正常组.

组别 埃希菌属 双歧杆菌属 拟杆菌属 乳酸杆菌属 梭菌属 肠球菌属正常组 7.03 ±0.687.11 ±0.456.79 ±0.317.45 ±0.125.58 ±0.716.53 ±0.62肥胖组 7.09 ±0.627.25 ±0.416.81 ±0.327.51 ±0.11a5.86 ±0.71a6.81 ±0.63a

2.2 不同性别间肠道菌属分布特征 124例儿童中，男童77例，女童47例，双歧杆菌属在女童中的数量低于男童，差异具有统计学意义(P＜0.05，表2).

表2 不同性别间肠道菌属分布特征 (±s)

表2 不同性别间肠道菌属分布特征 (±s)

aP ＜0.05 vs男童.

组别 n 埃希菌属 双歧杆菌属 拟杆菌属 乳酸杆菌属 梭菌属 肠球菌属男童 77 6.72 ±0.766.84 ±0.496.61 ±0.457.51 ±0.165 6.58 ±0.437.52 ±0.125.90 ±0.656.43 ±0.63.86 ±0.756.45 ±0.62女童 47 6.70 ±0.756.59 ±0.43a

3 讨论

人体肠道内存在复杂的生物群落，细菌数量超过了1000种，其基因组信息被并称为“肠道元基因组”，肠道菌属关系着人机体的能量管理、代谢调控及免疫应答.多项研究证明，肠道菌属不仅是宿主调节吸收营养元素的重要因素，更是影响宿主循环系统内毒素平衡情况以及宿主肥胖的关键［5］.目前，有关人肠道菌属与肥胖体质之间联系的研究逐渐受到更多人的认可，但因肠道菌属群体数量庞大，对于其是否会引起肥胖的相关问题，目前研究还不成熟.本研究主要是对学龄儿童肠道内6种常见的重要菌属分布特征进行分析，对不同体质量的儿童肥胖与肠道菌属分布特征之间的联系进行研究［6］.

研究结果显示，肥胖组儿童的乳酸杆菌属、梭菌属及肠球菌属下相对数量高于正常组儿童，差异具有统计学意义(P＜0.05);两组间埃希菌属、双歧杆菌属及拟杆菌属比较，差异无统计学意义(P＞0.05).对儿童的性别、年龄等资料进行分层分析，发现双歧杆菌属在女童中的数量低于男童，差异具有统计学意义(P＜0.05);其余常见肠道菌与性别、年龄之间的关系比较，差异无统计学意义(P＞0.05).因此，学龄儿童肠道菌属分布受儿童性别及年龄的影响较小，而不同体质量肥胖与乳酸杆菌属、梭菌属、肠球菌属的分布特征有着密切的关系.

［1］刘 利，徐佩茹，李 敏，等.新疆伊犁地区不同体质量学龄儿童肠道菌属分布特征分析［J］.中华实用儿科临床杂志，2014，29(7):502-505.

［2］葛樯樯.肠道内和肠道外感染气单胞菌的分布、基因分类和耐药性分析［D］.浙江:温州医科大学，2013.

［3］高志光，高仁元，伍 雯，等.不同结肠部位肠道菌群分布特征与结直肠癌的相关性研究［C］.中华医学会肠外肠内营养学分会第八届全国肠外肠内营养学术大会论文集.2014.

［4］曹歆轶，林 萍，蒋 平，等.儿童孤独症谱系障碍胃肠道细菌学研究的系统综述［J］.上海精神医学，2013，25(6):342-352.

［5］郑晓皎.肠道菌-宿主代谢物组的分析平台的建立及应用［D］.上海:上海交通大学，2013.

［6］陈祥娥.Heparosan的提取分离及其对肠道菌作用的研究［D］.山东:山东大学，2012.