尼美舒利对豚鼠心乳头肌动作电位和收缩力的影响

吴建萍等

[摘要] 目的 观察尼美舒利（Nim）与吡那地尔（Pin）对豚鼠心乳头肌动作电位和收缩力的影响。 方法 选取华中科技大学同济医学院实验动物学部提供的符合实验标准的健康豚鼠54只，将其随机分为6组，溶剂对照组（DMSO组）、Pin 1 μmol/L组、Pin 10 μmol/L组、Nim 1 μmol/L组、Nim 3 μmol/L组、Nim 10 μmol/L组，每组各9只豚鼠。每组取豚鼠右心室乳头肌，用氧饱和的Tyrode液30 mL持续表面灌流，温度（37±1）℃，平衡30 min后进行实验，分别用不同浓度的Nim（1、3、10 μmol/L）和Pin（1、10 μmol/L）进行灌流。用标准微电极技术记录豚鼠心乳头肌细胞动作电位复极20%（APD20）、复极50%（APD50）、复极90%（APD90）的时间，同步记录乳头肌收缩力。再用无药台氏液冲洗120 min，观察结果。 结果 Nim 3 μmol/L、Nim 10 μmol/L和Pin 10 μmol/L可显著缩短豚鼠心乳头肌细胞APD20、APD50、APD90的时间。二者对0相最大上升速度和收缩力均无明显影响。用无药台氏液冲洗120 min后，被Nim缩短的动作电位时程可恢复至给药前水平。 结论 Nim可显著缩短豚鼠心乳头肌动作电位时程，且此效应可逆，对收缩力无影响。

[关键词] 尼美舒利；心乳头肌；动作电位；收缩力

[中图分类号] R962 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）10（a）-0026-04

Effect of Nimesulide on action potential and contraction force of guinea pig papillary muscles

WU Jianping1 HU Yan2 JIN Manwen2 LIU Linghua1 LIU Haixia1

1.Pharmacology Teaching and Research Section， Hubei College of Chinese Medicine， Hubei Province， Jingzhou 434100， China； 2.Department of Pharmacology， Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology， Hubei Province， Wuhan 430030， China

[Abstract] Objective To investigate the effect of Nimesulide （Nim） and pinacidil （Pin） on action potential and contractile force of guinea pig papillary muscles. Methods 54 guinea pigs of experimental standard were selected from Department of Laboratory Animal in Tongji Medical College， they were randomly divided into six groups， the solvent control group （DMSO group）， Pin 1 μmol/L group， Pin 10 μmol/L group， Nim 1 μmol/L， Nim group 3 μmol/L group， Nim 10 μmol/L group， and 9 guinea pigs in each group. Each guinea pig papillary muscle were provided with 30 mL oxygen-saturated Tyrode， the temperature was （37±1）℃， continuous superfusion， after equilibration experiments for 30 min， the muscles were perfused with different concentrations of Nim （1， 3， 10 μmol/L） and Pin （1， 10 μmol/L）. The time of repolarization 20% （APD20）， repolarization of 50% （APD50）， repolarization of 90% （APD90） about the action potential duration （APD） of guinea pig papillary muscles were recorded by standard microelectrode， and muscle contractile force were recorded at the same time. The non-drug-tyrode was washed for 120 min and the results were observed. Results The results showed that Nim 3， 10 μmol/L and Pin 10 μmol/L can significantly shorten the time of APD20， APD50， APD90 of the guinea pig papillary muscle cell. Both the contractile force and maximum velocity had no significant influence. After non-drug-tyrode for 120 min， APD was recovered to the level before administration. Conclusion Nim can significantly shorten APD of guinea pig papillary muscles， and the effect is reversible， and has no effect on the contraction.

[Key words] Nimesulide； Papillary muscles；action potential； Contraction force

尼美舒利（Nimesulide，Nim）化学名为4-硝基-2-苯氧基甲磺酰苯胺是磺酰苯胺的衍生物，是一种选择性抑制环氧化酶（COX-2）的非甾体抗炎药，最新的研究表明尼美舒利还有抗氧化、抑制增殖、诱导细胞调亡、抑制血管生成等作用，对肿瘤有一定的预防和治疗作用[1-2]。目前，非甾体抗炎药（NSAIDs）是全球处方量最大的药物之一，在内、外、妇、儿科使用广泛。尼美舒利因其独特的药理作用机制曾被认为是一种有良好发展前景的胃肠道反应少、安全性好的非甾体抗炎药。近期国内外关于COX-2抑制剂引起心血管不良反应的事件时有报道[3-5]，但有关COX-2抑制剂对心肌电生理的影响鲜有报道。本研究采用标准玻璃微电极技术、同步记录收缩力的方法，比较分析Nim和吡那地尔（Pinacidil，Pin）对豚鼠心乳头肌收缩力和细胞动作电位的影响。

1 材料与方法

1.1动物及模型制作

选取华中科技大学同济医学院实验动物学部提供的符合实验标准的普通级健康豚鼠54只（合格证号：00005907），体质量（300±50）g，雌雄不限，室内动物房分笼饲养，统一饲料，自由采食和饮水。实验随机分为6个组：溶剂对照组，即DMSO组（Dimethyl sulphoxide，二甲基亚砜）、Pin 1 μmol/L组、Pin 10 μmol/L组，Nim 1 μmol/L组、Nim 3 μmol/L组、Nim 10 μmol/L组，每组均为9只。

1.2 主要试剂和仪器

Tyrode液成分：NaCl 137 mmol/L，CaCl2 1.8 mmol/L，KCl 5.4 mmol/L，NaHCO3 11.9 mmol/L，MgCl2 1.05 mmol/L，葡萄糖溶液5.5 mmol/L，NaH2PO4 0.42 mmol/L。pH：7.2～7.4。实验前新鲜配制Tyrode液1000 mL：首先在容器中加入约600 mL的双蒸水，将容器置于磁力搅拌器上持续搅拌。分别称取葡萄糖溶液和NaHCO3各1.0 g，将其陆续加入持续搅拌的容器中。准确量取储存液Ⅰ40 mL、储存液Ⅱ10 mL、储存液Ⅲ 10 mL，分别依次缓慢加入容器中，加双蒸水定容至1 L。配成的营养液一般保存24 h。Nim、Pin购于SIGMA公司（纯度≥99%），用DMSO配成储备液，DMSO在浴槽中的终浓度控制在0.1%以内。仪器及设备离体心肌玻璃浴槽装置采用超级恒温器（HSS-1B型）、程控电刺激器（YC2）、WD-1型微电极拉制仪、微电极放大器、输入记录系统（RM6240C型多道生理信号采集处理系统）为成都仪器厂产品。

1.3 实验方法

豚鼠心室乳头肌标本的制备[6]：将各组的豚鼠击昏致死，经颈总动脉放血后，迅速取出的心脏，置入经95%O2+5%CO2混合气体饱和的Tyrode液中。分离右心室乳头肌，两端用3-0丝线结扎后水平放入1 mL的恒温浴槽中，一端套在张力换能器的小钩上，另一端固定在标本池中的站柱上。温度控制在（37±1）℃，用30 mL氧饱和的Tyrode液持续表面灌流，流速4 mL/min。给予标本0.5 g的前负荷，以波宽3 ms，频率1 Hz，110%～150%阈电压的刺激驱动标本，记录乳头肌的收缩力，平衡30 min后进行实验，分别用不同浓度的Nim（1、3、10 μmol/L）和Pin（1、10 μmol/L）进行灌流其间换液1次。Nim 10 μmol/L组在给药后再用无药Tyrode液进行冲洗，观察APD恢复时间。

动作电位时程（action potential duration，APD）的记录用有芯毛细管在WD-1型微电极拉制仪进一步拉制成玻璃微电极，电极电阻约为10 MΩ，用3 mol/L的KCl溶液充灌。将充灌好的微电极固定在三维操纵器上，插入铂金丝引导电极。电极入水后调零，缓慢插入电极，直至引出稳定的APD。APD信号经微电极放大器输入记录系统。在引出稳定的APD图形30 min后加药，观察30 min，每5 min记录1次。同时记录各组豚鼠心肌张力及0相最大速度（Vmax）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Nim、Pin对豚鼠APD和收缩力的影响

Pin 10 μm组的APD20、APD50、APD90较DMSO组明显降低，差异均有统计学意义（P < 0.05）；Nim 3 μm组、Nim 10 μm组与DMSO组相比明显降低，差异均有高度统计学意义（P < 0.01）。Nim、Pin对豚鼠收缩力和Vmax均无明显变化（P > 0.05）。结果提示，Nim 3 μmol/L、Nim 10 μmol/L和Pin 10 μmol/L可显著缩短豚鼠心乳头肌细胞APD20、APD50、APD90的时间，而对Vmax和收缩力均无明显影响。见表1、图1。

2.2 Nim对豚鼠心乳头状肌APD缩短的作用可逆

豚鼠心乳头状肌在给予Nim 10 μmol/L后，用无药的Tyrode液进行了冲洗，冲洗结果显示，APD缩短的各指标经过冲洗120 min后，基本恢复到给药前水平。这表明了Nim对豚鼠心乳头状肌APD缩短的这一作用是可逆的，是可以洗脱的。见图2。

3 讨论

Nim属非甾体抗炎药，据美国食品药品管理局报道[7-8]：针对多种COX-2选择性或非选择性非甾体类抗炎药持续时间达3年的临床试验显示，Nim可能引起严重的不良事件、中风和心肌梗塞的风险增加，且其风险性可能是致命的。所有的非甾体类抗炎药，都可能有相似的风险[9]。其中有心血管疾病危险因素或心血管疾病的患者，会有更大的风险。即使患者既往没有心血管症状，医生和患者也要警惕该类事件的发生发展。医生应告知患者严重心血管安全性的症状、体征以及如果发生应采取的措施、步骤；患者应警惕诸如胸痛、无力、气短、言语含糊等症状和体征，而且当有任何上述症状或体征发生后应立刻寻求医生帮助。