高效液相色谱法测定二氧化氯固体消毒剂中DL-酒石酸的含量

张景艳，张宏，陈化琦*，徐继英

(1. 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，兰州 730050； 2. 甘肃省兽药饲料监察所，兰州 730030；3. 西北民族大学，兰州 730050)

高效液相色谱法测定二氧化氯固体消毒剂中DL-酒石酸的含量

张景艳1，张宏2，陈化琦1*，徐继英3

(1. 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，兰州 730050； 2. 甘肃省兽药饲料监察所，兰州 730030；3. 西北民族大学，兰州 730050)

为了测定二氧化氯固体消毒剂中DL-酒石酸的含量，采用C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，在室温下，以0.4 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调pH至2.4)为流动相，214 nm为检测波长，流速为1.0 mL/min，建立了反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定方法。结果显示，DL-酒石酸在0.2～2.0 mg/mL范围内线性关系良好，R2=0.9999，回收率范围为97.0%～102.3%。本方法简便、准确、快速，可用于二氧化氯固体消毒剂中DL-酒石酸的含量测定。

DL-酒石酸；含量测定；反相高效液相色谱法

DL-酒石酸又称DL-2,3-二羟基丁二酸，为白色至类白色颗粒或结晶性粉末，有酸味[1]，是一种重要的化工原料，它是等量右旋和左旋酒石酸的混合物，广泛地应用于食品、制药、轻工业、化工等行业。二氧化氯固体消毒剂[2]主要由亚氯酸钠和活化剂两部分组成，活化剂中的DL-酒石酸作为H+提供剂来发挥作用，其含量的高低与亚氯酸钠的活化率密切相关，因此,测定二氧化氯固体消毒剂活化剂中DL-酒石酸的含量对研究亚氯酸钠的活化率具有重要意义。

DL-酒石酸含量的测定方法已有不少。酸碱滴定法[1]是测定DL-酒石酸的法定方法，该方法简单、快速，但专属性差，由于该活化剂中除了DL-酒石酸外还含有其他酸性成分，所以酸碱滴定法不能准确地测定二氧化氯固体消毒剂活化剂中DL-酒石酸的含量。文献中报道的分光光度法[3]是利用酒石酸与偏钒酸铵的特异显色反应来测定环氧琥珀酸合成体系中酒石酸的含量，该方法相对标准偏差小于1%,标准误差低于3%，由于该活化剂中其他成分干扰，导致酒石酸与偏钒酸胺反应不显色，无法测定二氧化氯固体消毒剂活化剂中DL-酒石酸的含量。此外还有离子色谱法[4]、液相色谱法[5-7]等。参考上述文献，并综合考虑二氧化氯固体消毒剂活化剂中各组分的物理、化学性质，本文拟建立一种简便、准确、快速的定量方法，用以测定二氧化氯固体消毒剂活化剂中DL-酒石酸的含量。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪(DAD二极管阵列检测器)，Waters600高效液相色谱仪，METTLER AE240 电子天平，METTLER AE100 电子天平。

1.2 试药与试剂 DL-酒石酸对照品(C17137800，20629，Dr.Ehrenstorfer GmbH，99.5%)，二氯异氰尿酸钠(BCBH9028V，SIGMA-ALDRICH，≥98.0%)，DL-酒石酸(广州试剂二厂，860816，≥99.0%)，二氧化氯固体消毒剂样品(批号为：20151001、20151002、20151003)，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：0.4 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调pH至2.4)；流速：1.0 mL/min；检测波长214 nm；柱温：室温；进样量：20 μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取DL-酒石酸对照品200 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成4 mg/mL的对照品储备液。精密量取对照品储备液25 mL，置100 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得到浓度为1 mg/mL的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取二氧化氯固体消毒剂适量(约相当于DL-酒石酸50 mg)，精密称定，置50 mL容量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取与供试品相当的除DL-酒石酸外的二氯异氰尿酸钠等成分，混合均匀后作为阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。2.3 系统适用性和专属性试验 分别取阴性对照溶液、DL-酒石酸对照品溶液和供试品溶液按2.1项色谱条件测定，结果见图1～图3。在该色谱条件下，DL-酒石酸峰与相邻组分峰的分离度大于3.0，理论塔板数按DL-酒石酸峰计不低于8000。阴性对照溶液在与DL-酒石酸对照品色谱峰相应位置无吸收峰，表明处方中其他成分对DL-酒石酸的定量检测无干扰，专属性能满足检测要求。

图1 阴性对照溶液色谱图

图2 DL-酒石酸对照品溶液色谱图

图3 供试品溶液色谱图

2.4 线性范围 精密量取对照品储备液各0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分别置10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得到浓度分别为0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mg/mL的系列对照品溶液。按2.1项下色谱条件测定，以峰面积(Y)对DL-酒石酸的浓度(X, mg/mL)进行线性回归，方程为Y=1645.1X+3.6232(R2=0.9999)。结果表明DL-酒石酸在0.2～2 mg/mL范围内线性关系良好。

2.5 准确度 取批号为20151001的二氧化氯固体消毒剂适量(约相当于DL-酒石酸25 mg)，精密称定，按高(H)、中(M)、低(L)三个浓度水平分别添加DL-酒石酸试药(已知含量为99.0%)，制得向已知含量制剂中添加已知测定物的添加样品，每个浓度水平的添加样品分别制备3份供试品。按2.2.2项制成供试品溶液，进行含量测定，计算回收率，结果见表1。结果表明高中低浓度供试品溶液的回收率为97.0%～102.3%，该方法准确度符合要求。

表1 准确度测量结果

2.6 精密度 取批号为20151002的二氧化氯固体消毒剂6份，按2.2.2项制成供试品溶液，进行含量测定，得RSD=0.3%，结果见表2。结果表明该方法精密度符合要求。2.7 耐用性 取按准确度测定项下制得的样品，保持流动相比例和流速不变，在Waters600和Agilent 1100色谱仪上分别使用Agilent SB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)柱和Agilent XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，于20 ℃、30 ℃、40 ℃条件下进行测试，考察方法的耐用性，结果表明测量无显著差异，说明耐用性良好。

表2 精密度测量结果

2.8 含量测定 取3批消毒粉和1批DL-酒石酸试药，按2.2.2项制成供试品溶液，进行含量测定。结果表明，批号为20151001、20151002、20151003的3批样品DL-酒石酸含量分别为22.6%、22.4%、22.9%，批号为860816的DL-酒石酸试药含量为99.0%。

3 讨论与小结

3.1 活化剂的活化率 二氧化氯固体消毒剂是一种在一定操作条件下能够释放出二氧化氯气体的固体状制品，一般是以稳定性亚氯酸盐为主要原料制备而成，使用上相对方便，但由于须经酸活化才能使用[8]，酒石酸是目前常用的一种固体活化剂[9]，活化剂中的DL-酒石酸作为H+提供剂来发挥作用，其含量的高低与亚氯酸钠的活化率密切相关，因此测定二氧化氯固体消毒剂活化剂中DL-酒石酸的含量对研究亚氯酸钠的活化率具有重要意义。

3.2 流动相的选择 酒石酸是一种优良的酸味剂，在食品工业中，多采用高效液相色谱法测定酒石酸含量,流动相水相多以0.01～0.4 mol/L磷酸缓冲盐为主,常用磷酸二氢钠、磷酸二氢钾等盐溶液(用磷酸调pH)；有机相用甲醇或乙腈，由于酒石酸极性很强,有机相比例多小于5%。有机相比例影响保留时间，pH对分离效果影响很大[8]。选择0.4 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调pH至2.4)能够很好地分离二氧化氯固体消毒剂活化剂中各组分，并且DL-酒石酸出峰时间约为3 min，DL-酒石酸峰与相邻组分峰的分离度大于3.0，理论塔板数按DL-酒石酸峰计不低于8000。

为了有效分离二氧化氯固体消毒剂活化剂中的DL-酒石酸，本试验采用低pH缓冲盐溶液作为溶剂和流动相，所使用色谱柱必须满足耐纯水和耐低pH，以免对色谱柱造成不可逆损害，并在使用后及时用纯水冲洗色谱柱防止缓冲盐析出，堵塞色谱柱和管路。

3.3 测定波长的选择 酒石酸等有机酸多在210 nm附近有较大的吸收[9]，波长越小，对试剂纯度要求越高，越容易受到流动相干扰，但随着测定波长增大，灵敏度降低。分别在210、214、220、254 nm波长处测定二氧化氯固体消毒剂活化剂中DL-酒石酸含量，通过对色谱结果的比较分析，在214 nm波长下测定，能够获得最大的灵敏度和抗干扰能力。

试验采用反相高效液相色谱法，对活化剂样品中DL-酒石酸含量测定进行方法学研究,建立了DL-酒石酸含量测定方法。经专属性、线性、准确度、精密度、耐用性等试验，表明所选用方法简便、准确、快速，可用于二氧化氯固体消毒剂活化剂中DL-酒石酸含量测定。

[1] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典2010年版一部[S].

[2] 卫生部.消毒技术规范2002年版[Z].

[3] 杜娟娟,柏子龙,李树华.分光光度法测定环氧琥珀酸合成体系中的酒石酸[J].精细石油化工,2008,25(3):69-72.

[4] 刘哲,刘克纳,沈冬青,等.有机酸与无机阴离子的梯度离子色谱法分析研[J].色谱,1997,15(4):334.

[5] 郭燕,梁俊,李敏敏,等.高效液相色谱法测定苹果果实中的有机酸[J].食品科学,2012,33(2):227-230.

[6] 李宁,付继莹.高效液相色谱法测定盐酸拓扑替康中酒石酸含量[J].黑龙江医药,2010,23(6):884-885.

[7] 李金昶,王元鸿,崔秀君等.高效液相色谱法分离和测定酒石酸和马来酸[J].分子科学学报,2000,16(2):125-127.

[8] 程仕勇,晋日亚.中国二氧化氯固体制剂的研究与发展[J].无机盐工业,2011,43(2):7-9.

[9] 宋丽英,李素娟.稳定性二氧化氯活化剂活化效果比较[J].中国消毒学杂志,2004,21(4):323-325.

[10]高海燕,廖小军,王善广等.反相高效液相色谱法测定果汁中11种有机酸条件的优化[J].分析化学研究简报,2004,32(12):1645-1648.

(编辑：陈希)

RP-HPLC Determination of DL-tartaric Acid in Solid Chlorine Dioxide Disinfectant

ZHANG Jing-yan1, ZHANG Hong2, CHEN Hua-qi1*, XU Ji-ying3

(1.LanzhouInstituteofHusbandryandPharmaceuticalScienceofCAAS,Lanzhou730050,China;2.GansuInstituteofVeterinaryDrugandFeedInspection，Lanzhou730030，China;3.NorthwestUniversityforNationalities,Lanzhou730050,China)

A method for the determination of DL-tartaric acid in the Solid chlorine dioxide disinfectant Was developed by the reverse high performance liquid chromatography(RP-HPLC).The C18 colum (4.6 mm×250 mm，5μm) was used with the mobile phase consisted of 0.4 mol/L KH2PO4(pH was adjusted to 2.4 by H3PO4) and the detection wavelength of 214 nm.The results showed that DL-tartaric acid had the good linear relationship at the range of 0.2～2.0 mg/mL(R2=0.9999) and the mean recovery rate was 97.0%～102.3%. The method was simple, accurate and fast in the determination of DL-tartaric acid in solid chlorine dioxide disinfectant.

DL-tartaric acid; determination; RP-HPLC

兰州市农业科技攻关项目(2010-1-207)

2016-07-27

A

1002-1280 (2016) 10-0040-04

S859.79