藤黄酸抑制人食管癌ECA-109细胞增殖及MMP2分泌

刘柏林



藤黄酸抑制人食管癌ECA-109细胞增殖及MMP2分泌

刘柏林

目的 探讨藤黄酸（gambogic acid）对人食道癌ECA-109细胞生物学行为的影响。方法 用MTT法检测不同浓度的藤黄酸对ECA-109细胞增殖的抑制的作用；用ELISA实验检测金属蛋白酶MMP2蛋白的表达水平。结果 藤黄酸能明显抑制ECA-109细胞的增殖，IC50值为140.18 mg/L。藤黄酸能抑制ECA-109 细胞分泌MMP2蛋白。结论 藤黄酸对于ECA-109细胞可以抑制其增殖，并能抑制其分泌MMP-2蛋白的功能。

食道癌；ECA-109；藤黄酸

食道癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，病理上以食管鳞状细胞癌为主。食道癌患者早期症状不明显，很多患者发现时已经是中晚期，手术效果差，5年生存率10%左右［1］。为了提高生存率，需要发现新的化疗药物，近年来研究发现，藤黄酸抑制淋巴瘤、结肠癌、胃癌等细胞生长，具有良好的抗癌活性［2-4］。因而，我们采用体外实验，研究藤黄酸对人食道癌细胞ECA-109生长的抑制作用，为藤黄酸用于食道癌的治疗提供一定的研究数据。

1　材料与方法

1.1实验材料与仪器

藤黄酸购自Sigma-Aldrich公司，从美国ATCC公司购得人食道癌细胞系ECA-109，MTT购于Serva公司，胎牛血清和RPMI-1640培养液购自美国Gibico公司，MODE1680酶联免疫分析仪为Bio-RAD公司产品，MMP2 ELISA试剂盒购自德国IBL公司。

1.2实验方法

1.2.1MTT法 细胞重悬，并接种于96孔板，每孔细胞总量为100 μl，将其密度调整为2×104至4×104个细胞/孔，常规设立3个复孔，37℃，培养24 h后，不同浓度的藤黄酸被添加入相应的孔中，将等量培养基加入空白对照组中。常规培养48 h后，每孔加入MTT （10 mg/Ml） 20 μl，温箱中常规培养，4 h后吸弃上清液，然后每孔添加DMSO 150 μl/孔，震荡、混匀，在酶标仪上检测490 nm波长处的光密度（OD）值，计算抑制率和IC50。

2　结果

2.1藤黄酸抑制ECA-109 细胞的增殖

48 h后，藤黄酸12.5、25、50、100、200、400 mg/L 作用于ECA-109细胞，48 h抑制率分别为（4.21±0.24）%、（6.32±0.47）%、（10.03±0.42）%、（36.54±0.47）%、（71.42±1.22）%、（82.75±2.01）%，分别与空白对照组［抑制率为（0.00±0.00）］相比较，差异具有统计学意义，P＜0.05，IC50值为140.18 mg/L。

2.2藤黄酸抑制MMP2的分泌

根据IC50值选用不同浓度藤黄酸（70 mg/L，140 mg/L和280 mg/L）进行ELISA检测，测得MMP2值分别为（7.13±0.87）μg/L、（4.27±0.74）μg/L、（2.89±0.53）μg/L，明显低于空白组细胞组（9.76±1.12）μg/L，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3　讨论

藤黄酸是中药藤黄的活性成分，具有抗癌活性，它通过多种机制抑制肿瘤细胞增殖。梁小庆等研究发现藤黄酸可以通过调节端粒酶逆转录酶mRNA表达，进而抑制MCF-7 细胞端粒酶活性（端粒酶的激活有利于细胞的永生化），抑制细胞增殖［5］。王勇［6］等研究发现，藤黄酸可以通过NF-κB信号通路，调节Cyclin D3和Cyclin E的表达，扰乱细胞周期，进而抑制细胞增殖。藤黄酸可通过下调核孔蛋白Nup88表达量，诱导U937白血病细胞的凋亡［7］。我们研究表明，实验组（70 mg/L，140 mg/L和280 mg/L藤黄酸）细胞抑制率，明显高于空白对照组细胞，提示藤黄酸能够抑制ECA-109细胞增殖，这和其他学者相类似［2-3，5-7］。研究表明金属蛋白酶MMP2能降解细胞外基质，在肿瘤中高表达，促进肿瘤细胞侵袭和迁移［8］。我们研究表明实验组（70 mg/L，140 mg/L和280 mg/ L藤黄酸）细胞MMP2分泌量，明显低于空白组细胞的分泌量，提示藤黄酸能够抑制ECA-109细胞分泌MMP2。MMP2能降解细胞外基质，对肿瘤细胞侵袭力有促进作用，当MMP2分泌下降时，ECA-109细胞迁移，侵袭力必然降低。根据我们的实验结果可以推断出，藤黄酸可能抑 制食管癌细胞的侵袭和迁移。

总之，藤黄酸能够抑制ECA-109细胞的增殖，并减少MMP2的分泌，提示其具有抗食道癌的潜能，其具体作用机制，还需进一步研究。

［1］周莹，张志强.食管癌的防治进展［J］.中国中西医结合消化杂志，2016，24（4）:321-324.

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Gambogic Acid Inhibits Proliferation and MMP2 Secretion of Human Esophageal Cancer Cell Line ECA-109

LIU Bolin Department of Laboratory and Pharmacy，Jiangsu Vocational College of Nursing，Huaian Jiangsu 223300，China

Objective It is to research the effect of gambogic acid （GA）on the biological behavior of human esophageal squamous cell carcinoma in ECA-109 cells.Methods The effects of gambogic acid on proliferation of ECA-109 cell was detected by MTT assay.ELISA assay was used to detected the level of MMP2.Results Gambogic acid can significantly inhibit the proliferation of ECA-109，IC50 is 140.18 mg/L.Gambogic acid aslo can inhibit the ECA-109 from secreting MMP2 protein.Conclusion As for ECA-109，gambogic acid can inhibit its proliferation as well as inhibit it from secreting MMP2 protein

Esophageal squamous cell carcinoma，ECA-109，Gambogic acid

R735

A

1674-9308（2016）21-0130-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.21.077

江苏护理职业学院检验药学系，江苏 淮安 223300

1.2.2ELISA法 将对数生长期细胞，消化，重悬，并将其接种在6孔板内，每组常规设立3个复孔，24 h常规培养，将不同浓度藤黄酸（70 mg/L，140 mg/L和280 mg/L）添加入实验组，同体积培养基加入空白对照组孔中，37℃，培养48 h后，收集细胞上清液，保存在-80°C冰箱内，上酶标仪检测时取出。在MODE1680酶联免疫分析仪上，于450 nm波长处检测各孔A（吸光度）。

1.3观察指标

主要观察以下指标：（1）藤黄酸作用ECA-109细胞抑制率，肿瘤细胞生长抑制率=［1-（实验组OD值组/空白对照组OD值］×100%。（2）藤黄酸作用于食道癌细胞IC50值（ECA-109细胞增殖受抑制一半时藤黄酸的浓度）。（3）各浓度组藤黄酸作用于食道癌细胞MMP2值。

1.4统计学方法

采用SPSS 17.0软件对本研究的所有数据进行统计分析，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。