双歧三联活菌胶囊治疗溃疡性结肠炎的疗效及其对CD4 +CD25 +调节性T细胞和IL-10 的影响

赖洁莹，郝丽萍，宋思宇

(珠海市第二人民医院消化内科，广东珠海519000)

双歧三联活菌胶囊治疗溃疡性结肠炎的疗效及其对CD4 +CD25 +调节性T细胞和IL-10 的影响

赖洁莹，郝丽萍，宋思宇

(珠海市第二人民医院消化内科，广东珠海519000)

目的探讨双歧三联活菌胶囊辅助治疗溃疡性结肠炎(UC)的临床疗效及其对CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10的影响。方法选取溃疡性结肠炎患者87例，采用随机数表法分为观察组45例和对照组42例。对照组给予抗生素及5-氨基水杨酸制剂奥沙拉嗪钠胶囊进行常规对症治疗，观察组在常规对症治疗基础上加用双歧三联活菌胶囊治疗。比较两组患者治疗前后的结肠炎症评分、CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10变化及临床疗效。结果治疗后观察组的总有效率为86.67%，明显高于对照组的69.05%，差异有统计学意义(P＜0.05)；治疗前两组结肠症状评分比较差异无统计学意义(P＞0.05)，治疗后观察组结肠症状评分明显低于对照组，差异有显著统计学意义(P＜0.01)；治疗前两组CD4+CD25+调节T细胞占CD4+T细胞比例及IL-10水平值比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，治疗后观察组CD4+CD25+调节T细胞占CD4+T细胞比例及IL-10水平均明显高于对照组，差异均有显著统计学意义(P＜0.01)。结论歧乳杆菌三联活菌胶囊辅助治疗UC患者疗效确切，且CD4+CD25+调节性T细胞比例及IL-10水平均有明显升高，在改善患者肠道内微生物平衡中具有显著作用，值得推广应用。

双歧三联活菌胶囊；溃疡性结肠炎；调节性T细胞；影响

溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)属炎性肠病之一，病变局限于大肠黏膜及黏膜下层，乙状结肠、直肠是病发主要部位。该病病程漫长，且复发率搞，不易根治[1]。调查显示，近年来UC发病率逐年上升且多发于20～30岁人群[2]。UC患者肠道中存在菌群失调，临床治疗的关键在于为机体正常菌群提供良好的内微生态环境，阻止致病病菌、病毒侵入，进而逐步减轻或改善患者肠道炎症[3]。目前，微生态制剂在溃疡性结肠炎的治疗作用及其机制已倍受医疗界广泛关注和重视。临床研究[4]指出，双歧三联活菌胶囊由长型双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌3种细菌组成，在改善UC患者肠道内微生物平衡具有显著的效果。基于此，近年来我院在UC患者治疗中应用双歧三联活菌胶囊进行治疗，并取得了显著的疗效，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2012年6月至2014年10月期间我院收治的87例UC患者作为研究对象。所有患者均结合内镜、病理组织学检查及临床表现确诊，且符合《中国炎症性肠病诊断治疗规范的共识意见》[5]中溃疡性结肠炎的诊断标准；同时排除感染或其他非感染性结肠炎等患者。87例UC患者中男性41例，女性46例；年龄21～65岁，平均(42.84±3.21)岁；病程0.4～8.9年，平均(1.43±0.83)年；根据D'Haens等[6]改良的严重程度分型标准，对UC患者病情进行评估，其中轻度28例，重度59例。在患者及其家属知情同意并签署《知情同意书》下，采用随机数表法将所有患者随机分为观察组45例和对照组42例。观察组中男性18例，女性27例；年龄21～64岁，平均(43.09±2.78)岁；病程0.4～8.6年，平均(1.45±0.79)年；病情轻度13例，重度32例。对照组中男性23例，女性19例；年龄22～65岁，平均(42.28±2.63)岁；病程0.5～8.9年，平均(1.43±0.66)年；病情轻度15例，重度27例。两组患者的性别、年龄、病程、病情程度等一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法(1)对照组：给予常规对症治疗，选用抗生素及5-氨基水杨酸制剂奥沙拉嗪钠胶囊(浙江众益药业有限公司，批准文号：国药准字H20010061，生产批号：20120218，规格：0.25 g)温水口服，1.0 g/次，每天一次。连续治疗6个月。(2)观察组：在常规对症治疗基础上，加用微生物制剂双歧乳杆菌三联活菌胶囊(晋城海斯制药有限公司，批准文号：国药准字S19993065，生产批号：20120919，规格：210mg)温水口服，2.0 g/次，2次/d。连续治疗6个月。

1.3 观察指标

1.3.1 结肠炎症评分治疗前后均在患者病变处取活检6块，由两位经验丰富的病理学专家读片，取3个高倍镜视野观察指标的平均值作为最终结果：0级为正常，计0分；1级表现为上皮及黏膜下出现轻微的炎性渗出、水肿、片状黏膜糜烂及毛细血管扩张，计1分；当标本1级特征出现超过50%为2级，计2分；3级表现为溃疡深达黏膜肌层或黏膜下层并伴以中性粒细胞为主的渗出，计3分；当标本3级特征超过50%为4级，计4分。

1.3.2 外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，离心后观察组PBMC加入2 μl抗人CD4-FITC和CD25-APC，对照组加入APC标记的鼠抗人IgG-1和FITC标记的鼠抗人IgG-1各20 μl；避光处孵育30 min；去除未结合的抗体，将加入破膜固定剂孵育1 h，用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗2次，后用200 μl PBS溶液重悬，利用流式细胞测定仪测定PBMC中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例。

1.3.3 血清IL-10的检测所有患者取清晨空腹肘静脉血5 ml，置于-20℃冰箱内待测，采用ELISA法测量血清IL-10含量，(试剂盒购于美国BD公司；IL-10单克隆抗体购于美国Santacruz公司)，本研究所有操作严格按照仪器说明书或试剂盒说明书进行。

1.4 疗效判断标准根据文献[7]并结合治疗后患者临床症状改善及内镜检查情况拟定：(1)治愈：患者临床症状完全消失，内镜检查结果显示肠黏膜恢复正常；(2)有效：患者临床症状基本消失，胃镜检查结果显示部分肠黏膜基本恢复正常；(3)无效：患者临床症状及内镜检查均无改善甚至有加重现象。总有效率=治愈率+有效率。

1.5 统计学方法应用SPSS19.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用t检验；计数资料用百分比表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床疗效比较经治疗，两组患者病情均有明显好转，观察组总有效率为86.67%，明显高于对照组的69.05%，差异具有统计学意义(χ2=3.951，P＜0.05)，见表1。

表1 两组患者的临床疗效比较[例(%)]

2.2 治疗前后结肠炎症评分比较治疗前两组患者的结肠炎症评分比较差异无统计学意义(P＞0.05)。治疗后，两组结肠炎症症状均有明显改善(P＜0.05)，且观察组的改善明显优于对照组，差异有显著统计学意义(P＜0.01)，见表2。

表2 治疗前后两组结肠炎症评分比较（±s，分）

表2 治疗前后两组结肠炎症评分比较（±s，分）

组别治疗前治疗后t值P值观察组(n=45)对照组(n=42) t值P值2.76±0.39 2.65±0.42 1.267＞0.05 0.79±0.21 2.34±0.41 22.411＜0.01 29.035 3.480＜0.01＜0.05

2.3 治疗前后血清CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10值比较治疗前两组患者的血清CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比及IL-10水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；治疗后两组患者的上述指标均有明显升高(P＜0.05)，且观察组的升高更加显著与对照组比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01)，见表3。

表3 治疗前后两组患者的血清CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10值比较(±s)

表3 治疗前后两组患者的血清CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10值比较(±s)

注：与治疗前比较，aP＜0.01，bP＜0.05。

组别CD4+CD25+调节性T细胞比例(%) IL-10(ng/L)治疗前治疗后治疗前治疗后观察组(n=45)对照组(n=42) t值P值5.54±0.86 5.73±0.91 1.001＞0.05 9.63±0.92a6.88±0.65a15.998＜0.01 15.34±1.09 14.99±1.78 1.114＞0.05 18.73±1.47a16.01±1.56b8.383＜0.01

3 讨论

UC属慢性炎性肠病，发病机制至今尚未明确，临床主要表现为该病患者主要伴有腹泻、腹痛及黏液浓血便等临床症状，且具有病程长、易反复等特征，长期影响患者健康及生活质量。研究发现UC病发可能与感染、免疫机制、遗传及环境因素等多种因素密切相关，尤其是肠道黏膜免疫系统异常[8]。研究显示，因UC病变累及结、直肠黏膜及黏膜下层，久治不愈易引发肠穿孔、炎性息肉及癌变发生[9]。

奥沙拉嗪钠胶囊由两分子的5-ASA偶合而成，是新型5-ASA衍生物，可抑制引起炎症的前列腺素的合成及增强细胞膜通透性，在改善UC患者病情具有一定效果。但一旦停止服用患者病情则易反复，而长期服药情况下易增强患者耐药性、并发软便及腹泻等并发症，疗效不稳定。由于UC患者存在免疫异常现象，而微生态制剂对机体的免疫功能有一定的调节作用，因此微生态制剂对UC的疗效可能与患者免疫系统功能相关[10]。既往报道，CD4+CD25+调节性T细胞具有免疫抑制性和免疫无能性两大功能特征，其机制是通过抑制自身T细胞的免疫反应，降低T细胞活性，促进抑制性细胞因子的活化，如IL-10、TGF-β1等，在自身免疫疾病的发生中起到重要的作用[11]。目前，微生态制剂在溃疡性结肠炎的治疗作用及其机制已倍受医疗界广泛关注和重视。双歧三联活菌胶囊是由长型双歧杆菌、保加利亚乳杆菌及嗜热链球菌猿3种细菌组成，能够促进患者肠道正常菌群的繁殖，有利于维持肠内微生态平衡，阻止致病菌及病毒入侵，进而缓解肠道炎症反应。

本研究中，观察组即在常规对症治疗基础上加用双歧三联活菌胶囊进行辅助治疗，从临床疗效来看，该组患者总有效率高达86.67%，明显高于对照组(69.05%)(P＜0.05)。提示：双歧三联活菌胶囊治疗UC疗效确切。同时，治疗后该组患者结肠炎症评分较治疗前明显降低(P＜0.05)，且显著低于对照组(P＜0.01)。提示：双歧三联活菌胶囊能循序渐进缓解UC患者临床症状，进一步证实了其改善UC患者病情中效果。此外，治疗后观察组CD4+CD25+调节性T细胞的比例及IL-10水平均出现明显升高(P＜0.05)，且显著高于对照组(P＜0.05)。表明：微生物制剂双歧乳杆菌三联活菌胶囊可改善UC患者肠道菌群，提高CD4+CD25+调节性T细胞的比例，恢复UC患者IL-10水平，控制肠道炎症反应，对维持机体正常的免疫机制具有重要的作用。分析原因：CD4+CD25+调节性T细胞在机体内的变化与肠道菌群存在相关[12]，主要表现为以下两方面：其一，该细胞的产生可能与肠道长时间处于正常菌群下外源性抗原诱导相关；其二，肠道菌群可抑制树突状细胞的成熟，促进CD4+CD25+调节性T细胞的增殖与发育，对正常菌群产生免疫耐受。因此，机体内CD4+CD25+调节性T细胞比例变化课提示机体内菌群出现失调[13]。IL-10是具有抑制巨噬细胞、单核细胞作用的生物活性物质，具有控制肠道炎症的作用，微生态制剂在治疗UC患者肠道黏膜免疫紊乱过程中，机体IL-10的分泌增加，使血清及黏膜中的IL-10升高，进一步控制肠道炎症，这可能是微生态制剂在治疗UC的作用机制之一[14]。若血清CD4+CD25+调节性T细胞的比例及IL-10水平均有升高，则表明机体内肠道菌群协调，肠道炎症控制效果也较佳[15]。观察组用药后CD4+CD25+调节性T细胞的比例及IL-10水平均有升高，肠道严重改善及控制效果明显较佳。

综上所述，微生物制剂双歧乳杆菌三联活菌胶囊对UC具有一定辅助治疗效果，其作用机制可能与能够改善肠道菌群，抑制肠道有害菌及条件致病菌生长有关。此外，CD4+CD25+调节性T细胞及IL-10参与UC的发生发展。

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Clinical efficacy of bifidobacteria triple viable capsule and its effects on the levels of CD4+CD25+regulatory Tcells and IL-10 in patients with ulcerative colitis.

LAI Jie-ying,HAO Li-ping,SONG Si-yu.Department of Gastroenterology,the Second Municipal People's Hospital,Zhuhai 519000,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the clinical efficacy of bifidobacteria triple viable capsule and its effects on the levels of CD4+CD25+regulatory T cells and IL-10 in patients with ulcerative colitis(UC).MethodsEighty-seven patients with UC were randomly divided into observation group(45 cases)and control group(42 cases).The control group applied antibiotics and 5-amino salicylic acid for symptomatic treatment,and the observation group was treated with bifidobacteria triple viable capsule based on the control group.The colitis score,CD4+CD25+regulatory T cells and IL-10 changes before and after treatment were compared between the two groups.ResultsThe total effective rate of the observation group was 86.67%,significantly higher than 69.05%of the control group(P＜0.05).The colitis scores had no statistically significant difference between the two groups before treatment(P＞0.05),but the scores in the observation group were significantly lower than those in the control group after treatment(P＜0.01).The ratio of CD4+CD25+regulatory T cells to the total CD4+T cells and IL-10 levels had no statistically significant difference between the two groups before treatment(P＞0.05),but they were significantly higher in the observation group than the control group after treatment(P＜0.01).ConclusionBifidobacteria triple viable capsule has significant clinical efficacy in the treatment of UC.It can significantly increase the ratio of CD4+CD25+regulatory T cells to the total CD4+T cells and IL-10 levels and improve the intestinal microbial balance,which is thus worthy of application and popularization.

Bifidobacteria triple viable capsule;Ulcerative colitis(UC);Regulatory T cells;Influence

R574.62

A

1003—6350（2016）01—0040—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.01.015

2015-02-10)

赖洁莹。E-mail：laijieyingcandy@126.com