芪雪浸膏剂质量标准研究

陆　超　吴　磊　钱　芳　刘志辉*

（1南京中医药大学附属医院药学部，南京　210029；2南京中医药大学研究生院，南京　210046)



芪雪浸膏剂质量标准研究

陆超1，2吴磊1钱芳1刘志辉1*

（1南京中医药大学附属医院药学部，南京210029；2南京中医药大学研究生院，南京210046)

摘要：目的研究并建立芪雪浸膏剂的质量控制标准。方法采用薄层色谱法对芪雪浸膏剂中的黄芪、当归、虎杖、大黄、进行定性鉴别；采用HPLC-ELSD法研究并建立芪雪浸膏剂中黄芪甲苷的含量测定方法。结果处方中4味中药均能在薄层色谱中检出，分离效果好，斑点清晰，阴性未见干扰。黄芪甲苷进样量在2.5～25 μg范围内呈良好线性关系（r=0.999 2），平均回收率96.62%，RSD为1.42%（n=6）。结论建立的方法简便、可行、准确，可为芪雪浸膏剂质量标准的制定提供依据。

关键词：芪雪浸膏剂；质量标准；薄层色谱；高效液相色谱；黄芪甲苷

芪雪浸膏剂是根据江苏省中医院肾科孙伟教授的经验方制成的医疗机构制剂，由黄芪、当归、虎杖、土茯苓、制大黄、积雪草等11味中药组成，具有补肾活血祛浊之功效，临床应用治疗慢性肾炎多年，疗效显著。本实验采用薄层色谱（TLC）法对该制剂中的4味饮片进行了定性鉴别，并采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法对君药黄芪中的主要成分黄芪甲苷进行了含量测定研究，为芪雪浸膏剂质量控制标准的建立提供依据。

1　仪器与试药

1.1仪器Waters2695高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Alltech-ELSD2000型蒸发光散射检测器（美国Alltech公司）；XWK-III无油空气泵（天津市毕生分析仪器厂）；电子分析天平（BP-211D型，德国赛多利斯公司），医用超声波清洗仪（KQ-1000E型，昆山市超声仪器有限公司）。

1.2试药黄芪甲苷对照品（购自中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号：110781-200613）；虎杖、大黄（药用大黄）、当归、中国食品药品检定研究院，鉴别用，批号依次为：120980-201005、120984-201202、121341-201404）；黄芪对照药材（中国药品生物制品检定研究院，鉴别用，批号121462-201304）；硅胶G板（青岛海洋化工）；乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

图1　黄芪的薄层鉴别

图2　当归的薄层鉴别

图3　虎杖的薄层鉴别

图4　大黄的薄层鉴别

2　方法与结果

2.1定性鉴别

2.1.1黄芪的TLC鉴别取芪雪浸膏剂12 g，加水100 ml使溶解，以水饱和正丁醇溶液振摇提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40 ml，弃去氨液，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺黄芪阴性对照溶液[1-2]。

取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另取黄芪对照药材1 g，加甲醇50 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml使溶解，照供试品溶液制备方法，自“以水饱和正丁醇溶液振摇提取4次”起，依法制备对照药材溶液。

照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述四种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（10∶7∶2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性未见干扰。见图1。

2.1.2当归的TLC鉴别取芪雪浸膏剂8 g，加水50 ml使溶解，稀盐酸调pH值至2~3，用乙醚振摇提取2次，每次25 ml，合并提取液，挥干乙醚，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺当归阴性对照溶液[3]。

另取当归对照药材0.5 g，加水30 ml，煎煮1 h，放冷，滤过，滤液备用。照供试品制备方法，自“稀盐酸调pH值至2~3”起，依法制备对照药材溶液。

照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4∶1∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的蓝色荧光斑点，阴性未见干扰。见图2。

2.1.3虎杖的TLC鉴别取芪雪浸膏剂6 g，加水50 ml使溶解，乙酸乙酯振摇提取3次，每次20 ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺虎杖阴性对照溶液[4]。

另取虎杖对照药材0.5 g，加甲醇10 ml，超声处理15 min，滤过，滤液浓缩至1 ml，即得。

照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（16∶3∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。虎杖供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫色斑点，阴性未见干扰。见图3。2.1.4大黄的TLC鉴别取芪雪浸膏剂12 g，加水50 ml使溶解，加盐酸2 ml，加热回流30 min，冷却，用二氯甲烷振摇提取2次，每次40 ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加乙酸乙酯2 ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺大黄阴性对照溶液[5]。

另取大黄对照药材0.5 g，加甲醇20 ml，浸渍1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，照供试品溶液的制备方法，自“加盐酸2 ml”起，依法制备对照药材溶液。

照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（30∶10∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯光（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的橙黄色斑点，氨熏后，斑点变为红色，阴性无干扰。结果见图4。

2.2含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱：Hedera C18 ODS-2(4.6 mm× 250 mm，5μm)；流动相：乙腈-水（33∶67）；流速：1.0ml·min-1；柱温：30℃；进样量20 μL；ELSD-2000检测器：漂移管温度为102℃，载气流量为2.7 L·min-1[6-9]。

2.2.2溶液的制备对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇定容，制成每1 ml含0.5 mg的对照品溶液，即得。

供试品溶液的制备取芪雪浸膏剂12 g，加水100 ml使溶解，以水饱和正丁醇振摇提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40 ml，弃去氨液，将正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，置于5 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。同法制成缺黄芪阴性溶液。

2.2.3系统适用性试验取上述对照品溶液、供试品溶液和芪雪黄芪阴性溶液各20 μL，按上述色谱条件分别进样，HPLC图谱见图4。结果表明，色谱峰基线平稳，供试品与黄芪甲苷对照品在相同位置均有吸收，分离度良好且阴性无干扰，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算不低于5000。

图5　黄芪甲苷HPLC-ELSD色谱图

2.2.4标准曲线与线性范围取上述对照品溶液，分别进样5、10、20、30、40、50 μL，依法测定峰面积。以进样量的自然对数为横坐标X，响应值的自然对数为纵坐标Y，绘制标准曲线，经统计学处理，得回归方程Y=1.693X+11.96，r=0.999 2(n=6)。结果见图6。

图6　黄芪甲苷标准曲线图

以上结果表明黄芪甲苷在2.5~25 μg范围内与峰面积进样量对数呈良好的线性关系。

2.2.5精密度试验精密吸取对照品溶液15 μL，注入高效液相色谱仪中，重复进样6次，测定峰面积积分值，结果以黄芪甲苷峰面积计RSD为1.86%，表明，仪器精密度良好。结果见表1。

表1　黄芪甲苷精密度试验结果

2.2.6重复性试验取同一批号的芪雪浸膏剂12 g，共6份，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样20 μL，依法测定，以黄芪甲苷含量计算样品含量，RSD%为2.09%，表明该方法重复性良好。结果见表2。

表2　黄芪甲苷重复性试验结果

2.2.7稳定性试验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0、2、4、6、8、12 h进样，记录峰面积，结果按黄芪甲苷峰面积计算，RSD为1.99%，表明黄芪甲苷在12 h内基本稳定。结果见表3。

表3　黄芪甲苷稳定性试验结果

2.2.8加样回收试验精密量取已知黄芪甲苷含量的芪雪浸膏剂6 g，共6份，分别加入黄芪甲苷对照品(0.428 mg·mL-1)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取其中20 μL，注入高效液相色谱仪，测定，计算，结果见表4。

表4　加样回收率试验结果　　（n=6）

2.2.9样品含量测定取芪雪浸膏3批样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样，测定，计算。结果3批样品黄芪甲苷含量分别为0.1458 mg·g-1、0.1392 mg· g-1、0.1415 mg·g-1。

3　讨论

芪雪浸膏剂处方共含有11味药材，成分极其复杂，不同的中药可能含有相同的化学成分成分，本文建立的薄层鉴别方法，均采用对照药材为对照，增强了定性鉴别的准确性与可靠性，能较好地控制芪雪浸膏剂的质量。

虎杖的薄层鉴别曾参考《药典》方法[10]，用盐酸加热水解后，以二氯甲烷萃取，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开后晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，并以氨熏蒸，结果阴性有干扰。改用乙酸乙酯振摇提取，并以三氯甲烷-丙酮-甲酸（16:3:1）为展开剂，置日光下检视，鉴别点清晰，阴性未见干扰。

本文的含量测定，主要测定的是黄芪甲苷。黄芪作为方中君药，其有效成分之一黄芪甲苷是黄芪特有的生物活性成分，功能补脾养血，益气生津，可改善心肺功能，扩张血管，调节机体免疫功能等；故选择黄芪甲苷作为该制剂含量测定的指标，方法学考察表明所建立的方法专属性强，重现性好，可用于芪雪浸膏剂的质量控制。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）.2010版[S].北京：化学工业出版社，2010:283.

[2]陆超，吴磊，钱芳，等.胃瘤安合剂的质量标准研究[J].中国药房，2015，26 (3):396-399.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）.2010版[S].北京：化学工业出版社，2010:124.

[4]陈丽，吴钉红.薄层色谱法同时鉴别蝎甲消癖口服液中虎杖、赤芍[J].亚太传统医药，2012，8(7):39-40.

[5]张纲，陈浩达，孔德宪，等.芪黄通秘软胶囊中三味药材的薄层色谱鉴别[J].亚太传统医药，2011，7(4):28-29.

[6]李爽，贾媛，范玲，等.芪葵颗粒定性定量方法研究[J].药物分析杂志，2012.32(9):1564-1577.

[7]姜勇，金芳，鲍忠，等.不同来源黄芪药材中黄芪甲苷的定量分析[J].中国中药杂志，2006.31(11):930-933.

[8]吴怡，邹佳欣，王光函，等.化胃舒颗粒供试品制备方法对其黄芪甲苷含量的影响[J].中国药师，2014.17(1):29-31.

[9]刘和平，彭招华，张润容，等.黄芪药材中黄芪甲苷UPLC-ELSD含量测定方法的优化[J].中国实验方剂学杂志，2015.21(5):37-40.

[10]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）.2010版[S].北京:化学工业出版社，2010:194.

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2015年2月10日

Study on the quality standards of Qixue Concrete

LU Chao1,2,WU Lei1,QIAN Fang1,LIU Zhihui1*
(1.Department of Pharmacy,The Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210029,China; 2.Graduate School of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210046,China)

Abstract:Objective To establish the quality standards for Qixue concrete.Methods Astragali Radix,Angelicae Sinensis Radix, Polygoni Cuspdati Rhizoma Et Radix,Smilacis Glabrae Rhizoma,Rhei Radix Et Rhizoma,Centeliae Herba and Abelmoschi Corolia in Qixue concrete were qualitatively identified by TLC.The content of astragalosideⅣwas determined by HPLC-ELSD.Results Six herbs could be identified by TLC,and the spots were clear and well-separated.The linear range of AstragalosideⅣwas 2.5～25.Μg (r=0.999 2),and the average recovery was 96.62%,RSD=1.42%(n=6).Conclusion The method is simple and accurate,and it can be used for the quality control of Qixue concrete.

Keywords:Qixue concrete;quality standard;TLC;HPLC;AstragalosideⅣ

收稿日期：（本文编辑：张文娟本文校对：朱敏2015-12-17）

*通讯作者：liuzh1008@126.com

doi:10.3969/j.issn.1672-2779.2016.04.066

文章编号：1672-2779（2016）-04-0135-04