SLC26A4基因突变所致遗传性耳聋患者突变类型研究

张笑千，王 睿，刘 畅，周 健，李 丽，徐飞飞，曲学华，李胜波

150000黑龙江省哈尔滨市，哈尔滨医科大学附属第四医院耳鼻喉科



SLC26A4基因突变所致遗传性耳聋患者突变类型研究

张笑千，王 睿，刘 畅，周 健，李 丽，徐飞飞，曲学华，李胜波

150000黑龙江省哈尔滨市，哈尔滨医科大学附属第四医院耳鼻喉科

【摘要】目的通过检测耳聋患者DNA，探讨遗传性耳聋患者SLC26A4基因常见突变类型。方法选取2012年1月—2014年5月于哈尔滨医科大学附属第四医院进行检查的遗传性耳聋患者60例为研究对象。采集患者外周血3～5 ml，应用试剂盒提取DNA，使用E-Cycler TM96 PCR仪进行DNA扩增。行琼脂糖凝胶电泳，回收PCR产物，进行序列分析和比对。结果研究共发现SLC26A4基因突变患者11例，检出SLC26A4基因9个突变类型，涉及11～17号和19号外显子的改变，IVS7-2A>G为最常见突变类型。纯合突变1例，余10例为杂合突变。结论SLC26A4基因突变所致遗传性耳聋患者突变类型主要为IVS7-2A>G，其次是2168A>G。

【关键词】听觉丧失；遗传性疾病；基因突变；SLC26A4基因

张笑千，王睿，刘畅，等.SLC26A4基因突变所致遗传性耳聋患者突变类型研究[J].中国全科医学，2016，19(8)：979-981.[www.chinagp.net]

Zhang XQ，Wang R，Liu C，et al.SLC26A4 gene mutation types of patients with hereditary deafness[J].Chinese General Practice，2016，19(8)：979-981.

目前，我国聋哑患者有4 000万人左右[1]，且呈递增趋势，其中3%为儿童[2]。遗传因素导致的耳聋较为少见，在遗传性耳聋中非综合征性耳聋占绝大多数，其中又有80%的患者属于常染色体隐性遗传[3]，且SLC26A4基因突变是引起遗传性耳聋的常见原因。本研究通过检测耳聋患者DNA，探讨遗传性耳聋患者SLC26A4基因常见突变类型。

1对象与方法

1.1研究对象选取2012年1月—2014年5月于哈尔滨医科大学附属第四医院进行检查的遗传性耳聋患者60例为研究对象，其中男42例，女18例；年龄3～15岁。患者入选标准：(1)患者自身患有耳聋，符合《耳鼻咽喉头颈外科学》[4]中耳聋的诊断标准；(2)有耳聋疾病家族史；(3)父母非近亲结婚；(4)患者同意参与本研究，并签署知情同意书。本研究经本院医学伦理委员会决议通过。

1.2方法采集患者外周血3～5 ml，应用试剂盒提取DNA，在-70 ℃下备用。使用E-Cycler TM96 PCR仪进行DNA扩增，针对变异点设计不同引物，PCR模板类型有DNA 1 μ1、ddH20 1 μl、10×Buffer 2 μl，上、下游引物各0.5 μl，TransStart Taq Polymerase 0.2 μl，DNTP 0.5 μl。PCR参数：95 ℃变性15 min，55 ℃复性30 s，70 ℃延伸45 s，共32次循环。行琼脂糖凝胶电泳，回收PCR产物。回收的PCR产物用虾碱性磷酸酶和核酸外切酶处理(冰上操作)，酶切后的PCR用测序仪及其配套试剂盒进行正反向测序，结果采用DNAstar软件的SeqMan进行序列分析和比对。

2结果

本研究共发现SLC26A4基因突变患者11例，其中男7例，女4例；年龄3～15岁；轻度耳聋1例，中度耳聋2例，重度耳聋6例，极重度耳聋2例。共检出SLC26A4基因9个突变类型，涉及11～17号和19号外显子的改变，IVS7-2A>G为最常见突变类型。纯合突变1例，余10例为杂合突变(见表1)。

表1　11例SLC26A4基因突变患者突变类型

3讨论

目前，我国耳聋患者达2 000万人，并以每年3万人的数量增长[5]。导致耳聋的原因很多，环境、遗传因素均可导致耳聋的发生。随着对耳聋分子病因学的研究，遗传因素在耳聋的发病中得到越来越多的重视，共发现40多个与耳聋相关的基因，100多个基因位点[6]。GJB2、SLC26A4基因突变与致聋密切相关[7-8]。研究证实，GJB2基因突变引起的耳聋较为常见[9-10]。GJB2基因编码缝隙连接蛋白Cx26，基因突变产生的无功能蛋白质影响了缝隙连接蛋白的结构，导致钾离子通道关闭，使其流入血液循环受到影响，易引起神经性耳聋[11-12]。患者主要表现为先天性耳聋、非进行性耳聋，呈严格的双侧对称性[13]。

本研究共发现11例SLC26A4基因突变引起的遗传性耳聋患者。SLC26A4基因突变导致的耳聋可能会出现双侧不对称，病症出现波动或进行性改变[14]。本研究发现SLC26A4基因突变类型主要为IVS7-2A>G，其次是2168A>G。SLC26A4基因突变导致外显子剪切位点异常或关键氨基酸发生置换等，影响pendrin蛋白的合成和功能[15]，从而影响蛋白质的转运，使其不能达到细胞膜形成阴离子通道，从而使阴离子转运受影响，细胞内外环境失衡而导致耳聋。

本研究结果显示，以EXON15-17得到300 bp的目的片段，以EXON14-18得到660 bp的目的片段，行琼脂糖凝胶电泳发现剪切点连接完好未出现片段缺失，说明本组患者未发现IVS16+10C>T基因突变。SLC26A4 IVS16+10C>T变异位于第16号内含子与外显子交界处的第10个碱基[7]。人体细胞中存在大量不能被翻译的非编码DNA序列[16]，前体RNA必须经过剪切才能形成成熟的mRNA，在转录、翻译过程中发挥作用。如果在剪切位的碱基发生变异就会导致内切酶剪切位置改变，使产生的mRNA不能被正确翻译，也就不能合成相应的蛋白质，造成功能性蛋白质缺失，使患者出现耳聋症状[17]。高雪等[10]首次证实，SLC26A4 IVS16+10C>T变异是非致病的核苷酸多态，对剪切位点的识别未产生影响，反转录后mRNA长度无改变。

通过胎儿基因检测，对具有耳聋家族史的胎儿产前诊断具有重要参考价值。由于本研究样本量小，SLC26A4基因突变与遗传性耳聋的关系尚需进一步探讨。

参考文献

[1]Sun SC，Liu YX，Peng YS，et al.Analysis of GJB2 gene sequence in patients with nonsyadromic hearing loss[J].Chinese Journal of Medical Genetics，2011，28(4):409-413.(in Chinese)

孙顺昌，刘一心，彭运生，等.遗传性非综合征型耳聋患者GJB2基因编码序列分析[J].中华医学遗传学杂志，2011，28(4):409-413.

[2]Wang J.Advances of study in gene of hereditary hearing impairment[J].Medical Recapitulate，2013，19(3):442-444.(in Chinese)

王继.遗传性耳聋的基因研究进展[J].医学综述，2013，19(3):442-444.

[3]Lu YP，Cheng J，Han B，et al.Detection of trisomy 21 by quantitative fluorescent PCR in clinical samples undergoing prenatal diagnosis for hereditary hearing loss[J].Chinese Journal of Obstetrics and Gynecology，2011，46(6):427-430.(in Chinese)

卢彦平，程静，韩冰，等.荧光定量PCR技术用于行遗传性耳聋基因检测胎儿的21三体综合征筛查的可行性[J].中华妇产科杂志，2011，46(6):427-430.

[4]孔维佳.耳鼻咽喉头颈外科学[M].北京：人民卫生出版社，2008.

[5]巴罗，边片，尼玛吉宗，等.藏族非综合征性耳聋儿童患者GJB2 SLC26A4 MTRNR1基因突变分析[J].西部医学，2014，26(12):1577-1580.

[6]Koy A，Freynhagen R，Mayatepek E，et al.Hereditary sensory and autonomic neuropathy with autonomic crises:A Turkish variant of familial dysautonomia？[J].J Child Neurol，2012，27(2):191-196.

[7]Zhang DH，Qiu HT，Ma XL，et al.The molecular epklemiology discussion of newborn deafiness pathogenic screening[J].Journal of China Medical Univercity，2010，39(8):649-651.(in Chinese)

张东红，邱海涛，马秀岚，等.新生儿聋病基因GJB2、SLC26A4、线粒体12SrRNA的分子流行病学研究[J].中国医科大学学报，2010，39(8):649-651.

[8]Cui QJ，Wang GJ，Zhang Y，et al.Audiological characteristics in 832 deaf children with biallelic causative mutations in GJB2，SLC26A4 gene[J].Journal of Audiology and Speech Pathology，2014，22(2):120-123.(in Chinese)

崔庆佳，王国建，张媛，等.GJB2、SLC26A4基因相关耳聋儿童的听力损失特点分析[J].听力学及言语疾病杂志，2014，22(2):120-123.

[9]Wang GJ，Zhang GB，Yuan YY，et al.Clinical application of DNA microarray in rapid genetic diagnosis of non-syndromic heaing loss[J].Chinese Journal of Otology，2014，12(1):6-10.(in Chinese)

王国建，张冠斌，袁永一，等.十五项遗传性耳聋基因突变微阵列诊断芯片的临床应用研究[J].中华耳科学杂志，2014，12(1):6-10.

[10]Gao X，Xin F，Yuan HJ，et al.Pathogenic analysis of a novel mutation of deafness gene SLC26A4[J].Chinese Journal of Otology，2014，12(1):26-29.(in Chinese)

高雪，辛凤，袁慧军，等.遗传性耳聋相关基因SLC26A4新突变致病性分析[J].中华耳科学杂志，2014，12(1):26-29.

[11]Sun BC，Dai ZY，Huang SS，et al.Study on the relationship between the pathogenic mutations of GJB2，SLC26A4 and CT phenotypes of inner ear in patient with sensorineural hearing loss[J].Chinese Journal of Otology，2014，12(1):30-33.(in Chinese)

孙宝春，代志瑶，黄莎莎，等.GJB2、SLC26A4基因致病性突变与内耳CT表型关系的研究[J].中华耳科学杂志，2014，12(1):30-33.

[12]Kenna MA，Rehm HL，Frangulov A，et al.Temporal bone abnormali ties in children with GJB2 mutations[J].Laryngoscope，2011，121(3):630-635.

[13]Zinchenko RA，Osetrova AA，Sharonova EI，et al.Hereditary deafness in Kirov oblast:estimation of the incidence rate and DNA diagnosis in children[J].Genetics，2012，48(4):455-462.

[14]Qu CH，Zhang N，Cao DH，et al.Analysis of common deafness genes screening in 240 deaf patients[J].Academic Journal of Chinese PLA Medical School，2014，35(10):1019-1021.(in Chinese)

曲长红，张宁，曹东华，等.240例耳聋患者常见耳聋基因筛查分析[J].解放军医学院学报，2014，35(10):1019-1021.

[15]Jiang SJ.Gene diagnosis of nonsyndromic deafness[J].International Journal of Pediatrics，2011，38(5):421-425.(in Chinese)

蒋树娟.遗传性非综合征性耳聋基因诊断的研究进展[J].国际儿科学杂志，2011，38(5):421-425.

[16]Sun XB，Liang S，Han R，et al.Microarry-based mutation detection for 252 cases of hearing loss children and their parents[J].Disability Research，2012，11(1):32-36.(in Chinese)

孙喜斌，梁爽，韩睿，等.检测致聋基因预防耳聋发生-252例耳聋基因检测结果分析[J].残疾人研究，2012，11(1):32-36.

[17]Han YF.Recent research progresses of GJB2 mutations of hereditary nonsyndromic hearing loss[J].Medical Recapitulate，2012，18(17):2774-2777.(in Chinese)

韩跃峰.GJB2基因突变在遗传性非综合征性耳聋中的研究进展[J].医学综述，2012，18(17):2774-2777.

(本文编辑：吴立波)

SLC26A4 Gene Mutation Types of Patients With Hereditary Deafness

ZHANGXiao-qian，WANGRui，LIUChang，etal.

DepartmentofOtolaryngology，theFourthAffiliatedHospitalofHarbinMedicalUniversity，Harbin150000，China

【Abstract】ObjectiveTo investigate common SLC26A4 gene mutation types of patients with hereditary deafness by DNA detection.Methods A total of 60 patients with hereditary deafness who visited the Fourth Affiliated Hospital of Harbin.MethodsUniversity from January 2012 to May 2014 were enrolled.A blood sample of 3-5 ml peripheral blood was taken from each patient.DNA was extracted from peripheral blood by kit and was amplified by E-Cycler TM96 PCR Amplifier，and PCR products were recycled by Agarose gel electrophoresis.Then DNA sequence analysis and alignment were conducted.ResultsAmong all the subjects，11 patients with SLC26A4 gene mutations were found and 9 mutation types involving the changes of exons 11-17 and 19 were detected.IVS7-2A>G was the most common type.There was one case of homozygous mutation，and the rest 10 cases were all heterozygous mutation.ConclusionThe most common SLC26A4 gene mutation type of patients with hereditary deafness is IVS7-2A>G，followed by 2168A>G.

【Key words】Hearing loss；Genetic diseases；Gene mutation；SLC26A4 gene

(收稿日期：2015-06-12；修回日期：2015-11-10)

【中图分类号】R 764.431

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.08.025

通信作者：李胜波，150000黑龙江省哈尔滨市，哈尔滨医科大学附属第四医院耳鼻喉科；E-mail：13903658854@139.com

基金项目：黑龙江省自然科学基金资助项目(D201068)

·临床诊疗提示·