黄曲霉毒素对雏鸡免疫机能的影响

高许雷（青岛市崂山区农林局，山东青岛 266061）



黄曲霉毒素对雏鸡免疫机能的影响

高许雷
（青岛市崂山区农林局，山东青岛 266061）

摘 要：为了研究黄曲霉素对雏鸡免疫机能的影响，试验选用40只14日龄的海兰褐雏鸡，随机分为两组，每组20只。试验组饲喂被黄曲霉菌毒素污染的饲料，对照组饲喂未污染饲料，并于试验后14 d和21 d，从试验组和对照组分别随机抽取5只鸡进行免疫器官指数测定和血清NDV抗体检测。结果表明，试验后14 d试验组与对照组各项指标无显著差异；试验后21 d试验组胸腺指数显著低于对照组，法氏囊指数极显著低于对照组，而脾脏指数无显著差异；试验组抗体效价降低，差异极显著（P＜0.01），说明黄曲霉毒素会抑制雏鸡的免疫机能。

关键词：黄曲霉毒素；雏鸡；抗体效价

霉菌毒素是真菌的次级代谢产物，是其产物中有毒物质的统称。其中，黄曲霉毒素（afl atoxin，AF）主要是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的某些菌株产生的高毒性和高致癌性毒素，其在饲料中相当稳定，一旦污染较难清除。

目前已发现黄曲霉毒素及其衍生物有20多种，已确定结构的有18种［1］，在霉菌毒素中其毒性最高，也最常见，且都具有致癌作用。我国饲料普遍容易受到黄曲霉毒素的污染，河南、山东、湖北、安徽四省的调查发现，饲料中黄曲霉菌检出率为75%。在广西，玉米、稻谷、花生和豆类黄曲霉毒素的检出率分别为72%、71.4%、70.1%、31%［2］。王若军从内蒙、宁夏、黑龙江、北京、辽宁、天津、湖南、湖北、河北、江苏、浙江、福建、广东、海南等省（直辖市、自治区）采集31份玉米、21份全价饲料、27份植物蛋白饲料、12份菌体蛋白饲料、11份动物蛋白饲料和3份青贮饲料进行黄曲霉毒素检测，其中玉米样品中的检出率为83.9%、全价料中的检出率高达100%、蛋白质饲料中的检出率也高达100%［3］，这说明我国饲料及饲料原料中黄曲霉毒素的污染情况比较严重。

曲霉菌毒素的毒性因动物的种类、年龄、性别和体况以及营养状况的不同有差异。一般情况动物年龄越小其易感性越强，雌性动物比雄性动物具有较强的耐受性，营养状况越差越容易发病，怀孕比未怀孕更容易产生反应［4］。

黄曲霉毒素对鸡生产性能的影响主要表现在采食量降低、生长缓慢，平均体重比正常体重低283.5 g，比正常鸡低13.53%，严重中毒的鸡体重可下降708.9 g，比正常鸡低33.85%［5］。畜禽食入低剂量的AFB1（1 mg/kg饲料）就能引起体重减轻、饲料利用效率和生产性能下降［6］。用含有AFB13×10-6的饲料喂养家禽一个星期就会出现明显的临床症状，虽然产蛋家禽死亡率不高，但轻则产蛋量下降，严重的会使产蛋完全停止，而且蛋黄重量减轻，蛋黄颜色变浅［7］。这可能是由于AFB1干扰了脂肪代谢和色素沉积。另外，黄曲霉毒素也可破坏公鸡的性功能，使睾丸萎缩，曲细精管发育不良，阻碍精液产生。

近来的研究认为，T淋巴细胞调节的细胞免疫反应似乎更易受到黄曲霉毒素影响。Ghosh等［8］观察到，产蛋鸡淋巴细胞数量的下降与饲喂毒素剂量有相关性，并发现毒素能够影响淋巴细胞中的腺苷脱氨酶的活性，使其活性下降。他们已证实0.3和1 mg/kg的AFB1都能降低由T细胞介导的细胞免疫，使T细胞数显著降低、脾中巨噬细胞活性明显减弱。

本实验主要从饲料被黄曲霉毒素污染对雏鸡生长发育侵害的因素，研究其对免疫机能的影响。

1　材料与方法

1.1材料

14日龄健康海兰褐蛋鸡雏鸡，胶东某鸡场提供；新城疫低毒力活疫苗（IV系），北京市兽医生物药品厂生产；霉菌毒素污染饲料和未污染饲料各一份，胶东某鸡场提供。

1.2方法

1.2.1雏鸡日常饲养观察。试验过程中，每日观察记录鸡群的精神状态、个头、食欲和行为变化、粪便变化等。

1.2.2免疫器官指数测定。分别于试验后14 d和 21 d从试验组和对照组随机抽取5只鸡，空腹称重，从心脏采集新鲜血液置于抗凝剂中备用。宰杀，取胸腺、脾脏和法氏囊，用天平称重量，做好记录，按此方法计算免疫器官指数：免疫器官指数=免疫器官重量（g）/鸡活体重（kg）。

1.2.3血清中ND抗体滴度检测。将采集的血液以2 000 r/min低速离心5 min，取上层血清备用。在96孔V型微量凝集板上进行抗体滴度检测。先在第一孔加入1：1280倍NDV标准阳性血清50 μL，依次做倍比稀释至第7孔，弃去最后50 μL，第8孔不加抗原做对照。每孔加入50 μL的生理盐水及50 μL待检血清，每孔再加入1%的致敏红细胞悬液1滴，轻轻摇匀30 min后观察，判定结果。

1.2.4微生物学检查。涂片染色：两次扑杀前均随机挑取实验组雏鸡2只做染色镜检。准备好清晰透明、洁净而无油渍的载玻片，用镊子夹持雏鸡的部分肝脏，然后以灭菌剪刀取一小块，夹出后将其新鲜切面在玻片上压印或涂抹成一薄片，使其自然干燥。将干燥好的抹片用镊子夹持一端，在酒精灯火焰上来回通过数次，略做加热固定。将固定好的抹片进行革兰氏染色。

1.2.5数据处理。将各项数据用T检验进行统计分析。

2　结果与分析

2.1黄曲霉毒素感染雏鸡后的临床观察

对照组雏鸡生长发育良好，鸡群精神状态良好，饮食欲正常，增长速度快，个体差异小。

实验组雏鸡生长发育不良，羽毛蓬乱，嗜睡，食欲减退，羽翼下垂，体重低于正常发育鸡水平，鸡群均匀度差，个别雏鸡虚弱站立不稳，运动失调，排白色或血色稀粪，常缩脖闭眼呆立，角弓反张，采血时可见血液凝固不良。

2.2黄曲霉毒素感染后对体重的影响

雏鸡在采食受黄曲霉毒素污染的饲料后，临床上无典型中毒表现，但无论是在14 d后，还是21 d后，与对照组相比较，试验组的雏鸡生长发育明显受阻，体增重显著减慢，饲料报酬降低。对照组鸡群14 d和21 d后的平均体重高于试验组，差异极显著（P＜0.01）（表1）。

表1　黄曲霉毒素感染后对不同日龄肉鸡体重的影响（X±SD）

2.3黄曲霉毒素感染后对鸡免疫器官指数的影响

与对照组相比，试验组21 d后胸腺和法氏囊明显萎缩，胸腺指数和法氏囊指数显著和极显著低于对照组，而各组间脾脏指数无显著差异（表2）。

表2　黄曲霉毒素感染对免疫器官指数（g/kg）的影响（X±SD）

2.4黄曲霉毒素感染后对鸡NDV疫苗免疫后抗体滴度的影响

用NDV弱毒苗免疫鸡只后，由于受黄曲霉毒素感染，实验组雏鸡抗体水平显著降低（表3）。

表3　黄曲霉毒素感染对NDV疫苗免疫抗体水平的影响（X±SD，log2）

2.5微生物学检查

将组织碎片显微镜下观察，可见短的分枝状有隔菌丝，菌丝直径约4～6 um，用墨汁和氢氧化钾液混合后染色，再置高倍镜下观察，可见到被墨汁染成蓝色的菌丝。

在沙堡弱葡萄糖琼脂平板和察氏琼脂平板上培养7 d后，可见菌落表面有皱纹，中心带呈暗绿色，稍突起，周边呈散射纤毛样无色结构，背面为奶油色，直径约6 mm，有霉味。用解剖针或接种针挑取少许培养物，置于载玻片上，滴加乳酸苯酚液少许（乳酸苯酚液配方：乳酸20 mL、石炭酸20 g、甘油40 mL、美蓝0.05 g、蒸馏水20 mL），用针将菌丝体分开，勿成团，加盖玻片后，显微镜下观察可见典型黄霉菌样结构。

在普通琼脂培养基及麦糠凯琼脂培养基上培养检查，未发现大肠杆菌、白痢杆菌、支原体等病原微生物。

3　讨论

幼雏采食受微量霉毒素污染的饲料后，临床上无典型中毒表现，但是会使生长发育受阻，体重增重显著减慢，并且参次不齐，饲料报酬降低。这是因为黄曲霉毒素感染能使机体免疫机能下降，免疫器官发育受阻，生长缓慢，并且影响疫苗保护力，使抗体水平降低，从而造成生长不均。

黄曲霉毒素广泛存在于玉米、花生和棉籽饼（粕）中，和其他霉菌毒素相比，毒性最强，对人畜危害最大。我国之所以是饲料被黄曲霉毒素污染的重灾国，原因多是人们对其认识不足。特别是在多雨的年份，大部分玉米发霉变质，甚至在未收获时就发生隐性霉变。

综上所述，黄曲霉毒素的危害的确很大，中毒后目前没有特效药物进行治疗，因此养殖户应该从杜绝饲喂被黄曲霉毒素污染的饲料出发，减轻它对养殖业造成的危害，也为人类健康竖一道屏障。

参考文献：

［1］ 陈静. 家禽黄曲霉毒素中毒的防治［J］.山东畜牧兽医，2001，95（5）：13.

［2］ 胡兰. 饲料黄曲霉毒素的研究进展［J］.饲料工业，2001，22 （3）：20-23.

［3］ 王若军，苗超华，张振雄. 中国饲料及饲料原料受霉菌污染的调查报告［J］.饲料工业，2003，24（7）：53-54.

［4］ 刘大成. 梅雨季节多发性黄曲霉毒素中毒的防治［J］.中国动物检疫，2002，19（3）：32-33.

［5］ 马叙宇. 肉鸡黄曲霉菌毒素中毒［J］.中国家禽，1998，20 （6）：46-47.

［6］ 刘玫珊，柏素霞，廖静华. 含硫氨基酸对黄曲霉毒素B1的解毒机理［J］.中国兽医科技，1994，24（11）：6-9.

［7］ 罗土炎，饶秋华. 禽类黄曲霉毒素的中毒机理研究［J］.福建畜牧兽医，2000，22（6）：19.

［8］ Ghosh R C.实验性黄曲霉中毒的肉鸡发生免疫抑制［J］.国外兽医学：畜禽传染病，1991（4）：22-23.

［9］ 李梦云，陈代文. 饲料中黄曲霉毒素的危害及几种脱毒剂的作用机理［J］.饲料博览，2005，137（4）：5.

（责任编辑：胡藕祥）

中图分类号：S859.87

文献标识码：B

文章编号：1005-944X（2016）01-0059-03

Infl uence of Afl atoxin on Immunity of Chicklings

Gao Xulei
（Laoshan District Agriculture and Forestry Bureau，Qingdao，Shandong 266061）

Abstract：In order to evaluate the influence of aflatoxin to chicken immune function，40 14-day-old Hyline Brown chicks were selected and randomly divided into two groups. The test group was fed with afl atoxin contaminated feed and the control group was fed with uncontaminated feed. 5 chicks were randomly taken from the test group and the control group respectively 14 d and 21d after the experiment for immune organ index test and NDV antibody test. Test results showed that there was no signifi cant difference of the immune organ index between the group and control group 14 d after the test；Thymus and bursa index of the test group were signifi cantly lower than the control group，and the spleen index had no signifi cant difference between the two groups 21d after the test；The ND antibody titer of the test group was lower signifi cantly. The test indicated that afl atoxin could inhibit chick immune system.

Key words：afl atoxin；chicks；antibody level