酶联免疫法在结核病检测中重要价值

刘坦河南省洛阳市郑州大学附属洛阳中心医院检验科，河南洛阳471009

酶联免疫法在结核病检测中重要价值

刘坦
河南省洛阳市郑州大学附属洛阳中心医院检验科，河南洛阳471009

目的分析结核感染酶联免疫法在结核病检测中的重要价值。方法选取该院2013年3月—2014年5月收治的62例疑似结核病患者作为对象进行研究，对其实施结核感染酶联免疫法试验与结核菌素试验，记录两种检测方法结果，并比较两种方法特异度、敏感度、假阳性率、假阴性率、阳性似然比（LR+）及阴性似然比（LR-）。结果结核菌素试验结果显示阴性25例，阳性37例，结核分歧杆菌培养阴性24例，阳性38例；结核感染酶联免疫法结果显示阴性16例，阳性46例，结核分歧杆菌培养阴性13例，阳性49例；结核感染酶联免疫法特异度、灵敏度均显著优于结核菌素试验，差异有统计学意义（P＜0.05）；结核感染酶联免疫法诊断阳性似然比（LR+）为11.94、阴性似然比（LR-）为0.99。结论结核感染酶联免疫法检测敏感性更高，且检测即时性好，适用于结核病检测，临床价值较高。

结核感染酶联免疫法；结核菌素试验；结核病

［Abstract］Objective To analyze the important value of tuberculosis infection euzymelinked immunosorbent assay in de‐tecting bacillary phthisis.M ethods 62 cases of patients suspected with bacillary phthisis admitted and treated in our hospi‐tal from March 2013 to May 2014 were selected as the research objectes,and were given tuberculosis infection eu‐zymelinked immunosorbent assay test and tubercalin test,the detection method results were recorded,and the specificity, sensitivity,false positive rate,false negative rate,positive likelihood ratio and negative likelihood ratio were compared be‐tween the twomethods.Results The tubercalin test results showed that 25 cases were negative,37 cases were positive,24 negative cases and 38 positive caseswere cultivated bymycobacterium tuberculosis,the tuberculosis infection euzymelinked immunosorbent assaymethod results showed that 16 caseswere negative and 46 caseswere positive,and 13 negative cases and 49 positive cases were cultivated bymycobacterium tuberculosis,and the specificity and sensitivity of tuberculosis in‐fection euzymelinked immunosorbent assay were obviously better than those of tubercalin test,and the difference has statis‐tical significance,P《0.05,the diagnostic positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of tuberculosis infection eu‐zymelinked immunosorbent assay were respectively 11.94 and 0.99.Conclusion The detection sensitivity of tuberculosis in‐fection euzymelinked immunosorbent assay is higher,and the detection instantaneity is better,and it is suitable for bacillary phthisis detection with higher clinical value.

［Key words］Tuberculosis infection euzymelinked immunosorbent assay;Tubercalin test;Bacillary phthisis

尽管结核疫苗的应用及有效药物的控制使其有一定缓解趋势，但由于近年来人口大量流动，随着人类免疫缺陷病毒及结核分歧杆菌耐药菌株感染率上升，结核病死率逐渐升高[1]。快速准确检测为控制结核病的关键，因此高效、准确的检测方法显得极为重要，传统结核病检测方法效果均不佳[2]。目前，结核感染酶联免疫法准确率较高、即时性较好，包涵性较强，结果受致病性非结核分歧杆菌干扰较小，同时不受接种卡介苗影响，检测过程操作简单，不受检测人员影响[3-4]。该研究分析结核感染酶联免疫法在结核病检测中的重要价值，结果报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取该院2013年3月—2014年5月收治的62例疑似结核病患者作为对象进行研究，其中男36例，女26例，年龄39~72岁，平均年龄（48.76±6.95）岁，临床症状胸腔积液20例、肺部感染性病变21例，腹腔积液5例，发热16例，病程6 d~4个月，平均病程（1.25±0.71）月。纳入标准：①存在呼吸道症状：胸痛、咳血、咳痰、咳嗽、不同程度胸闷、呼吸困难等症状。②顺应性较好。③影像学检测胸部有阴影。

1.2检验方法

结核感染酶联免疫法检测：采集患者4mL外周静脉血，予以肝素抗凝，分别装入P、T、N 3种培养管内，P管是阳性对照培养管，其中添加非特异性刺激原植物雪球凝集素；T管是测试培养管，其中添加结合特异性抗原CFP-10、ESAT-6；N管是本地对照培养管。分装前混匀3次以上，将其放置37℃恒温箱内培养，24 h后取出放入离心机，5 000 r/min，离心血清，依据试剂盒说明书进行INF-γ双抗体定量测试。依据刺激培养系统中升高的INF-γ的含量，判断患者是否为结核感染。结核菌素试验检测：在患者前臂皮内注射纯化蛋白衍生物0.1 mL（含20个结素国际单位PPD），72 h后检测反应结果，统计硬结平均直径。

1.3观察指标

记录两种检测方法结果，比较其特异度、敏感度、阳性似然比（LR+）及阴性似然比（LR-）。特异度=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%；灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%；假阴性率=假阴性例数/金标准阴性例数；假阳性率=假阳性例数/金标准阳性例数；阳性似然比=灵敏度/（1-特异度）；阴性似然比=（1-灵敏度）/特异度。结核病检测以结核分歧杆菌培养结果为金标准，确诊患者是否为结核病。

1.4判定方法

结核感染酶联免疫法结果判定[5]，阳性为：P-N≥20 且T-N＜14；阴性为：P-N≥20且T-N≥14；结果不确定：P-N＜20且N＞400。结核菌素试验结果判定，阳性为：5 mm≤硬结平均直径＜15 mm；阴性为：硬结直径在5 mm以下；强阳性为出现水泡双圈或硬结直径在15mm以上。

1.5统计方法

采用SPSS17.0软件对数据分析，计数资料用χ2检验，n（%）表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1结核感染酶联免疫法检测结果与结核菌素试验检测结果

结核菌素试验结果显示阴性25例，阳性37例，结核分歧杆菌培养阴性24例，阳性38例；结核感染酶联免疫法结果显示阴性16例，阳性46例，结核分歧杆菌培养阴性13例，阳性49例。诊断结果详见表1、表2。

表1　结核菌素试验检测结果（n）

表2　结核感染酶联免疫法检测结果（n）

2.2比较结核感染酶联免疫法检测与结核菌素试验检测

结核感染酶联免疫法特异度、灵敏度均显著优于结核菌素试验结果，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3　比较结核感染酶联免疫法检测与结核菌素试验检测

3　讨论

结核病是易发于青年群体中慢性、缓发性传染病，全年均可发病，16~36岁为结核病高发年龄段，结核病潜伏期一般为6周左右，多发生于肺部，骨骼、皮肤、肠、腹膜、脑膜、颈淋巴均可继发感染，其传染的主要方式为呼吸道传播，传染源为排菌的肺结核患者。近年来，结核病发病率日益增长[6]。临床上结核病多呈慢性过程，但也有少数患者发病急促。其临床主要表现为咳血、咳嗽、乏力、低热等症状。健康人感染结核分枝杆菌后不一定发病，仅在机体免疫力降低时才发病，全世界每年结核病发病人数高达1000万，大约每年有300万人死于结核病，是病死率最高的单一传染病，对结核病患者早期准确检测对改善预后具有重要意义[7]。临床上多应用结核菌素试验检测结核病，但其检测准确度不高，本研究应用结核感染酶联免疫法检测结核病，检测结果较可靠。

结核感染酶联免疫法通过人体感染结核分歧杆菌后产生的特异性T淋巴细胞检测，特异性T淋巴细胞易受抗原刺激从而产生INF-γ，与试验微孔中INF-γ抗体反应，利用催化显色剂显示不同颜色，经过酶标仪对吸光度进行检测，计算INF-γ含量，判断其是否感染结核分歧杆菌[8]。因此，结核感染酶联免疫法与其他检测方法相比，优势在于检测快速，无需随访判断，1天内即可确认结果；接种卡介苗无法影响实验结果；检测均在体外进行，可反复检测；检测包涵性较强，可同时应用于肺外结核检测；检测结果不易受常见致病性非结核分歧杆菌影响；检测过程试验稳定、操作简便，结果客观性强，不受医务人员主观因素影响，且结果易于判读；检测错误率低，使抗药性降低，节约医疗成本。结核菌素试验为通过对机体细胞免疫功能的检测来判断是否感染结核分歧杆菌的方法，实验所用的纯化蛋白衍生物为结核分歧杆菌培养上清液粗提物，包含200种以上的成分[9]。其根据IV型变态反应原理的皮肤试验，有结核菌液体培养基中提取结核蛋白，注射于皮内。其机制为机体若感染过结核分歧杆菌，会产生对应致敏淋巴细胞，其可识别结核分歧杆菌或结核杆菌中的特异蛋白成分，再次遇到时，致敏淋巴细胞受刺激产生多种可溶性淋巴因子，进而增加血管通透性，巨噬细胞局部浸润及聚集，60 h左右，局部产生红肿硬结，显示变态反应阳性。结核菌素试验广泛应用于结核病临床检测，但其结果显示阳性时无法区分是卡介苗接种导致的免疫反应还是结核分歧杆菌自然感染。因此，近年来随着卡介苗接种的广泛推行，使结核菌素试验检测结核分歧杆菌感染受到一定程度的限制[10]。该研究结果显示，结核感染酶联免疫法特异度、灵敏度均显著优于结核菌素试验结果，差异有统计学意义（P＜0.05）。结果充分表明结核感染酶联免疫法检测准确性更高，与此同时，结核感染酶联免疫法检测阳性似然比（LR+）为11.94、阴性似然比（LR-）为0.99，显著优于结核菌素试验检测，LR可充分说明检测结果与检测方法关系紧密，显著表明结核感染酶联免疫法检测结核病检测准确性更加可靠。

综上所述，结核感染酶联免疫法检测敏感性更高，且检测即时性好，适用于结核病检测，尽管试剂盒成本较高，限制其广泛推广，但无法掩盖结核感染酶联免疫法检测准确性较高的优势。

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Im portant Value of Euzymelinked Immunosorbent Assay in Detecting Bacillary Phthisis

LIU Tan
Department of Clinical Laboratory,Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University,Luoyang,Henan Province, 471009 China

R7

A

1672-5654（2016）06（a）-0108-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.16.108

刘坦（1983.12-），女，河南洛阳人，硕士，主管技师，研究方向：免疫学。

2016-03-10）