分子分型和TOPOⅡα对乳腺癌新辅助化疗疗效及预后的预测

李东松，丁玉芝，江庆斌，蔡泽华

(潮州市人民医院外三科，广东 潮州 521000)



分子分型和TOPOⅡα对乳腺癌新辅助化疗疗效及预后的预测

李东松，丁玉芝，江庆斌，蔡泽华

(潮州市人民医院外三科，广东 潮州 521000)

目的探讨分子分型和TOPOⅡα的表达对乳腺癌新辅助化疗(NAC)疗效及预后的预测价值。方法对53例乳腺癌NAC患者进行回顾性分析，依据ER、PR、Her-2及Ki-67的表达进行分子分型，同时检测TOPOⅡα的水平(分为高表达和低表达)。分析各分子分型、TOPOⅡα与疗效及预后的关系。结果乳腺癌NAC总有效率为79.25%(42/53)。三阴性型、Luminal A型、Luminal B型和Her-2型4组分子分型间的疗效比较差异有统计学意义(P<0.05)；三阴性型疗效优于Luminal A型(P<0.05)，Luminal A型、Luminal B型、Her-2型三者间的疗效比较差异无统计学意义(P>0.05)。达到病理完全缓解(pCR) 5例，三阴性型4例，三阴性型优于Luminal亚型(P<0.05)。OPOⅡα高表达者疗效优于低表达者(P<0.05)。在术后无病生存率方面，Luminal A型优于其他3个亚型，而三阴性型无病生存时间最差，低于其他3个亚型(P<0.05)。TOPOⅡα低表达者无病生存率优于高表达者(P<0.05)。结论分子分型和TOPOⅡα与乳腺癌NAC疗效及预后相关，三阴性型疗效较好，但预后较差，Luminal A型预后最好。TOPOⅡα低表达者疗效差，但预后较好。

乳腺癌； 新辅助化疗； 分子分型； DNA拓扑异构酶Ⅱα

由于乳腺癌的生物学及临床行为存在着异质性，目前主张个体化治疗。新辅助化疗(NAC)能消除局部晚期乳腺癌全身的微转移灶，对临床分期进行降级，使一些既往认为不可手术的病例变成可手术切除，同时也可评估乳腺肿瘤细胞对化疗的敏感性,因而新辅助化疗在局部晚期乳腺癌的治疗中已广泛应用。寻找可预测乳腺癌NAC疗效的生物学标志物对乳腺癌的个体化治疗有重要的意义。有学者[1-2]认为雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(Her-2)、肿瘤细胞增殖核抗原(Ki-67)、DNA拓扑异构酶Ⅱα(TOPOⅡα)与乳腺癌生物学行为、病理特征及预后密切相关。本文探讨ER、PR、Her-2、Ki-67、TOPOⅡα的表达对NAC疗效及预后的预测价值。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取2010年1月至2014年6月潮州市人民医院收治的局部晚期乳腺癌患者53例，均为女性、单侧、初治、原发并排除全身远处转移，入院前均未接受过放疗、化疗、内分泌及靶向治疗。患者年龄32～62岁，中位年龄48岁；绝经前42例，绝经后11例；入院时均有可评估大小的病灶，肿瘤直径>2～5 cm的患者39例，>5 cm的患者14例；超声或触诊发现腋窝淋巴结肿大36例；病理检查结果：浸润性小叶癌3例，黏液腺癌2例，混合癌4例，浸润性导管癌44例；TNM分期：Ⅱ期26例，Ⅲa期19例，Ⅲb期8例；心、肺、肝、肾等重要器官功能正常。

1.2治疗方法

53例均行空芯针穿刺活检，标本送病理检查证实为乳腺癌，并行ER、PR、Her-2、Ki-67、TOPOⅡα检测。术前辅助化疗方案有CAF(环鳞酰胺500 mg·m-2d1，吡柔比星50 mg·m-2d1，5-氟胞嘧啶500 mg·m-2d1)、EC方案(表阿霉素90 mg·m-2d1,环鳞酰胺600 mg·m-2d1)、TE方案(多西他赛75 mg·m-2d1，表阿霉素75 mg·m-2d1)，每21 d为1个疗程，所有患者均完成2～6周期化疗，化疗后2～3周手术，其中根治术25例，改良根治术28例。术后标本再次行ER、PR、Her-2、Ki-67、TOPOⅡα检测。术后完成剩余化疗疗程，并给予内分泌、放疗、靶向治疗等辅助治疗。

1.3免疫组织化学方法及结果判读

1.3.1实验方法

空芯穿刺活检及术后标本均以10%甲醛溶液固定并送检，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，脱蜡、脱水后再以常规免疫组织化学SP检测ER、PR、Her-2、Ki-67、TOPOⅡα，染色方法严格按照试剂盒说明书进行。结果由2名病理科医生阅片，对表达状态作出判定。

1.3.2结果判读

ER、PR、Ki-67、TOPOⅡα定位于肿瘤细胞核，以细胞核呈清晰的黄色或棕黄色着色为阳性，根据阳性细胞比例进行定义：ER、PR以<10%为阴性，≥10%为阳性，TOPOⅡα以<25%为低表达，≥25%为高表达，Ki-67以<14%为低表达，≥14%为高表达。HER-2蛋白定位于细胞膜和细胞质，阳性者显示为棕黄色颗粒，判定标准为：浸润性肿瘤细胞无着色为(-)；任何比例的浸润性肿瘤细胞呈弱而不完整的胞膜着色或<10%的肿瘤细胞呈弱且完整着色为(+)；≥10%的肿瘤细胞呈现弱或不一致的、完整的胞膜着色；或≤30%的肿瘤细胞呈现强且完整的胞膜着色为()；≥30%的浸润性肿瘤细胞呈现强且完整的胞膜着色为()。(-)或(+)作为阴性，()认为阳性，()则行Fish检测进一步明确。

依据ER、PR、Her-2、Ki-67的表达状态对乳腺癌进行分子分型。Luminal A型：ER和(或)PR阳性，Her-2阴性，Ki-67低表达；Luminal B型：ER和(或)PR阳性，Her-2阳性和(或)Ki-67高表达；Her-2型：ER和PR阴性，Her-2阳性；三阴性：ER、PR及Her-2均阴性。

1.4疗效评定

NAC前及每两周期、手术前均以彩色多普勒测量肿瘤大小，并评估其体积变化。临床效果按照国际实体瘤疗效评价标准[3]进行评估：1)临床完全缓解(CR)：临床检查肿瘤完全消失；2)临床部分缓解(PR)：肿瘤体积缩小≥50%；3)疾病稳定(SD)：肿瘤体积缩小<50%或增大<25%；4)疾病进展(PD)：肿瘤体积增大≥25%。总有效率(RR)=CR+PR。病理评价按照文献[4]方法将其分为G1—G5五级，化疗后手术切除标本的病理与化疗前穿刺组织的病理相比较。G5：未见浸润性癌残留；G4：有零散分布的浸润性肿瘤细胞，估计肿瘤细胞减少90%以上；G3：肿瘤细胞显著减少，肿瘤细胞减少比例为30%～90%；G2：可见肿瘤细胞减少，但减少比例不足30%；G1：肿瘤细胞未减少。若术后标本病理检查未见浸润性癌残留，则为病理完全缓解(pCR)。

1.5统计学方法

采用SPSS17.0软件对数据进行分析。计数资料比较采用χ2检验，样本总例数≥40，但有1≤理论频数<5时，采用χ2检验校正公式，组间无病生存率比较采用Kaplan-Meier分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

Luminal A型13例，Luminal B型14例，Her-2型16例，三阴性10例。临床效果：RR为42/53(79.25%)，其中CR 10/53，PR 32/53，SD 11/53，PD 0/53，术后病理检查发现有5例达pCR。

2.1不同分子分型与乳腺癌NAC疗效的关系

分子分型与乳腺癌NAC疗效的关系见表1。由表1可见Luminal A型、Luminal B型、Her-2型、三阴性型、4种分子分型间的疗效比较差异有统计学意义(P<0.05)。两两间的比较：三阴性型疗效优于Luminal A型(P<0.05)，三阴性型疗效与Luminal B型、Her-2型相比较，差异无统计学意义(P>0.05)。Luminal A型、Luminal B型、Her-2型三者间的疗效比较差异无统计学意义(P>0.05)。在pCR方面，三阴性型优于Luminal亚型，差异均有统计学意义(P<0.05)；Luminal A型、Luminal B型、Her-2型三者间的比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表1　分子分型与乳腺癌NAC疗效的关系　例

2.2TOPOⅡα与乳腺癌NAC疗效的关系

TOPOⅡα高表达者25例，其中CR7例，PR16例，pCR3例；TOPOⅡα低表达者28例，其中CR4例，PR15例，pCR2例。2组RR相比较，TOPOⅡα高表达者优于低表达者，其差异有统计学意义(P<0.05)，而在pCR方面，2组差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2　TOPOⅡα表达水平与乳腺癌NAC疗效的关系　例

2.3分子分型、TOPOⅡα表达水平与患者预后的关系

所有患者均进行门诊或电话随访，中位随访时间为38(12～50)个月，无失访病例。至随访结束，24例患者出现局部复发或远处转移，其中9例死亡，15例仍存活。另有3例因其他疾病而死亡。通过Kaplan-Meier分析患者无病生存率，Luminal A型优于其他3个亚型，而三阴性型无病生存时间最差，低于其他3个亚型，差异均有统计学意义(P<0.05)，见图1。TOPOⅡα低表达者无病生存率高于高表达者，差异有统计学意义(P<0.05)，见图2。

图1　不同分子分型的无病生存率Kaplan-Meier分析　　　图2　不同TOPOⅡα表达水平的无病生存率Kaplan-Meier分析

3　讨论

表达谱基因芯片技术将乳腺癌分为4种分子亚型[5]，分子分型使人们对乳腺癌的分子生物学行为特征有更深的认识。利用ER、PR、Her-2、Ki-67的组合，将其作为基因表达谱分子分型的代替方法已得到广泛认可。其恶性程度由高到低依次为三阴性型、Her-2型、Luminal B型、Luminal A型。乳腺癌是激素依赖性肿瘤，受ER、PR调控。ER、PR能有效地预测内分泌治疗的疗效，也是化疗方案的选择依据之一，阳性者预后较好。Her-2基因与乳腺癌关系密切，对细胞的增殖、分化起着重要的调节作用，高表达常提示肿瘤恶性程度高、易复发，生存期短，是预测乳腺癌预后的独立因素。Ki-67是肿瘤细胞核增殖抗原，与肿瘤的发生、浸润、种植及转移有关，高表达预示肿瘤恶性程度高。分子分型应用于乳腺癌NAC疗效及预后的预测是一个热点。Liedtke等[6]指出三阴性型患者NAC后pCR明显优于其他亚型者。也有学者[7-8]认为三阴性型、Her-2型患者NAC后获得pCR高于Luminal亚型组。本研究认为三阴性型患者pCR高于Luminal亚型，但与Her-2型相比较差异无统计学意义，且Her-2型组也不优于Luminal亚型组，结果与上述研究结果有部分不同，这可能与纳入研究的病例数少有关。比较明确的是三阴性型患者NAC后pCR的概率最高，Luminal亚型者NAC获得pCR的概率较低。在NAC总有效率方面，王永南等[9]认为三阴性型高于Luminal A型，这与本研究结果相似。NAC后RR及pCR相比较，Luminal亚型的患者获益最低，这可能与ER、PR高表达者对化疗药物不敏感，而低表达或无表达对化疗较敏感有关。

TOPOⅡα是一种存在于原核生物及真核生物的核酶，具有调节DNA空间拓扑结构变化，参与其重组、复制、转录，在DNA代谢、细胞分裂增殖过程中具有重要作用。有学者[10-11]报道，TOPOⅡα高表达者接受蒽环类药物化疗可获得更大的疗效，这可能与TOPOⅡα是蒽环类药物作用靶点，结合后药物能抑制TOPOⅡα蛋白的表达有关。可将其用于预测NAC的疗效。本研究中所使用的化疗方案均含有蒽环类药物，结果认为TOPOⅡα高表达者NAC获益更好，同时在无病生存率方面，TOPOⅡα低表达者无病生存时间较高表达者更长。

寻找预测NAC疗效的方法对改善患者的预后有重要的意义。目前较明确的是三阴性型乳腺癌患者的NAC疗效最好，Luminal亚型的疗效较差，而Her-2型疗效尚存在争议，TOPOⅡα在预测疗效方面的研究仍偏少，对这2个预测因素的研究仍需进一步深入，如有大规模多中心联合研究将更有助于明确乳腺癌NAC疗效的影响因素。

[1]覃舒婷，莫军扬，周韬.乳腺癌分子亚型对新辅助化疗疗效及预后的预测价值[J].实用医学杂志，2015，31(6)：953-955.

[2]蒋奕，叶新青，黄俊淇，等.乳腺癌新辅助化疗前后分子标记物变化及其与疗效的关系[J].广西医科大学学报，2015，32(2)：211-215.

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(责任编辑：钟荣梅)

Prediction of Efficacy and Prognosis with Molecular Subtype and TOPOⅡα in Patients Undergoing Neoadjuvant Chemotherapy for Breast Cancer

LI Dong-song,DING Yu-zhi,JIANG Qing-bin,CAI Ze-hua

(TheThirdDepartmentofSurgery,ChaozhouPeople’sHospital,Chaozhou521000,China)

ObjectiveTo study the values of molecular subtype and TOPOⅡα expression in predicting the efficacy and prognosis in patients undergoing neoadjuvant chemotherapy(NAC) for breast cancer.MethodsData of 53 patients who underwent NAC for breast cancer were analyzed retrospectively.According to the expression of ER,PR,Her-2 and Ki-67,these patients were divided into four molecular subtypes.According to TOPOⅡα levels,these patients were divided into high expression group and low expression group.The relationships of molecular subtypes and TOPOⅡα levels to the efficacy and prognosis were analyzed.ResultsThe overall response rate was 79.25%(42/53).Compared with Luminal A subtype,the efficacy of NAC was significantly improved in basal-like subtype(P<0.05).There were no significant differences in the efficacy among Luminal A subtype,Luminal B subtype and Her-2 subtype(P>0.05).Basal-like subtype(4 cases) was superior to Luminal subtype(1 case) for achieving a pCR(P<0.05).The efficacy of NAC in high TOPOⅡα expression group was better than that in low TOPOⅡα expression group(P<0.05).The postoperative disease-free survival rate in Luminal A subtype was higher than that in other three subtypes(P<0.05).Basal-like subtype exhibited the shortest disease-free survival(P<0.05).The disease-free survival rate in low TOPOⅡα expression group was higher than that in high TOPOⅡα expression group(P<0.05).ConclusionMolecular subtype and TOPOⅡα are correlated with the efficacy and prognosis in patients undergoing NAC for breast cancer.Basal-like subtype is associated a good efficacy,but a poor prognosis.The prognosis is the best in Luminal A subtype.Patients with low TOPOⅡα expression have a good prognosis,but a poor efficacy.

breast cancer; neoadjuvant chemotherapy; molecular subtype; TOPOⅡα

2015-12-26

李东松(1981—)，男，硕士，主治医师，主要从事乳腺外科、疝与腹壁外科学的研究。

R737.9

A

1009-8194(2016)06-0031-04

10.13764/j.cnki.lcsy.2016.06.012