参力保与二氮嗪对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用

董淑雯

(潍坊护理职业学院医学系，山东　潍坊　261041)



参力保与二氮嗪对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用

董淑雯

(潍坊护理职业学院医学系，山东潍坊261041)

目的比较参力保与二氮嗪对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法结扎兔冠状动脉左前降支(LAD)30 min，复灌120 min后复制家兔心肌缺血再灌注模型。40只家兔，随机分为5组，假手术组、模型组、参力保组、二氮嗪组、参力保+5-羟葵酸 (5-HD)组。测定左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVDEP)、缺血区面积、梗死区面积、血肌钙蛋白I(CTnI)活性。结果参力保与二氮嗪均升高LVSP、降低LVDEP，与模型组和参力保+5-HD组相比，有显著差异(P<0.05)；参力保与二氮嗪组显著降低血浆CTnI的活性，与模型组和参力保+5-HD组相比有显著差异(P<0.01)；并降低心肌梗死面积，与模型组和参力保+5-HD组相比有显著差异(P<0.05)；而参力保组与二氮嗪组上述所有指标比较差异无统计学意义(P>0.05)，参力保+5-HD组与模型组上述所有指标比较差异无显著性(P>0.05)。结论参力保与二氮嗪对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用相似，其保护作用能被线粒体ATP敏感性钾通道阻滞剂5-HD所阻断，其机制可能与开放线粒体ATP敏感钾通道通道有关。

参力保；二氮嗪；心肌缺血再灌注损伤；ATP敏感性钾通道

二氮嗪是线粒体ATP敏感钾通道特异性开放剂，对缺血再灌注心肌提供保护作用〔1〕，但在临床上应用发现可引起低血压等副作用。参力保为人参三醇系皂苷单体，系从五加科植物属人参茎叶中提取的单体，可抑制兔心肌缺血再灌注时的自由基产生，减轻脂质过氧化反应，对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。饶先伟等〔2〕研究报道人参皂苷Rg2对改善心肌缺血再灌注损伤、保护心肌有一定疗效，而且随着剂量的增加疗效更明显。本试验以兔复制心肌缺血再灌注模型，通过比较参力保与二氮嗪的抗心肌缺血作用，进一步探讨参力保的作用机制，以期为临床寻找一种对心肌保护作用更安全可靠的药物。

1　材料与方法

1.1动物普通级大耳白兔，雌雄不拘，体重2.0～3.0 kg，由武汉市新洲区全耀动物养殖场提供〔实验动物合格证号：Scxk(鄂)2004-0006〕。

1.2药品及试剂参力保粉剂由吉林省中医中药研究院提供，临用时配成所需浓度；溶媒：羟丙基-β-环糊精，西安德立生物化工有限公司生产；二氮嗪注射液由北京紫竹药业有限公司生产，批号国药准字H11021791；5-羟葵酸(5-HD)；伊文思蓝和氯化三苯基四氮唑(TTC)均购自Sigma公司。血肌钙蛋白I(CTnI)试剂盒:美国DPC公司。

1.3仪器722-分光光度计(上海)，全自动生化分析仪(LANDMARK,AG-Ⅱ,美国)，BL-420F生物机能实验系统、YPJ01型压力换能器(成都医疗仪器厂)。

1.4实验方法大耳白兔40只，随机分为5组，每组8只。假手术组：开胸左冠脉前降支(LAD)下穿线不结扎,给予生理盐水；模型组：给予溶媒(8.58 mg/kg)；参力保组：参力保(22.36 mg/kg，内含参力保5.2 mg/kg)；二氮嗪组：二氮嗪注射液3 mg/kg；参力保+5-HD组：参力保(22.36 mg/kg，内含参力保5.2 mg/kg)+5-HD(5 mg/kg)。用2%戊巴比妥钠30 mg/kg经耳缘静脉缓慢注入，麻醉后固定于兔台，四肢及胸前皮下置入电极，监测心电图变化。右颈总动脉插入导管，进入左心室，导管末端通过压力换能器连接BL-420F生物机能实验系统。去胸前毛，沿胸正中线剪开皮肤，从剑突上沿胸骨正中线开胸，以小型开胸器扩开切口使心脏暴露良好，用眼科镊轻提起心包，小心剪开，用止血钳提起左心耳，于LAD与冠脉出口下方3 mm处结扎LAD(线下放一细空心硅胶管)，造成心肌缺血，30 min后结扎处打开，关闭胸腔，再灌前5 min静注各种药物，再灌注120 min，为保证存活率可适当补充糖盐水。

1.5观察指标

1.5.1左室功能检查实验中待心电图压力曲线稳定，观察5 min，由BL-420F生物机能实验系统检测再灌120 min时左室收缩压(LVSP)，左室舒张末期压(LVDEP)的变化。

1.5.2血浆心肌酶测定心脏采血(肝素抗凝)，3 000 r/min离心15 min，取上清，用自动生化分析仪检测血CTnI的活性。

1.5.3心肌缺血及梗死范围测定〔3〕于复灌结束后，原位结扎LAD，取出心脏，用生理盐水漂洗心腔内积血，剔除心房和右室，由升主动脉注入0.01 mol/L的伊文思蓝1.2～1.4 ml,冻存30 min后，自心尖到心底，将左室切成6 mm薄片，然后置于0.03 mol/L的TTC中避光37℃水浴15 min，再经3.33 mol/L甲醛固定10 min后，可见梗死区(IS)心肌呈灰白色；缺血区(AAR)呈红色；未缺血区呈蓝色。分别称重，计算缺血区面积百分比和梗死区面积百分比。

1.6统计学方法应用SPSS12.0 软件进行单因素方差分析。

2　结　果

2.1心功能指标再灌120 min时，参力保组、二氮嗪组与模型组、参力保+5-HD组比较，LVSP 升高明显，LVDEP降低(P<0.05)；参力保组与二氮嗪组比较，LVSP、LVDEP无显著差异(P>0.05)；参力保+5-HD组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2对血浆心肌酶的影响参力保组、二氮嗪组与模型组、参力保+5-HD组比较可明显降低CTnI(P<0.05)；参力保组与二氮嗪组比较无差异性(P>0.05)；参力保+5-HD组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　参力保对缺血/再灌注损伤后心功能指标及心肌缺血、梗死及心肌酶的影响±s,n=8)

与模型组比较：1)P<0.05；与参力保+5-HD组比较：2)P<0.05

2.3心肌缺血及梗死面积除假手术组外，各组对比缺血区面积无显著差异,说明各组动物的缺血程度具可比性；参力保组、二氮嗪组与模型组、参力保+5-HD组比较可明显降低梗死区面积(P<0.05)；参力保组与二氮嗪组比较无差异(P>0.05)；参力保+5-HD组与模型组比较无差异(P>0.05)。见表1。

3　讨　论

我们在前期试验中已经证实参力保可明显降低缺血再灌注心肌磷酸激酸同工酶(CK-MB)水平和丙二醛(MDA)含量，保护抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)活性，抑制了胞内酶的释放，减轻心肌损伤〔4〕。而在本试验中与二氮嗪的作用比较，以观察参力保对线粒体 ATP敏感性钾通道的作用。

Garlid 等〔1〕首先在离体鼠心的实验中发现二氮嗪能对局部缺血再灌注心肌提供保护作用。研究显示，二氮嗪预处理和后处理均是通过开放线粒体敏感性钾通道而发挥心肌保护效应的〔5〕。近年来国内学者对二氮嗪也做了大量研究，刘蔚等〔6〕在心肌缺血前预防性给予二氮嗪静脉注射，可以降低心肌梗死面积,改善心电图损伤坏死性变化，减少血清肌酸激酶(CK)活性的增加，可见二氮嗪能够减轻心肌缺血再灌注损伤。 Mykytenko等〔7〕在犬体冠状动脉阻塞60 min和再灌注24 h的模型中，发现5-HD可以消除缺血后处理的心肌保护作用，证实5-HD是线粒体ATP敏感性钾通道的特异性阻断剂，鹿欣等〔8〕的研究也证实给予二氮嗪和5-HD后，缺血心肌线粒体Flameng评分增高，表明5-HD取消了二氮嗪预处理、后处理的保护作用。

当心肌缺血再灌注损伤发生心肌动力学障碍时,LVSP、左室内压(LVDP)减低,LVEDP增高。而目前认为评价缺血预处理是否保护心肌的金指标是心肌梗死范围的降低。本试验结果表明，参力保与二氮嗪对缺血/再灌注损伤心肌有相似的保护作用，其保护作用能被5-HD所阻断，说明参力保的抗心肌缺血作用与开放线粒体ATP敏感性钾通道有关，而引起线粒体ATP敏感性钾通道开放的机制尚待进一步研究，且在试验过程中未发现参力保有不良作用。

1Garlid KD，Paucek P，Yarovoy VY，etal.Cardioprotective effect of diazoxide and its interaction with mitochondrial ATP-sensitive K+channels-possible mechanism of cardioprotection〔J〕.Circ Res，1997;81(6):1072-82.

2饶先伟，叶泽兵.人参皂苷Rg2后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制〔J〕.现代医院,2013;13(8):18-20.

3徐钢，季永，汪莉，等.内源性硫化氢参与缺血后处理减轻离体大鼠心脏缺血/再灌注损伤〔J〕.中国药理学通报,2008;24(7):910-4.

4董淑雯，宋海滨，单迅，等.参力保对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用〔J〕.青岛大学医学院学报,2008；44(2):99-101.

5赵其宏，张颖，梁启胜，等.二氮嗪后处理对缺血/再灌注心肌的保护作用及其与PI3K/Akt 信号通路的关系〔J〕.中国药理学通报,2012;28(1):127-31.

6刘蔚，李莹莹，汪海.线粒体KATP开放剂二氮嗪对家兔心肌缺血-再灌注损伤的影响〔J〕.山东医药,2013;53(8):22-5.

7Mykytenko J,Reeves JG,Kin H,etal.Persistent beneficial effect of postconditioning against infarct size:role of mitochondrial K(ATP)channels during reperfusion〔J〕.Basic Res Cardiol,2008;103(5):472-84.

8鹿欣，陈克彪，马磊，等.探讨二氮嗪后处理联合预处理对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用〔J〕.泰山医学院学报,2011;32(12):893-6.

〔2015-02-18修回〕

(编辑苑云杰/曹梦园)

潍坊市卫生局中医药科技计划项目(No.2013C017)

董淑雯(1965-)，女，硕士，副教授，主要从事心血管病学研究。

R541.4

A

1005-9202(2016)18-4428-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.18.011