栀子褐斑病抑菌药剂筛选△

罗光明，董艳凯，朱玉野，胡燕珍，龚雨虹，王晓云

(江西中医药大学 药学院，江西 南昌 330004)

栀子褐斑病抑菌药剂筛选△

罗光明，董艳凯，朱玉野，胡燕珍，龚雨虹，王晓云*

(江西中医药大学 药学院，江西 南昌 330004)

目的对引起栀子褐斑病的病原菌葡萄座腔菌Botryosphaeriadothidea抑菌药剂进行室内筛选试验，研究常用杀菌剂对病原菌菌丝生长的抑制作用。方法选用常见的17种杀菌剂，通过菌丝生长抑制方法，分别对病原菌进行抑菌效果测定，并建立药剂浓度和抑制率的毒力回归方程，通过方程计算EC50，筛选出有效的抑菌药剂，为防治该病的发生提供理论依据。结果除了氯霉素、盐酸四环素、链霉素、寡糖链蛋白之外，其他药剂均对葡萄座腔菌有不同程度的抑制作用，其中以多菌灵的杀菌效果最好，回归方程为Y=1.10X+5.88(r=0.990，EC50=0.31 μg·mL-1)，其次为五硝多菌灵、百菌清、甲基硫菌灵、咪鲜三环唑，回归方程分别为Y=1.26X+5.14(r=0.995，EC50=1.34 μg·mL-1)、Y=1.12X+3.66(r=0.956，EC50=6.65 μg·mL-1)、Y=1.27X+3.94(r=0.984，EC50=9.89 μg·mL-1)、Y=2.04X+3.41(r=0.913，EC50=9.95 μg·mL-1)。结论筛选出了抑制褐斑病病原菌的有效药剂。

栀子；褐斑病；药剂筛选

栀子来源于茜草科(Rubiaceae)植物栀子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果实，其性寒味苦，归心肺三焦经，具有泄火除烦，清热利尿，凉血解毒之功效，用于黄疸尿赤，血淋涩痛，尿血崩漏等[1]，栀子原产中国中部，分布于长江以南各省，现在世界各地广泛栽培，主要含环烯醚萜类、西红花苷类、黄酮类等成分，是卫生部颁布的第1批药食两用资源。栀子还有很多其他用途，栀子是古代应用广泛的黄色染料，现代还用于提取工业染料和食用色素。国内外对于栀子的需求量很大，且不断上升，具有很好的市场前景[2]。

目前国内外对栀子的需求量日益增加，具有广阔的市场前景，栽培面积不断扩大[3]。褐斑病为栀子栽培中的主要病害之一，病害全年都可能发生，严重时植株落叶、落果或枯死，直接影响药材的产量和质量，造成巨大的经济损失。防治手段也仅限于病害发生初期或发生期施用多菌灵、退菌特等。病害控制应在明确病原的前提下针对性的进行，才能取得最优的防治效果。本研究通过在实验室培养栀子褐斑病病原菌，用不同的杀菌剂对病菌进行处理，筛选防治栀子褐斑病最有效的药剂，为栀子褐斑病的防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验概况

栀子褐斑病病原菌为病变组织经常规组织分离法[4]分离培养得到，确定为葡萄座腔菌Botryosphaeriadothidea。

1.2 供试药剂及浓度

供试药剂见表1。每种药剂设置5个浓度梯度，每个浓度重复3次，以无菌水为对照。

表1 供试药剂

1.3 病原菌的室内药剂毒力测定

杀菌剂对病原菌菌丝生长的抑制作用采用菌丝生长速率法来测定。将选用的药剂用无菌水配制成一定浓度的母液，使用时稀释成不同的浓度梯度，按照倍数稀释法用移液枪吸取1 mL药液加入到100 mL已灭菌的PDA培养基中，使培养基中药剂的浓度达到所需的倍数。取6 mm直径的菌饼接种于含药的PDA平板中央，菌丝面朝下，每皿1个菌丝块。以接种加1 mL无菌水的培养基为空白对照，每个处理设置3次重复。置于30 ℃培养箱中恒温黑暗培养，72 h后采用十字交叉法对菌落直径进行测量，计算杀菌剂对菌丝生长的抑制率，求建立抑制率和药剂浓度的毒力回归方程，并比较几种供试药剂的毒力大小。抑菌率=(对照菌落净直径-处理菌落净直径)/(对照菌落净直径-0.6)×100%。取药剂浓度的对数值为X，菌丝生长相对抑制率的机率值为Y，采用spss 19.0计算毒力回归方程，相关系数(r)及EC50值。

2 结果与分析

2.1 病害症状调查结果

褐斑病为真菌性病害，全年都可发生，但以高温高湿的多雨炎热夏季为害最重。主要发生在植株的中、下部叶片，发病从下部叶片开始，多从叶尖和叶缘处发生，病斑呈现不规则形[5]，内部淡褐色而周边略呈角型浓淡有差别的同心轮纹病斑。病重时病斑直径可达2～3 cm。以后病斑变成黑褐色，严重时植株落叶、落果或枯死。一般种植密度大、土壤粘重、环境潮湿条件下病害发生更为严重。

2.2 不同杀菌剂对葡萄座腔菌的抑制效果

通过测定供试的17种杀菌剂对病原菌的室内毒力可以看出不同药剂的抑制效果差异明显(表2)。其中以多菌灵的抑菌效果最好，EC50为0.31 μg·mL-1，其次为五硝多菌灵、百菌清、甲基硫菌灵、咪鲜三环唑，EC50分别为1.34、6.65、9.89、9.95 μg·mL-1。氯霉素、盐酸四环素、链霉素、寡糖链蛋白无明显的抑菌效果，抑制率与杀菌剂浓度之间未达到显著水平。其余药剂在设置的不同浓度下对病原菌的生长都有一定的抑制作用，供试杀菌剂的相关系数均达到显著或极显著差异，即毒力回归方程成立。具体结果见表2。杀菌剂的毒力回归方程斜率值越大表明病原菌对该杀菌剂敏感性越强。由表2的回归方程可知，每种药剂的毒力回归方程斜率与药剂毒力成正比。此次试验只测定杀菌剂对病原菌的室内毒力，大田防效还有待进一步试验研究[6]。

表2 不同杀菌剂对葡萄座腔菌的毒力比较

续表2

注：*表示存在显著性差异

3 讨论

褐斑病各地普遍发生。发病后期病斑穿孔或完整，降低栀子的观赏性[7]。褐斑病病害症状随着植物种属和病原菌株系等不同而表现不同。作者在基地调查时发现光照充足、栽培密度低、通风性好、环境湿度低的基地中褐斑病发病率普遍较低，建议在生产中加大植株个体间的距离，从而改善栀子在发病季节的整体表现，提高植株的综合抗病或耐病能力，减轻病害的蔓延趋势，尽可能地避免或减少病害发生所造成的危害。

药剂防治是植物病害防治的关键。而在药剂的选择时，最重要的是要考虑药剂对病原菌的杀灭能力，而通过测定杀菌剂的室内毒力可以更清楚地了解杀菌剂对褐斑病病原菌的作用大小[6]。本试验结果反映了不同类型杀菌剂对病菌的抑制效果，筛选出了5种最为有效的杀菌剂，多菌灵的抑菌效果最为明显。抑菌药剂筛选结果表明，不同的化学杀菌剂处理病原菌抑制作用的差异具有统计学意义。本研究为栀子褐斑病的防治提供了理论依据。

[1] 倪慧艳，张朝晖，傅海珍.中药栀子的研究与开发概述[J].中国中药杂志，2006，31(7)：538-541.

[2] 罗光明，董艳凯，朱玉野，等.不同产地栀子种子同工酶比较[J].江苏农业科学，2015，43(8)：244-247.

[3] 罗光明，董艳凯，王晓云，等.栀子种子质量标准研究[J].湖北农业科学，2014，53(19)：4628-4631.

[4] 孙广宇，宗兆锋.植物病理学实验技术[M].北京：中国农业出版社，2002：94.

[5] 李国元，邓青云.栀子主要病害发生特点及综合防治[J].湖北林业科技.2003，(125)：24-26.

[6] 赵金梅，高贵田，谷留杰，等.中华猕猴桃褐斑病病原鉴定及抑菌药剂筛选.中国农业科学[J].2013，46(23)：4916-4925.

[7] 李冬，刘兴平.栀子病害调查及病原鉴定初报[J].江西林业科技，2009，(5)：31-32.

GardeniaLeafSpotScreeningAntibioticsAgents

LUOGuangming，DONGYankai，ZHUYuye，HUYanzhen，GONGYuhong，WANGXiaoyun*

(JiangxiuniversityoftraditionalChinesemedicinecollegeofpharmacy，Nanchang330004，China)

Objective：Common fungicides were screened indoor to study their inhibitory effect to mycelial growth of Botryosphaeria，which proved the pathogenic fungus of brown blotch in gardenia.MethodsChose 17 common fungicides，determined their inhibitory effect by mycelial growth inhibition method and established toxicity regression equation of agent concentration and inhibition ratio.The EC50 was calculated by the equation and effective fungicides were screened out accordingly，meanwhile，theoretical basis was provided for controlling the disease.ResultsExcept chloramphenicol、tetracycline hydrochloride、streptomycin and oligosaccharide chain protein，all the other agents were showed different inhibition to Botryosphaeria，of which the carbendazim had the best sterilizing effect with the regression equation was Y=1.10X+5.88(r=0.990，EC50=0.31 μg·mL-1).The next were five nitrate carbendazim、chlorothalonil、thiophanate-methyl、prochloraztricyclazole，the regression equation were Y=1.26X+5.14(r=0.995，EC50=1.34 μg·mL-1)、Y=1.12X+3.66(r=0.956，EC50=6.65 μg·mL-1)、Y=1.27X+3.94(r=0.984，EC50=9.89 μg·mL-1)、Y=2.04X+3.41(r=0.913，EC50=9.95 μg·mL-1)respectively.Conclude Screened out the effective fungicide to inhibit pathogenic fungus of brown blotch.

Ggardenia;leaf spot;antibacterial agents

2015-10-13)

基于分子遗传图谱构建和重要性状QTL定位的栀子种质资源创新(20151BBG70037)；国家公益性行业科研专项资助项目(201507002)

*

王晓云，副教授，研究方向：中药种质资源与分子生药学研究；Tel：(0791)87119061，E-mail：326322962@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.8.020