活血通脉颗粒对兔颈动脉粥样硬化干预作用的实验研究*

谢 健魏 丹沈 超童晓云王雅莉李 晓

和春芳1石安华2陈文玲2刘 涛1赵 淳1

（1.云南省中医医院，云南中医学院第一附属医院，云南 昆明 650000；2.云南中医学院，云南昆明 650000）

·研究报告·

活血通脉颗粒对兔颈动脉粥样硬化干预作用的实验研究*

谢 健1魏 丹2沈 超2童晓云2王雅莉1李 晓1

和春芳1石安华2陈文玲2刘 涛1赵 淳1

（1.云南省中医医院，云南中医学院第一附属医院，云南 昆明 650000；2.云南中医学院，云南昆明 650000）

目的观察活血通脉颗粒对兔颈动脉粥样硬化（CAS）模型中颈动脉病变的影响。方法 将96只清洁级新西兰大白兔随机抽取10只为正常对照组，其余86只喂高脂饲料，11周后造模成后56只随机分为模型组、自然消退组、普通饲料活血通脉颗粒低、中、高剂量组、普通饲料辛伐他汀组、高脂饲料活血通脉颗粒中剂量组、高脂饲料辛伐他汀组8组，分别连续给药5周，各组经耳缘静脉采血，全自动生化分析仪测定血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）。取兔颈动脉组织行HE染色，观察其病理改变。结果正常组颈动脉内皮光滑，未见斑块和脂质沉积，模型组内皮明显增生，斑块内含有大量泡沫细胞，粥样斑块分布广泛。普通饲料活血通脉颗粒组较模型组内皮增生程度明显减轻，斑块内含较少泡沫细胞。普通饲料高剂量组整个动脉管壁层次尚清晰。模型组TC、TG、HDL-C、LDL-C与正常组比较均有明显升高（P<0.01）。给药5周后，活血通脉颗粒低、中、高剂量组和辛伐他汀组血脂4项与自然消退组比较，明显下降（P<0.05）；普通饲料活血通脉颗粒中、高剂量组和辛伐他汀组与活血通脉颗粒低剂量组比较，明显下降（P<0.05）；普通饲料活血通脉颗粒高剂量组与普通饲料辛伐他汀比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论活血通脉颗粒可能抑制颈动脉粥样硬化形成的作用。

活血通脉颗粒 颈动脉粥样硬化 血脂 兔

随着人口老龄化加快，颈动脉粥样硬化发病率不断上升。目前研究表明，10%~20%脑血管疾病是由于颈动脉因广泛硬化、斑块形成、管腔狭窄及阻塞使脑血流量减少而形成的［1］。动脉粥样硬化（CAS）造成的慢性脑功能损害和急性脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高及复发率高等特点［2-3］。因此，防治CAS的研究已成为降低心脑血管发病率及死亡率的关键。本文研究通过观察活血通脉颗粒对颈动脉粥样硬化家兔血脂4项血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇 （HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）检测，探讨活血通脉颗粒对防治CAS形成的作用机制，为中医药进一步防治CAS提供实验数据。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级新西兰大白兔96只，雌雄不限，（2.20±0.4）g，昆明医科大学实验动物学部提供，合格证号：SCXK（滇）2011-0004。基础兔料合格证号：SCXK（滇）2011-0005。环境温度20～26℃，室内湿度40～60℃。

1.2 仪器 20℃冰箱（海尔电器有限公司），SC-3614低速离心机（中佳公司，）Finesse E+切片机（Thermo公司），CS-V1型摊片烤片机（孝感市宏业医用仪器有限公司），BM-Ⅷ生物组织包埋机 （孝感市宏业医用仪器有限公司），TS-12A生物组织自动脱水机（孝感市宏业医用仪器有限公司），BX51光学显微镜 （Olympus）公司，AB204-S电子分析天平 （Mettler-Toledo）公司产品，DHP-360型电热恒温培养箱 （北京市永光明医疗仪器厂），手术剪、刀片、手术镊、5mL注射液，20ml注射液，普通采血管。

1.3 药品 活血通脉颗粒：由红景天、虎杖、三七粉、水蛭、茯苓、隔山消等组成，15 g/包，由云南省中医院制剂中心配制。辛伐他汀，商品名舒降之，规格40 mg/片，由默沙东制药有限公司生产（产品批号K005133）。

1.4 动物造模、分组、给药 新西兰白兔96只，随机抽取10只正常空白组，基础饲料喂养，余下86只高脂饲料喂养 （84.5%基础饲料中加入8%猪油，15%蛋黄粉，0.75%胆固醇，其中蛋黄粉由同和生物公司提供，产品批号为20130305，胆固醇由安徽天启公司提供，产品批号为20140316）每只动物每天投喂1次，每次投喂高脂饲料250 g。分别第9周、第11周后各抽取1只处死，取颈动脉血管进行病理学检查。光镜下观察见内膜明显增厚，伴有大量泡沫细胞，内皮细胞排列凌乱、不连续，大量平滑肌细胞迁移内膜，视为造模成功［4-5］。造模成功后剩56只，将模型兔随机分为模型组，自然消退组，普通饲料中药低、中、高剂量组，普通饲料辛伐他汀组，高脂饲料中药中剂量组，高脂饲料辛伐他汀组8组，每组7只。其中自然消退组，普通饲料中药低、中、高剂量组，普通饲料辛伐他汀组5组饲养基础饲料，高脂饲料中药中剂量组，高脂饲料辛伐他汀组2组饲养高脂饲料。灌胃每日1次，均自由饮水，连续灌胃5周。根据临床用药剂量，常用实验动物及人的体表面积比例［6-7］（剂量换算用），每1 kg体质量的实验兔每天给予1.87 mg。等体积蒸馏水灌胃。其成人服用生药86 g/d，制成颗粒后每袋含生药23.88 g，每袋重15 g。活血通脉颗粒低剂量组生药5.5 g/kg每天灌胃给药（相当于人的临床剂量的2倍），活血通脉颗粒中剂量组生药11 g/kg每天灌胃给药（相当于人的临床剂量的4倍），活血通脉颗粒高剂量组生药22 g/kg每天灌胃给药（相当于人的临床剂量的8倍）。

1.5 观察指标 观察实验兔一般情况，连续5周每天称重，观察精神状态，饮食饮水，大小便变化；造模第11周，实验兔禁食12 h，经耳缘静脉采血1.5 mL，全自动生化分析仪测定TC、TG、HDL-C、LDL-C。

1.6 采集颈动脉标本 打开颈部，在无菌条件下取出颈动脉，并且完全剥离，剥离颈动脉外膜的结缔组织，用0.9%的生理盐水冲洗干净，水平展开颈动脉内膜，肉眼观察颈动脉内膜的变化－粥样斑块形态、分布。取颈动脉组织10%甲醛固定、脱水、常规石蜡包埋切片，每只实验兔的颈总动脉取相同的切面，切片厚5 μm，HE染色。光镜下观察组织的病理改变，评价颈动脉粥样硬化程度。

1.7 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件分析。计量资料以（s）表示，采用t检验，多样本均数比较（M）用单因素ANOVA法。数据进行方差齐性检验，假定方差齐时，用两两比较LSD法，假定方差不齐时，用秩和检验。P＜0.05为差异有显著意义。

2 结 果

2.1 实验兔一般情况 造模后，第3周开始死亡，第8、9周死亡最多达13只。造模期间共死亡30只，获得成功模型兔56只。兔子体重迅速增加，活动较差，反应迟缓，第7周后饮食量开始下降。空白组，生长良好，活动好，反应迅速，饮水、二便正常。

2.2 各组血脂4项比较 见表1。实验前各组兔TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比较无明显差异 （P＞0.05）；11周后，模型组血脂4项明显升高（P＜0.01）。

表1 两组造模后血脂检测比较（mmol/L，s）

表1 两组造模后血脂检测比较（mmol/L，s）

与空白组比较，*P＜0.01。

别 n TC空白组 7 1.99±0.21模型组 7 30.82±1.44*TG HDL-C LDL-C 0.67±0.08 0.56±0.12 1.29±0.17 1.96±0.16*2.79±0.19*26.64±1.16*

2.3 HE染色颈动脉切片 见图1。空白组动脉管腔内膜完整光滑，未见动脉粥样硬化斑块和泡沫细胞。模型组内膜明显增厚，管腔变窄且程度不规则。内皮下可见大量泡沫细胞堆积。

图1 颈动脉HE染色（×40）

2.4 各组兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比较 见表2。给药5周后，普通饲料活血通脉颗粒组、普通饲料辛伐他汀组TC、TG、HDL-C、LDL-C较自然消退组明显降低（P＜0.05）；普通饲料活血通脉颗粒中、高剂量组、普通饲料辛伐他汀组血脂4项较普通饲料活血通脉颗粒低剂量组明显降低（P＜0.05）；普通饲料活血通脉颗粒高剂量组血脂4项较普通饲料辛伐他汀组无统计学意义（P＞0.05）；高脂饲料活血通脉颗粒中剂量组血脂4项较普通饲料活血通脉颗粒中剂量组明显升高（P＜0.05）。

表2 各组兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比较（mmol/L，s）

表2 各组兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比较（mmol/L，s）

与自然消退组比较，*P＜0.05；与普通饲料活血通脉颗粒低剂量组比较，☆P＜0.05；与普通饲料辛伐他汀比较，△P＞0.05；高脂饲料活血通脉颗粒中剂量组与普通饲料活血通脉颗粒中剂量组比较，▲P＜0.05。

组别 n自然消退组 7普通饲料辛伐他汀组 7普通饲料活血通脉颗粒低剂量组 7 TC TG HDL-C LDL-C 17.96±0.78☆1.55±0.07☆1.71±0.18☆12.83±0.81☆4.93±0.67*☆0.78±0.05*☆0.83±0.21*☆3.39±0.42*☆11.94±0.81*1.05±0.04*1.13±0.17*7.64±0.51*普通饲料活血通脉颗粒中剂量组 7 7.11±0.62*☆0.91±0.03*☆1.17±0.23*☆5.79±0.37*☆普通饲料活血通脉颗粒高剂量组 7 5.02±0.43*△☆0.77±0.07*△☆0.74±0.31*△☆3.57±0.15*△高脂饲料活血通脉颗粒中剂量组 7 13.37±0.58▲1.51±0.10▲1.48±0.22▲9.15±0.31▲高脂饲料辛伐他丁组 7 6.49±0.62 0.86±0.09 1.06±0.23 4.68±0.29

2.5 HE染色颈动脉切片 见图2。普通饲料活血通脉颗粒组、普通饲料辛伐他汀组比自然消退组细胞内膜增生程度明显减轻，内膜下仅有少量泡沫细胞。普通饲料活血通脉颗粒高剂量组、普通饲料辛伐他汀组细胞排列尚规则，内膜下有极少量泡沫细胞。

图2 颈动脉HE染色（×40）

3 讨 论

中医学素来无“颈动脉粥样硬化”诊断，但根据其临床表现及发病特点，往往被归属于“眩晕”“头痛”等范畴。赵淳教授（全国第三、四批师带徒指导老师、云南省荣誉名中医、云南省中西医结合急诊、急救医学及心脑血管病知名专家）认为饮食不节、过食肥甘是高脂血症、早期颈动脉粥样硬化的主要外因；脾虚失运，水谷精微不归正化，生成脂浊痰湿，注于血液是其发病的根本病机。颈动脉粥样硬化以肾元亏虚为中心，心肝脾功能失调为基础，以湿热、痰浊、淤血阻滞脉络为标实。根据赵淳教授治疗血瘀证理论经验［8］，运用赵淳教授经验方活血通脉方治疗颈动脉粥样硬化，取得了较好的临床疗效［9-10］。谢健等［11］认为活血通脉颗粒干预CAS进程。常红等［12］认为通过饮食和生活方式的干预，可以在在早期预防和辅助治疗动脉粥样硬化的方面有着西医不可比拟优势，其发展前景非常广阔。

中医药治疗CAS在改善症状、提高疗效积累了丰富的临床经验，疗效确切。活血通脉颗粒由红景天、虎杖、三七、水蛭、茯苓、隔山消等组成。现代药理和临床研究发现，红景天具有增强免疫功能、保护心脑血管及抗癌抗抑郁的等功效，沈伟等［13］研究证实红景天具有抑制动脉粥样硬化形成，减少斑块内血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达和血管新生的作用。虎杖通过调节血脂、抗炎、抑制血小板聚集、抗氧化，降低患冠心病的风险，降低总胆固醇和低密度脂蛋白，保护血管内皮，抑制内皮细胞和血管平滑肌增殖等方面发挥抗AS的作用［14］。三七有止血、抗血栓、促进造血、扩血管、降血压、抗心肌缺血、抗脑缺血、抗心律失常、抗动脉粥样硬化等作用。茯苓有利尿、提高免疫功能、有降脂作用。全方具有活血化瘀、益气通脉、解毒豁痰之效，其特点是通补兼施，标本兼顾，痰、瘀、毒、虚同治。

本研究通过高脂饲料干预新西兰白兔复制CAS模型，检测血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C。研究结果发现，造模成功后饲养高脂饲料血脂4项比饲养普通饲料明显增高。提示通过饮食和生活方式的改善，可调节血脂、稳定斑块作用。药物治疗组与自然消退组相比，血脂明显改善，说明与自然消退组比药物治疗组加快血脂改善。进而观察病理图片，说明活血通脉颗粒可调节血脂、减少斑块，保护血管内皮，抑制内皮细胞和平滑肌细胞增殖的作用，达到干预CAS的目的。普通饲料活血通脉颗粒高剂量组与普通饲料辛伐他汀组相比，数据均相似，说明与普通饲料辛伐他汀组相比普通饲料活血通脉颗粒高剂量组降脂效果无明显差异。谢健等［15］认为活血通脉颗粒具有延迟斑块形成、稳定斑块、治疗CAS的目的。故此，活血通脉颗粒具有辛伐他汀相似的预防颈动脉粥样硬化的作用。

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Experimental Study on the Intervention Effect of Huoxue Tongmai Granule on Carotid Arteriosclerosis in Rabbits

XIE Jian，SHEN Chao，TONG Xiaoyun，et al. The First Affiliated Hospital of Yunnan Institute of Traditional Chinese Medicine，Yunnan，Kunming 650000，China.

Objective：To discuss the intervention effect of Huoxue Tongmai granule on carotid arteriosclerosis（CAS）in rabbits and the curative effect of lipid regulation，stable plaques in science evaluation，thus providing theoretical basis for clinical medication.Methods：10 rabbits were randomly selected from 96 New Zealand white rabbits，clean level only，as the normal control group，the remaining 86 were fed with high fat forage.11 weeks later，56 model rabbits were randomly divided into model group，natural healing group and normal forage Huoxue Tongmai granule low，medium and high dose group，normal forage simvastatin group，high-fat diet Huoxue Tongmai granule medium dose group，high-fat feedstuff simvastatin group，totally 8 groups with 7 rabbits in each group.After each group was treated continuously for five weeks，blood was collected from ear marginal veins，TC，TG，HDL-C，LDL-C were detected with automatic biochemical analyzer.The rabbit carotid artery tissue was extracted for HE staining to observe its pathologic change.Results：The carotid artery endothelium was smooth without plaques and lipid in the normal group.In the model group，endothelial proliferation was obvious，plaque contained a large number of foam cells，atheromatous plaques were widely distributed.The endothelial proliferation condition was significant improved and plaque contained less number of foam cells in the normal forage Huoxue Tongmai granule group.The whole arterial wall level was relatively clear in the normal forage Huoxue Tongmai granule high dose group.Compared with normal group，TC，TG，HDL-C，LDL-C were significantly increased in the model group（P<0.01）.In five weeks after the treatment，Compared with the natural healing group，TC，TG，HDL-C，LDL-C were significantly decreased in the Huoxue Tongmai granule low，medium and high dose group and simvastatin group（P<0.05）.Compared with the Huoxue Tongmai granule low dose group，TC，TG，HDL-C，LDL-C were significantly decreased in the normal forage Huoxue Tongmai granule medium and high dose group and simvastatin group（P＜0.05）.There was no statistical difference between the normal forage Huoxue Tongmai granule high dose group and normal forage simvastatin group（P＞0.05）.Conclusion：Huoxue Tongmai granule can inhibit the carotid artery atherosclerosis formation.

Huoxue Tongmai granule；Carotid atherosclerosis；Blood lipid；Rabbit

R285.5

A

1004-745X（2016）12-2249-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.12.013

2016-04-06）

国家中医药管理局赵淳名医传承工作室研究项目；云南省自然基金资助项目（2011FZ264）