VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼生长、抗氧化、非特异性免疫及血清生化指标的影响

王晓艳王际英马晶晶刘 云李宝山孙永智王世信张利民

(1. 上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306; 2. 山东省海洋生态修复重点实验室, 山东省海洋资源与环境研究院, 烟台264006)

VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼生长、抗氧化、非特异性免疫及血清生化指标的影响

王晓艳1,2王际英2马晶晶2刘 云1,2李宝山2孙永智2王世信2张利民2

(1. 上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306; 2. 山东省海洋生态修复重点实验室, 山东省海洋资源与环境研究院, 烟台264006)

实验以大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼[(14.00±0.02) g]为研究对象, 采用2×4双因素设计, 设2个VE水平(0和75 mg/kg)和4个L-肌肽水平(0、50、100和200 mg/kg), 研究VE和L-肌肽对其生长、抗氧化、非特异性免疫及血清生化指标的影响。实验共分8组, 每组3个重复, 每个重复46尾鱼, 实验周期为8周。结果显示: (1)在饲料中添加75 mg/kg VE显著提高了大菱鲆幼鱼增重率(WGR)和特定生长率(SGR)(P＜0.05), L-肌肽添加量≤100 mg/kg对实验鱼生长性能无显著影响(P＞0.05), 添加量为200 mg/kg时鱼体WGR、SGR和蛋白质效率(PER)显著降低, 饲料系数(FCR)显著升高(P＜0.05); (2)VE和L-肌肽对血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量及肝脏总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和MDA含量均具有显著的交互作用(P＜0.05), 在VE 75 mg/kg水平下, L-肌肽添加量为50和100 mg/kg时血清GSH-PX活性最高, L-肌肽添加量为100和200 mg/kg时血清CAT活性最高且与添加量为50 mg/kg差异不显著(P＞0.05), 添加100 mg/kg 肝脏T-AOC和SOD活性达到最高且50 mg/kg组的SOD与100 mg/kg组差异不显著(P＞0.05), 主效应结果显示, VE显著提高了血清T-AOC、SOD及肝脏CAT活性(P＜0.05), L-肌肽显著提高了血清T-AOC(P＜0.05); (3)VE和L-肌肽对血清补体C3和LZM活性交互作用显著, 在75 mg/kg VE水平下, L-肌肽添加量为50 mg/kg时, 补体C3水平最高(P＜0.05), 主效应显示, VE和L-肌肽对血清总蛋白(TP)影响均不显著(P＞0.05); (4)添加VE显著降低了血清总胆固醇(TCHO)和甘油三酯(TG)含量(P＜0.05), 添加L-肌肽显著降低了血清TG含量, 且在L-肌肽50 mg/kg时达到最低。综合考虑大菱鲆幼鱼[(14.00—39.43) g]的生长性能、抗氧化性能、非特异性免疫及血清生化指标得出, 在实验配方条件下(鱼油70 g/kg, 大豆卵磷脂10 g/kg), 添加VE 75 mg/ kg时, L-肌肽的适宜添加量为50 mg/kg。

大菱鲆; L-肌肽; VE; 抗氧化性能; 非特异性免疫性能

L-肌肽(L-carnosine)是一种天然二肽, 由β-丙氨酸和L-组氨酸组成, 广泛存在于哺乳动物骨骼肌、大脑等代谢活跃的组织中, 能捕获活性氧和自由基,通过一系列催化反应抑制脂质过氧化和蛋白质氧化修饰[1—3], 具有螯合金属离子、缓冲生理pH和保护细胞膜的功能[4,5]。此外, L-肌肽还可调控糖酵解和氧化磷酸化, 是继超氧化物岐化酶和VE之后发现的又一天然非酶促自由基清除剂和抗氧化剂。VE是鱼类最重要的维生素之一, 与机体各项生理功能密切相关, 同时也是一种重要的免疫增强剂。研究发现, 在陆生动物中, VE能够保持L-肌肽的生物活性, 帮助机体更好地利用L-肌肽[6], L-肌肽也能促进VE再生[7], 但目前尚未见海水鱼类L-肌肽与VE联合使用效果的研究。

大菱鲆(Scophthalmus maximus)隶属鲽形目(Pleuronectiformes), 鲆科(Scophthalmidae), 菱鲆属(Psetta), 具有生长迅速、经济价值高且易于集约化养殖等优点, 是我国工厂化养殖的重要品种。随着大菱鲆养殖业的发展, 集约化程度不断提高, 鱼体发病率逐渐上升。通过营养学调控提高大菱鲆免疫力可减少药物使用, 对保障食品安全、保护养殖水环境具有重要意义。根据预实验, 以生长指标、超氧化物岐化酶和丙二醛为参考指标, 得出初始体重(13.51±0.06) g的大菱鲆幼鱼对VE的最适需求量是64.82—85.33 mg/kg。因此本实验以大菱鲆幼鱼为研究对象, 在添加和不添加VE条件下, 探讨L-肌肽对大菱鲆幼鱼生长性能、抗氧化性能、非特异性免疫性能及血清生化指标的影响, 明确二者是否具有协同效应, 并选出最优组合, 为VE和L-肌肽在大菱鲆配合饲料中的应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验设计与饲料制作

以白鱼粉为主要蛋白源, 鱼油为主要脂肪源配制基础饲料, 在基础饲料中分别添加L-肌肽(0、50、100和200 mg/kg; 纯度99%, 河南天兴食品添加剂有限公司)和VE (0和75 mg/kg; DL-α-生育酚醋酸酯, 河南金润食品添加剂有限公司), 配成8种等氮等能的实验饲料。L-肌肽、VE与维生素预混料(单独配制, 不含VE)及矿物质预混料初步混匀, 再与其他饲料原料逐级混匀, 加入新鲜鱼油和蒸馏水, 经螺旋挤压机加工成直径为3 mm左右的饲料颗粒, 60℃烘干并保存于干燥处备用。饲料配方及营养组成见表 1。

表 1 饲料配方及营养组成(干物质基础)Tab. 1 Composition and nutrient levels of the experimental diets (DM basis)

1.2 饲养管理

养殖实验在山东省海洋资源与环境研究院循环水养殖系统(高80 cm、直径70 cm、水深50 cm)内进行, 实验鱼购自蓬莱市宗哲养殖有限公司, 选用同一批次的大菱鲆幼鱼。驯养期间投喂对照组饲料(即VE0C0组饲料), 驯养周期为2周。正式实验开始前挑选出1104尾初始体重(14.00±0.02) g大小均匀、体质健壮的大菱鲆幼鱼, 随机分为8组, 每组3个重复, 每个重复46尾鱼。养殖实验进行56d, 每天定时定量(体重的2%左右)投喂两次(7:30和16:30)。投喂30min后排残饵, 数颗粒并计算残饵量。实验期间控制水温16—18℃, 溶氧＞6 mg/L, pH 7.6—8.2, 氨氮＜0.05 mg/L, 亚硝酸氮＜0.05 mg/L, 光照周期为自然光周期。

1.3 样品采集

养殖实验结束后, 禁食24h, 每桶鱼计数并称总重, 计算存活率和增重率。每桶取17尾鱼, 测量体长、体重, 计算肥满度, 随机取5尾用于全鱼体成分分析, 剩余12尾尾静脉取血后解剖取内脏, 所有操作均在冰盘内完成。血液于4℃静置4h后离心(4000 r/min, 10min)取上清液。所有样品经匀浆、混匀后保存于-80℃待测。

1.4 测定指标与方法

生长性能 增重率(Weight gain rate, WGR, %)= [末体重(g)-初体重(g)]/初体重(g)×100;

特定生长率(Specific growth rate, SGR, %/d)= [ln末体重(g)-ln初体重(g)]/时间(d)×100;

饲料系数(Feed conversion ratio, FCR)=摄食饲料总量(g)/[末体重(g)-初体重(g)];

蛋白质效率(Protein efficiency ratio, PER)=[末体重(g)-初体重(g)]/[摄食饲料总量(g)×蛋白含量(%)];

肝体比(Hepatosomatic index, HSI, %)=肝脏质量(g)/末体重(g)×100;

脏体比(Viscerosomatic index, VSI, %)=内脏质量(g)/末体重(g)×100;

肥满度(Condition factor, CF, g/cm3)=体重(g)/体长(cm)3×100;

存活率(Ssurvival rate, SR, %)=成活尾数/总尾数×100。

血清和肝脏指标分析 血清和肝脏中总抗氧化能力(Total antioxidant capacity, T-AOC)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)、过氧化氢酶(Catalase, CAT)、溶菌酶(Lysozyme, LZM)活性均采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定; 谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GSH-PX)和补体C3 (Complement C3)采用上海酶联生物技术有限公司试剂盒测定。血清总蛋白(Total protein, TP)、谷丙转氨酶(Alanine transaminase, ALT)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase, AST)活性及总胆固醇(Total cholesterol, T-CHO)、甘油三酯(Triacyglycerol, TG)含量均采用日立全自动生化分析仪(7020型, Hitachi)测定, 试剂购自北京利德曼生化股份有限公司。

1.5 数据统计分析

采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析(Oneway ANOVA), 差异显著时(P＜0.05)采用Duncan's检验进行多重比较分析[8]; 采用双因素方差分析(Two-way ANOVA), 交互作用显著时, 进行简单效应分析, 交互作用不显著时, 分析VE和L-肌肽的主效应, 结果均采用平均值±标准误(Means±SE)的形式表示。

2 结果

2.1 VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼生长性能、饲料利用及形体指标的影响

交互作用结果显示(表 2), VE和L-肌肽对实验鱼生长性能、饲料利用和形体指标均无交互作用(P＞0.05)。主效应分析显示, 在饲料中添加VE显著提高了大菱鲆幼鱼WGR和SGR (P＜0.05), L-肌肽的添加量为200 mg/kg时, WGR、SGR和PER均显著低于其他添加量, FCR显著高于其他各组(P＜0.05); VE和L-肌肽对SR、HSI、VSI和CF均无显著影响(P＞0.05)。

2.2 VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼血清和肝脏抗氧化能力的影响

交互作用结果显示(表 3), VE和L-肌肽对血清GSH-PX、CAT活性和MDA含量具有显著的交互作用(P＜0.05), 在VE 75 mg/kg水平下, L-肌肽添加量为50和100 mg/kg时, GSH-PX活性最高, L-肌肽添加量为100和200 mg/kg时CAT活性最高, 添加量为50 mg/kg与其差异不显著(P＞0.05), 肌肽添加量为50、100和200 mg/kg时MDA含量最低。由表3的主效应分析可知, 饲料中添加VE和L-肌肽均显著提高了大菱鲆幼鱼血清T-AOC (P＜0.05), VE显著提高了血清SOD活性(P＜0.05), 而L-肌肽对其影响不显著(P＞0.05)。

交互作用结果显示(表 4), VE和L-肌肽对肝脏T-AOC、SOD活性和MDA含量交互作用显著(P＜0.05),在75 mg/kg VE水平下, 添加100 mg/kg L-肌肽可使T-AOC活性显著高于其他各组(P＜0.05), SOD活性达到最高但与50 mg/kg组差异不显著(P＞0.05), L-肌肽50、100和200 mg/kg组的MDA含量显著低于其他各组(P＜0.05)。由主效应结果可知, 添加VE显著提高了CAT活性(P＜0.05), 而L-肌肽对其影响不显著(P＞0.05), VE和L-肌肽对GSH-PX活性影响均不显著(P＞0.05)。

表 2 饲料中添加VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼生长性能、饲料利用及形体指标的影响Tab. 2 Effects of dietary vitamin E and L-carnosine on growth performance,feed utilization and morphological parameters of juvenile turbot

2.3 VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼非特异性免疫性能的影响

结果显示(表 5), VE和L-肌肽对血清补体C3和LZM活性具有显著交互作用(P＜0.05), 在75 mg/kg VE水平下, L-肌肽添加量为50 mg/kg时, 血清补体C3水平最高。主效应结果表明, 饲料中添加VE和L-肌肽对血清TP含量影响均不显著(P＞0.05)。

2.4 VE和L-肌肽对大菱鲆血清生化指标的影响

结果显示(表 6), VE和L-肌肽对血清ALT和AST活性和T-CHO和TG含量均无显著交互作用(P＞0.05)。由主效应分析可知, VE和L-肌肽对血清ALT和AST活性影响均不显著(P＞0.05), 添加VE能显著降低血清T-CHO和TG含量(P＜0.05), 添加L-肌肽显著降低了血清TG含量(P＜0.05)。

3 讨论

3.1 VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼生长性能的影响

L-肌肽是一种天然二肽, 由β-丙氨酸和L-组氨酸组成, 具有较高的生物活性, 可作为缓冲剂、抗氧化剂, 能影响血液葡萄糖的代谢, 间接调节神经元的兴奋性, 被认为是一种能促进生长的营养物质[9]。研究表明, 在饲料中添加适量小肽可促进鱼类生长,增加消化道内有益菌群, 提高抗病力[10], 但长期过量添加, 会加重鱼体消化吸收负担, 导致其生长受阻[11], 而在本研究中, L-肌肽对大菱鲆幼鱼无明显促生长作用, 在添加量为200 mg/kg时却能显著抑制鱼体增重。高浓度L-肌肽对生长的抑制作用, 可能是因为其添加后能激发机体功能亢进, 进而抑制增重, Tomonaga等[12]发现中枢神经供给L-肌肽可抑制雏鸡的饲料摄入, 且该种抑制作用具有浓度依赖性, 抑制程度明显高于单独添加组氨酸。在本研究

中, 添加75 mg/kg VE后, 各L-肌肽添加组增重率差异不显著, 主要归因于VE对大菱鲆生长性能的显著提高作用, 这与花鲈(Lateolabrax japonicus)[13]、青鱼(Mylopharyngodon piceus)[14]、鲤(Cyprinus carpio)[15]的研究结果相一致。

表 3 VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼血清抗氧化能力的影响Tab. 3 Effects of dietary vitamin E and L-carnosine on serum antioxidant capacity of juvenile turbot

表 4 VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼肝脏抗氧化能力的影响Tab. 4 Effects of dietary vitamin E and L-carnosine on liver antioxidant capacity of juvenile turbot

表 5 VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼非特异性免疫性能的影响Tab. 5 Effects of dietary vitamin E and L-carnosine on non-specific immunity of juvenile turbot

表 6 VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼血清生化指标的影响Tab. 6 Effects of dietary vitamin E and L-carnosine on serum biochemical indices of juvenile turbot

3.2 VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼血清和肝脏抗氧化性能的影响

VE和L-肌肽均具有较强的抗氧化能力。L-肌肽的组氨酸含有咪唑环结构, 能快速提供和接受质子[3], VE含有酚氧基结构, 能够猝灭并能同单线态氧反应保护不饱和脂肪酸免受单线态氧损伤[16]。T-AOC、SOD、GSH-PX、CAT、MDA等可用作衡量机体抗氧化能力的重要指标[17]。本研究中VE和L-肌肽对血清GSH-PX、CAT的活性及肝脏的TAOC、SOD活性均有显著的交互作用, Boldyrev和Sererin[7]研究表明, 在肌浆网膜上单独添加L-肌肽对脂质过氧化的抑制效果只有10%—15%, 单独添加α-生育酚(2.5×10-8mol/L)没有抗氧化性, 而二者同时使用抑制率能达到50%, 当α-生育酚的浓度增加一倍后, 抑制率达到100%, 表明VE和L-肌肽具有协同抗氧化作用[18,19]。MDA是体内所有氧化反应的最终产物, 能反映机体氧化损伤的程度, 肌肽能与由MDA引起产生的羰基反应, 起到保护细胞的作用[20]。本实验中, 添加VE和L-肌肽均显著降低了血清和肝脏中MDA含量, 表明VE和L-肌肽均能有效抑制氧化产物的生成, 与魏玉婷[21]和牛化欣[22]等对大菱鲆的研究结果基本一致。本研究主效应结果表明, 添加VE显著增强了血清T-AOC、SOD及肝脏CAT活性, 添加L-肌肽显著提高了血清T-AOC, 表明VE和L-肌肽均能有效清除自由基, 从而提高大菱鲆的抗氧化能力。

3.3 VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼非特异性免疫性能的影响

补体是一种非常重要的非特异性体液免疫因子, 研究表明, 饲料中添加VE能提高大菱鲆补体C3的基因表达水平[23]。LZM是重要的免疫防御指标, 鱼类LZM水平是监测环境有害物质对鱼类先天性免疫影响的有效参数[24]。LZM主要来源于吞噬细胞, 能攻击革兰氏阴性菌细胞壁的β-1,4糖苷键结构, 水解致病菌的黏多糖, 对细菌、真菌、寄生虫均具有破坏作用[25], 研究报道, 饲料中添加VE显著增加了云纹石斑鱼(Epinehelus moara)幼鱼血清LZM活性[26], 显著提高了花鲈血清LZM和总补体活性[13]。在本研究中, VE和L-肌肽对血清补体C3和LZM活性具有显著的交互作用, 提高了大菱鲆幼鱼的机体免疫力。目前VE和L-肌肽影响非特异性免疫的机理尚不明确, 可能是因为二者能够阻止自由基对淋巴细胞的破坏, 保证淋巴细胞结构和功能的完整性, 从而保证其免疫活性; 另一方面可能是通过阻止花生四烯酸的氧化反应, 影响氧化磷酸化关键酶活性和改变淋巴细胞膜受体功能来抑制前列腺素的合成, 从而增强体液免疫; 还可能是因为VE和L-肌肽能增强细胞免疫, 增加嗜中性白细胞的数量[27]。血清总蛋白是血清各种蛋白质的复合物, 具有维持血管内正常胶体渗透压和酸碱度的功能, 并与机体的免疫功能有密切的关系, 血清总蛋白水平主要反应肝脏合成功能和肾脏病变造成蛋白质丢失的情况, 通过血清总蛋白检测可间接了解机体的营养状况。在本研究中, VE和L-肌肽对大菱鲆血清总蛋白影响均不显著, 说明VE和L-肌肽均能有效保证肝脏和肾脏的生理功能。

3.4 VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼血清生化指标的影响

ALT和AST主要存在于肝脏中, 当肝细胞受损时才被释放入血液, 因此血液中ALT和AST活性的高低可间接反应机体的肝功能状况。研究表明, L-肌肽能够通过抗氧化和抑制致炎细胞因子的产生,保护肝脏不受损伤[28]。在本实验中, 各组血清ALT和AST活性差异不显著, 表明VE或L-肌肽的添加对大菱鲆肝脏功能无损伤作用。T-CHO和TG是反应机体脂肪沉积状况的重要指标, 研究表明, VE能调节脂肪代谢, 预防脂肪在肝脏中的累积[29], 从而减少血清脂肪含量。在小鼠饮用水中添加L-肌肽能显著抑制脂肪酸合成酶活性, 最终降低血浆中T-CHO和TG含量[30]。本实验中, 添加VE能降低血清T-CHO和TG含量, 添加L-肌肽能显著降低TG含量, 对TCHO也具有降低作用但效果不显著, 这表明二者均具有加速脂肪代谢、降低血清脂肪含量的功能。

综合考虑大菱鲆幼鱼[(14.00—39.43) g]的生长性能、抗氧化性能、非特异性免疫及血清生化指标得出, 在本实验配方条件下(鱼油70 g/kg, 大豆卵磷脂10 g/kg), 添加VE 75 mg/kg时, L-肌肽的适宜添加量为50 mg/kg。

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EFFECTS OF DIETARY VITAMIN E AND L-CARNOSINE ON GROWTH PERFORMANCE, ANTIOXIDANT STATUS, NON-SPECIFIC IMMUNITY AND SERUM BIOCHEMICAL INDICES IN JUVENILE TURBOT (SCOPHTHALMUS MAXIMUS)

WANG Xiao-Yan1,2, WANG Ji-Ying2, MA Jing-Jing2, LIU Yun1,2, LI Bao-Shan2, SUN Yong-Zhi2, WANG Shi-Xin2and ZHANG Li-Min2
(1. College of Fisheries and Life, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China; 2. Shandong Key Laboratory of Marine Ecological Restoration, Shandong Marine Resource and Environment Research Institute, Yantai 264006, China)

A 2×4 factorial experiment (2 vitamin E×4 L-carnosine) was conducted to investigate the effects of dietary vitamin E (0 and 75 mg/kg) and L-carnosine (0, 50 mg/kg, 100 mg/kg and 200 mg/kg) on growth performance, antioxidant status, non-specific immunity and serum biochemical indices in juvenile turbot. Eight diets were formulated and randomly allocated into triplicate groups of fish [initial body weight of (14.00±0.02) g] in 24 cylindrical tanks (H: 80 cm× Φ70 cm, water depth 50 cm) with 46 fish per tank for an 8-weeks trial. Results showed that fish weight gain rate (WGR) and specific growth rate (SGR) were significantly enhanced by dietary vitamin E (P＜0.05) but not by L-carnosine less than 100 mg/kg. However, WGR, SGR and protein efficiency ratio (PER) were depressed whereas feed conversion ratio (FCR) was elevated significantly by 200 mg/kg L-carnosine (P＜0.05). Statistical interactions between vitamin E and L-carnosine were observed in serum glutathione peroxidase (GSH-PX), catalase (CAT) activities, malondialdehyde (MDA) content, liver total antioxidant capacity (T-AOC), superoxide dismutase (SOD), and MDA (P＜0.05). The highest GSH-PX activity was in the group of 50 mg/kg and 100 mg/kg L-carnosine, and the highest CAT activity was in the group of 100 mg/kg and 200 mg/kg L-carnosine and it showed no significant difference in group of 50 mg/kg (P＞0.05). Liver T-AOC and SOD activities reached the top by 100 mg/kg L-carnosine and it showed no significant difference by 50 mg/kg L-carnosine (P＞0.05) or the 75 mg/kg vitamin E. Main effects analysis show that serum T-AOC, SOD and liver CAT activities were significantly elevated by dietary vitamin E (P＜0.05), serum T-AOC was significantly elevated by dietary L-carnosine (P＜0.05). Statistical interactions between vitamin E and L-carnosine were observed in serum complement C3 and LZM activities (P＜0.05). Complement C3 reached the highest value in the group of 50 mg/kg L-carnosine and 75 mg/kg vitamin E (P＜0.05). Serum total protein (TP) was not significantly affected by dietary vitamin E and L-carnosine (P＞0.05). Serum total cholesterol (TCHO) and triacyglycerol (TG) contents were decreased by vitamin E addition (P＜0.05). Comparatively, TG was reduced by dietary L-carnosine with the lowest level by 50 mg/kg L-carnosine (P＜0.05). These results suggest that 75 mg/kg vitamin E and 50 mg/kg L-carnosine is the best diet formulation (fish oil 70 g/kg, Soy lecithin 10 g/kg).

Scophthalmus maximus; L-carnosine; Vitamin E; Antioxidant status; Non-specific immunity

S965.3

A

1000-3207(2017)01-0086-09

10.7541/2017.11

2015-12-20;

2016-07-22

国家海洋公益性行业科研专项(201205025); 国家海洋生物产业水生动物营养与饲料研发创新示范平台(201503002); 山东省科技发展计划(2014GHY115006)资助 [Supproted by Public Science and Technology Research Funds Projects of Ocean (201205025); the Marine Biological Industry of China: Aquatic Animal Nutrition and Feed Research and Innovation Demonstration Platform (201503002); the Science and Technology Development Plan Project of Shandong Province (2014GHY115006)]

王晓艳(1989—), 女, 山东青岛人; 硕士研究生; 主要从事水生动物营养与饲料研究。E-mail: 951647642@qq.com

王际英(1965—), 研究员, 硕士生导师；E-mail: ytwjy@126.com