白藜芦醇对高脂胁迫团头鲂抗氧化能力、非特异免疫机能和抗病力的影响

闫亚楠 夏斯蕾 田红艳 徐 超 贾二腾 刘文斌 张定东

(南京农业大学动物科技学院, 江苏省水产动物营养重点实验室, 南京 210095)

白藜芦醇对高脂胁迫团头鲂抗氧化能力、非特异免疫机能和抗病力的影响

闫亚楠 夏斯蕾 田红艳 徐 超 贾二腾 刘文斌 张定东

(南京农业大学动物科技学院, 江苏省水产动物营养重点实验室, 南京 210095)

为探讨白藜芦醇(RSV)对高脂胁迫团头鲂特定生长率、抗氧化能力、非特异免疫机能和抗病力的影响,试验设计5组饲料: 正常脂组(脂肪水平5%)、高脂组(脂肪水平11%)以及在高脂组中分别添加0.04%、0.36%、1.08% RSV。养殖试验持续10周, 在采样结束后, 进行嗜水气单胞菌攻毒试验, 记录攻毒后96h的成活率。结果表明: 团头鲂的特定生长率和日均采食量在添加1.08% RSV组出现最小值, 并显著低于其他各组, 且团头鲂的饲料效率表现出相似趋势。长期高脂饲喂可导致团头鲂血浆GSH含量显著下降, 血浆MDA和NO含量显著升高, 形成氧化应激。而长期氧化应激状态, 可使团头鲂血浆溶菌酶活性和补体C3含量显著降低, 肝脏中HSP70和HSP90应激调控基因表达上调, TNF-α炎症反应基因表达也上调。添加0.04% RSV组显著降低了血浆中SOD活性; 添加0.36%和1.08% RSV组显著降低血浆MDA和NO含量, 显著抑制了血浆SOD和CAT活性,且添加1.08% RSV组显著增加了鱼体血浆GSH含量。添加0.04%、0.36%和1.08%RSV组均显著提高了团头鲂血浆补体C3含量和溶菌酶活性, 显著下调了高脂胁迫团头鲂肝脏中HSP70、HSP90与TNF-α mRNA的表达量。嗜水气单胞菌攻毒后团头鲂的成活率显著受到RSV的影响, 并且在1.08% RSV添加组成活率最大。综上结果表明, 团头鲂摄食高脂日粮之后, 机体处于氧化应激状态, 导致鱼体非特异免疫力和抗病力低下。而添加适宜剂量的RSV能够改善机体这种氧化应激的状态, 提高鱼体的非特异免疫力和抗病力, 其中以1.08%的添加量最优。

白藜芦醇; 高脂胁迫; 抗氧化; 非特异性免疫; 团头鲂

白藜芦醇(Resveratrol, RSV), 是一种含有芪类结构的非黄酮类的多酚化合物, 分子式C14H12O3,结构为3,4,5-三羟基二苯乙烯(trans-3,4,5-Tri-hydroxystilbene), 广泛存在于花生、葡萄、桑葚等种子植物中[1]。近年来, 国内外的学者对其药理作用进行研究, 发现白藜芦醇具有抗氧化、抗菌消炎、抗白血病、降脂和提高机体免疫力等功能。大量动物体内和体外试验的研究都发现, RSV可以通过上调沉默信息调节因子1(Sirtuin1, SIRT1)的酶活性, 抑制SREBP下游基因的表达, 调节机体糖脂代谢, 并且RSV还能调节AMP依赖的蛋白激酶[Adenosine 5'-monophosphate (AMP)-activated protein kinase, AMPK]代谢调控因子的转录和表达, 进而调控动物体内的物质和能量代谢, 从而达到预防和治疗一些代谢性疾病的作用[2，3]。

脂肪肝是由遗传-环境-代谢应激相关因素导致的以肝细胞脂肪变性为主的一种代谢性疾病, 临床上有酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝(NAFLD)之分, 目前研究较多的是NAFLD, 其发生与胰岛素抵抗(IR)密切相关, 因此纠正代谢紊乱对该病的治疗有重要作用[4]。而随着高密度水产养殖的发展, 饲料中脂肪含量过高、过度投喂、蛋能比失调等营养素原因造成养殖鱼类营养性脂肪肝问题越来越突出。而肝脏作为鱼类重要的代谢器官, 其损伤或病变将导致机体代谢机能紊乱和抗病力降低, 极易造成继发传染性疾病的暴发和肝胆综合征的肆虐,严重威胁着集约化水产养殖业的持续健康发展[5]。

团头鲂(Megalobrama amblycephala), 俗称武昌鱼, 是我国养殖的主要经济鱼类之一, 生产中面临严峻的脂肪肝问题。Lu等[6]研究表明, 长期摄食高脂日粮能够诱导团头鲂产生肥胖和IR, 患上脂肪肝,可以为研究鱼类脂肪肝的发生、发展、预防和治疗机制提供较理想的动物模型。基于此, 本研究拟在团头鲂高脂日粮中添加RSV, 通过测定团头鲂抗氧化能力、非特异免疫机能和抗病力, 评估RSV作为添加剂, 应用于缓解高脂协迫以及预防和治疗鱼类脂肪肝的潜在作用, 以期为今后生产研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验设计和饲料配方

试验饲料配方见表 1, 设计两个对照组, 即正常脂组(Normal-fat diet, NFD; 脂肪水平5%)和高脂组(High-fat diet, HFD; 脂肪水平11%), 参考RSV在小鼠和大鼠上的研究[2,3], 本试验在高脂日粮中以0.04%、0.36%、1.08%的梯度添加白藜芦醇。白藜芦醇(HPLC纯度＞98%)购自湖北巨胜科技有限公司。根据饲料配方将各个原料粉碎、称重、充分混合均匀后, 加适量水, 使用小型饲料颗粒机制成粒径2 mm水稳性良好的沉性颗粒料, 于通风处晾干后置于-20℃冰箱保存备用。

1.2 养殖试验

养殖试验在南京农业大学浦口基地户外网箱进行, 试验塘规格: 100 m×50 m (长×宽), 水深平均1.7 m。试验幼鱼购自江苏广陵长江系家鱼原种场。驯化一周后, 选取规格整齐体格健壮的幼鱼[初重: (28±0.10) g]320尾, 随机分配到20个网箱(规格: 1.0 m×1.0 m×1.0 m)中, 每个网箱16尾, 投喂5组饲料, 每组设4个重复。户外养殖期间, 每天定时投饵3次(7:30, 12:00和16:30), 饱食投喂, 养殖期为10周。试验期间定期检测水质: 水温23—31℃, DO＞5.0 mg/L, pH 7.0—7.5。

表 1 试验饲料配方与营养水平Tab. 1 Formulation and proximate composition of the experimental diets

1.3 样品采集及分析

养殖试验结束后, 禁食24h以排空肠道内容物。使用MS-222(浓度100 mg/L; Sigma, 美国)麻醉,依次清点尾数并分箱称重, 计算其特定生长率。每网箱随机取4尾鱼在冰袋上进行尾静脉采血和肝脏样本采集。血液采集后放入抗凝管(肝素钠处理),于3000 g和4℃下离心10min, 吸取上清液标记分装后存入-80℃冰箱保存备用。肝脏采集后用4℃预冷的生理盐水冲洗干净, 然后用滤纸吸干, 放入1 mL冻存管中用液氮速冻后置-80℃冰箱保存备用。

1.4 饲料常规营养成分分析

水分测定使用烘箱105℃烘至恒重, 粗蛋白使用瑞士Foss公司生产的半自动凯氏定氮仪, 粗灰分采取马弗炉中550℃充分灼烧6h, 粗脂肪采用索氏抽提装置进行测定7h, 能量采用通用热弹能仪测定。

1.5 血浆免疫指标测定

血浆溶菌酶活性, 使用浊度比色法测定[7]; 血浆补体C3采用酶联免疫吸附法测定; 总蛋白采用双缩脲法测定; 血浆中白蛋白含量采用微量酶标仪法;血浆酸性磷酸酶(Acid phosphatase, ACP)含量采用磷酸苯二钠法测定。以上试剂盒均购自南京建成生物科技有限公司。

血浆超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)采用氮蓝四唑光化还原法测定, 过氧化氢化酶(Catalase, CAT)采用用H2O2还原法测定, 丙二醛(Malondialdehyde, MDA)采用硫代巴比妥比色法测定, 谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GSH)采用酶偶联连续监测法。以上试剂盒均购自南京建成生物科技有限公司。

1.6 嗜水气单胞菌攻毒试验

本试验使用的嗜水气单胞菌菌种(WJ2011BJ44)由中国水产科学研究院淡水渔业研究中心提供。在无菌条件下, 取-80℃保存菌种划线接种在琼脂固体平板培养基中, 恒温箱28℃培养20h后, 挑取单独菌落接种于5 mL肉汤液体培养基中, 28℃摇床恒温过夜培养(180 r/min)。使用肉汤液体培养基将菌液按10倍系列浓度稀释(1×106、1×107、1×108、1×109、1×1010CFU/mL), 通过在团头鲂腹部注射不同浓度梯度的嗜水气单胞菌攻毒预试验, 从而获得该菌的半致死浓度为1×107CFU/mL。

在采样结束后, 将室外网箱内每组剩余的实验鱼挪到室内循环系统内, 适应3d后, 每组鱼腹腔注射稀释好的菌液(1×107CFU/mL), 注射剂量为每100 g鱼注射1 mL。注射结束后, 观察统计实验鱼攻毒后6h、12h、24h、48h、72h、96h时的存活尾数。

1.7 肝脏热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白90(HSP90)及肿瘤坏死因子α (TNF-α)基因表达的测定

肝脏总RNA提取: 取大约50—100 mg的团头鲂肝脏样品, 放入含有1 mL RNA-iso Plus (Takara公司)的离心管中, 之后按照RNA-iso Plus试剂盒中说明书操作, 提取总RNA。最终获得的样品总RNA其OD260/OD280在1.8—2.0。

反转录: 按照Takara Prime Script®RT reageat Kit反转录试剂盒说明书进行操作, 所得cDNA保存于-20℃冰箱备用。

定量PCR: (1) 引物设计: 根据GenBank数据库中的序列, 使用Primer Premier 5.0软件设计内参基因β-actin[8,9]、热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白90(HSP90)、肿瘤坏死因子α (TNF-α), 引物序列参见表 2, 引物由上海Invitrogen公司合成。 (2)实时荧光定量PCR反应: 根据SYBR®Premix Ex Taq TM II (TaKaRa公司)试剂盒说明书进行加样上机, 结果采用2-∆∆Ct方法分析。

1.8 数据统计分析

数据用SPSS 20.0进行统计分析, 两个对照组采用独立样本T检验法分析, 高脂组和RSV添加组则采用单因素方差(One-Way ANOVA)中Duncan's多重比较法分析, 结果用平均数±标准误来表示。使用Graph Pad Prism 5和Microsoft Excel 2010软件进行图形绘制。

表 2 定量PCR引物序列Tab. 2 The primers used in quantitative real-time PCR

2 结果

2.1 RSV对投喂高脂日粮团头鲂特定生长率(SGR)的影响

如图 1所示, NFD和HFD两组的饲养期间成活率、SGR、日均采食量和饲料效率(FCR)均无显著差异; 高脂组和高脂添加RSV组饲养期间成活率无显著差异, 而1.08%RSV组的SGR和日均采食量均显著低于其他各组, 且该组团头鲂的饲料效率也低于其他各组。

2.2 RSV对投喂高脂日粮团头鲂血浆抗氧化指标的影响

由图 2可以得出, 与正常脂日粮相比, 投喂高脂日粮之后团头鲂血浆SOD、CAT、MDA和NO显著提高, 而血浆GSH显著降低。添加0.36% RSV和1.08% RSV之后, 血浆CAT、MDA和NO与高脂组相比显著降低; 而血浆GSH仅在RSV1.08%添加水平显著升高, 在0.04% RSV和0.36%RSV添加水平,血浆GSH虽然有所升高, 但无显著差异; 添加0.04%—1.08%水平的RSV, 与高脂组相比, 可显著降低血浆SOD。

2.3 RSV对投喂高脂日粮团头鲂血浆免疫指标的影响

从图 3可以得出, 与正常脂日粮相比, 投喂高脂日粮之后, 团头鲂血浆白蛋白有所降低, 但无显著差异, 但血浆补体C3、总蛋白、球蛋白、溶菌酶以及ACP都显著降低。在添加RSV之后, 与高脂组相比, 不同添加量的RSV均显著提高了血浆补体C3和溶菌酶含量; 血浆总蛋白、白蛋白、球蛋白以及ACP仅在HFD+0.04% RSV组显著升高, 而其他各组相比高脂组均无显著差异。

2.4 RSV对投喂高脂日粮团头鲂肝脏HSP70、HSP90及TNF-α mRNA表达量的影响

图 1 RSV对投喂高脂日粮团头鲂饲养期间成活率、SGR、日均采食量和饲料效率(FCR)的影响Fig. 1 Effects of RSV supplementation on survival rate, SGR, average daily feed intake and feed efficiency rate of blunt snout bream fed high-fat diets高脂组和高脂添加RSV组中,a,b,c字母不同表示差异显著(P＜0.05); 正常脂与高脂组采用T-检验, *P＜0.05, **P＜0.01, ***P＜0.001,nsP＞0.05; 下同; 饲养成活率=100×(实验末鱼数量/实验初鱼数量), 特定生长率=100×ln(W末重/W初重)/t (养殖天数), 日均采食量=总采食量/饲养天数(d), 饲料效率=增重(g)/摄食量(g)Among HFD and HFD+RSV groups, mean values with different letters were significantly different (P＜0.05); student's T-test analysis were used to explore the difference between NFD and HFD: *P＜0.05, **P＜0.01, ***P＜0.001,nsP＞0.05; the same applies below. Feeding survival rate=100×(the number of survival fish after feeding/ the number of fish before feeding), Specific growth rate, SGR=100×ln(Wfinalweight/Winitialweight)/t, Average daily feed intake=total feed intake/t (d), Feed efficiency rate=weight (g)/food intake (g)

由图 4可以得出, 团头鲂肝脏HSP70、HSP90与TNF-α mRNA的表达量显著受饲料中脂肪水平和RSV添加的影响。与正常脂日粮相比, 投喂高脂日粮之后团头鲂肝脏HSP70、HSP90与TNF-α mRNA的表达量显著升高。在添加RSV之后, 与高脂组相比, 团头鲂肝脏HSP70、HSP90与TNF-α mRNA的表达量显著下降。

图 2 RSV对投喂高脂日粮团头鲂血浆抗氧化指标的影响Fig. 2 Effects of RSV supplementation on plasma antioxidant capacity of blunt snout bream fed high-fat diets

图 3 RSV对投喂高脂日粮团头鲂血浆免疫指标的影响Fig. 3 Effects of RSV supplementation on innate immunity of blunt snout bream fed high-fat diets

2.5 攻毒试验累计死亡率

图 5为团头鲂攻毒后96h成活率, 试验结果表明: 饲料中脂肪水平可影响团头鲂的成活率, 正常脂组48h和72h成活率显著高于高脂组, 96h时则无显著差异; 团头鲂攻毒后的成活率又受RSV影响, RSV显著提高了团头鲂48h和72h的成活率, 并且96h时1.08% RSV添加组的成活率最高, 显著高于高脂组。

图 4 团头鲂肝脏HSP70、HSP90与TNF-α mRNA相对表达量Fig. 4 Relative mRNA expression analysis of HSP70, HSP90 and TNF-α in the liver of blunt snout bream fed high-fat diets

图 5 嗜水气单胞菌攻毒后96h的存活率(%)Fig. 5 Survival rates (%) of blunt snout bream after 96h of Aeromonas hydrophila challenge成活率(%)=(攻毒试验结束存活鱼数/攻毒试验开始鱼总数)× 100%Survival rate (%)=(the number of survival fish after infection/the number of fish before infection)×100%

3 讨论

3.1 RSV对投喂高脂日粮团头鲂生长性能的影响

SGR是指生长率与生长天数的比值, 是衡量生长状况的一个常用指标, 和增重率趋势相同, 但又比增重率更加形象具体的反映动物的生长状况, SGR越小, 代表每天的体重增长越慢[10]。 本试验中, 1.08% RSV添加组的SGR显著低于其他各组, 表明1.08%剂量的RSV能够调控高脂胁迫下的团头鲂的体重, 这可能与RSV的降脂和摄食神经调节[11]作用有关。 许多研究表明, RSV能够减少脂肪在一些组织和器官中过度沉积, 而其对动物体体重的调节受到RSV的剂量、试验的动物种类和膳食结构等多种因素的影响[12,13]。本实验室前期研究也证实了添加较高剂量的RSV可导致团头鲂体增重明显下降, 其原因可能是: 一方面随着RSV剂量的升高,肝脏脂肪和腹部脂肪含量呈下降趋势, 且肝脏脂肪含量在RSV添加量为1.08%时显著低于高脂组; 另一方面鱼体内过多的RSV通过某种机制影响团头鲂采食, 减少饵料摄入。在本试验中添加1.08%的RSV显著影响团头鲂的日均采食量, 并且该组的饲料效率也显著降低, 这可能与RSV对物质和能量代谢的调控作用有关[3]。上述因素导致了本试验中1.08% RSV添加组团头鲂的SGR显著低于其他各组。RSV能够调节动物体的糖脂代谢, 调控相关基因的转录和表达[13,14], 并能影响采食量。在啮齿动物上也有类似的研究结果, 并认为RSV能够通过血脑屏障, 减少动物体的食物摄入[11,15]。因此, 在团头鲂高脂日粮中添加RSV既能缓解高脂胁迫又不影响生长性能的最低有效剂量, 仍需要我们进一步的研究。

3.2 RSV对投喂高脂日粮团头鲂抗氧化能力的影响

动物机体在新陈代谢过程中, 活性氧自由基的产生和消除保持着动态平衡[16]。而长期投喂高脂日粮会造成鱼类的组织及细胞的线粒体膜超微结构发生改变, 导致线粒体膜通透性增大, 致使大量活性氧自由基(ROS)扩散到细胞的各个角落, 引起机体脂类、蛋白质、酶和DNA的氧化, 形成机体损伤[17]。而SOD可以催化活性氧(O2-)转化为H2O2与O2, H2O2又可通过CAT和谷胱甘肽还原酶转化为H2O, 从而保持了机体的氧化平衡, 减少了自由基对机体的伤害。MDA作为脂质过氧化的最终产物,具有细胞毒性, 会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合, 从而可以作为机体脂质过氧化的标志。在本研究中, 高脂组血浆SOD和CAT活性均显著高于正常脂组, 可是其血浆中MDA的含量很高,血浆GSH含量却很低, 说明高脂组鱼体ROS的产生量远远大于机体自身的清除能力。而在添加RSV之后, 各组血浆两种抗氧化酶的活性都有所降低,血浆MDA的含量显著降低, 血浆GSH含量显著升高, 说明鱼体ROS的产生量未超出机体清除能力。在段胜红[18]有关RSV对大鼠非酒精性脂肪肝的保护作用的研究发现RSV显著降低模型组大鼠肝组织MDA含量, 同时在高妍等[19]有关乌克兰鳞鲤的研究中发现当饲料中添加80—160 mg/kg RSV时,乌克兰鳞鲤血浆MDA含量显著降低。以上研究与本试验结果一致, 说明RSV能够提高动物机体的抗氧化能力, 抑制脂质过氧化反应。有研究表明, NO与氧化性肝损伤相关, 大量的NO则反而引起肝细胞损伤, 而适量的NO则对心血管起保护作用[20]。在本试验中, 高脂组血浆NO含量显著高于正常脂组, 而添加RSV之后血浆NO含量显著降低, 该现象也表明RSV可减缓高脂胁迫诱导的肝脏损伤。在大鼠的研究中也得到相似的结果[21], 说明RSV可能通过降低iNOS活性及升高cNOS活性从而纠正了机体NO代谢的紊乱。TNF-α不仅是NAFLD的一个易感因子, 而且也是介导肝损伤的主要细胞因子之一,同时TNF-α及其诱导产生的一些细胞因子, 又可引起游离脂肪酸的增多, 从而进一步促进NAFLD的发展[22,23]。在本试验中, 高脂组肝脏中TNF-α mRNA表达量显著高于正常脂组, 表明高脂日粮可诱导团头鲂肝脏炎症反应, 而添加RSV之后, 各试验组中肝脏中TNF-α mRNA表达量均显著低于高脂组, 说明RSV能够减轻肝脏炎症损伤。小鼠上也得到了类似的结果[24], 研究表明RSV在一定程度上能够上调小鼠组织或细胞中SIRT1的表达, 进而调控炎症因子及相关信号传导通路, 从而抑制炎症反应[25,26]。

3.3 RSV对投喂高脂日粮团头鲂免疫功能的影响

HSP70和HSP90均参与应激条件下的免疫应答反应, 其表达量在环境和生理的变化下都会随之改变[27—28], 因此, HSP70和HSP90均是应激反应的重要指标。TNF-α也参与动物体内的免疫反应, 在许多病理状态下产生增多, 调节机体免疫功能。高脂组团头鲂肝脏中HSP70、HSP90 和TNF-α mRNA表达量均显著高于正常脂组, 表明试验团头鲂已处于应激状态中。而应激和免疫的关系密切相关, 长期的氧化应激或其他类型的应激反应都可能会损害机体的免疫器官, 降低机体的免疫功能[29,30]。ACP是鱼类体内巨噬细胞溶酶体的标志性酶[31]。溶菌酶是鱼类防护病原体入侵的重要非特异性免疫因子, 通过水解致病菌的黏多糖, 来达到抵抗外界细菌入侵的目的[32]。补体C3是血清中含量最高的补体成分, 参与机体抗微生物防御反应以及免疫调节,其水平是衡量动物机体体液免疫的重要标志[33]。血浆蛋白作为血浆的重要组成部分, 反映机体的健康状况, 血浆蛋白的升高也与免疫力的增强有关,而在所有的蛋白组成中球蛋白是重要的组成成分,在免疫系统中发挥重要作用[34]。本试验结果显示高脂组团头鲂血浆ACP和溶菌酶活性以及补体C3、总蛋白和球蛋白含量均显著低于正常脂组, 表明高脂组鱼体受到氧化应激, 导致其非特异性免疫力下降, 并伴有肝脏损伤[29]。然而, RSV添加组团头鲂血浆补体C3含量和溶菌酶活性均显著高于高脂组,表明RSV增强了高脂胁迫团头鲂的免疫功能。同时, 添加RSV之后团头鲂血浆总蛋白、白蛋白、球蛋白含量及ACP活性均高于高脂组, 这再次说明RSV可提高团头鲂的免疫力。类似的结果也发表在其他动物上。在酒剂中添加RSV经口灌胃, 能显著增强小鼠细胞免疫、体液免疫和单核-巨噬细胞功能[35]; 在饲料中添加120 mg/kg的RSV可提高血鹦鹉溶菌酶活力[36]; 在日粮中添加0.1%至0.2% RSV有利于提高肉仔鸡的免疫功能[37]。

3.4 RSV对投喂高脂日粮团头鲂抗病能力的影响

本试验结果显示, 添加适宜水平的RSV提高了团头鲂嗜水气单胞菌感染之后的成活率, 成活率最高值出现在1.08%RSV组, 在日粮中添加0.04%和0.36%的RSV也提高了高脂胁迫下团头鲂的成活率。这与本试验抗氧化和非特异免疫指标结果基本一致, 说明RSV通过提高高脂胁迫团头鲂鱼体的抗氧化能力和免疫力, 提高了抗病力。RSV能通过阻碍生物膜的形成来降低细菌的耐药性、阻碍细菌的毒性因子发挥作用, 并能抑制创伤弧菌的黏附及RTX毒素的产生, 来达到保护宿主细胞免受细菌感染引起的毒害和感染的目的[38—42], 推测RSV本身对嗜水气单胞菌生长有抑制作用, 减弱该菌毒性。有文献报道, RSV能通过Fiaf (快速诱导脂类因子)信号通路调节肠道菌群的组分, 改善小鼠高脂膳食引起的肠道菌群生态失调[38,43]。而肠道菌群调控下的肠黏膜系统调控动物的免疫与健康, 肠道是机体最大的免疫器官[44]。因此, 我们推测RSV通过调节团头鲂肠道菌群, 增强团头鲂肠道免疫力, 从而提高团头鲂的抗病力, 该机理有待我们后续研究进一步证明。

4 结论

综上所述, 在高脂胁迫团头鲂的日粮中添加1.08%的RSV时能够调控团头鲂的体重和日均摄食量, 能够显著提高团头鲂的抗氧化能力, 并且能够提高团头鲂的非特异性免疫功能和抗病力。因此,在本试验中团头鲂高脂日粮中RSV的适宜添加水平是1.08%。

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EFFECTS OF RESVERATROL SUPPLEMENTATION ON GROWTH PERFORMANCE, IMMUNITY, ANTIOXIDANT CAPABILITY AND DISEASE RESISTANCE OF BLUNT SNOUT BREAM FED HIGH-FAT DIET

YAN Ya-Nan, XIA Si-Lei, TIAN Hong-Yan, XU Chao, JIA Er-Teng, LIU Wen-Bin and ZHANG Ding-Dong
(Jiangsu Key Laboratory of Aquatic Animal Nutrition, College of Animal Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)

This study was conducted to investigate the effects of Resveratrol (RSV) supplementation on specific growth rate (SGR), nonspecific immunity function, antioxidant capability and disease resistance of blunt snout bream fed highfat diet. This experiment was designed with five kinds of diets: a normal fat diet (NFD, 5% fat), a HFD (11% fat), and a HFD supplemented with 0.04%, 0.36%, and 1.08% RSV, respectively. At the end of 10-week feeding trial, fish were challenged by Aeromonas hydrophila at the concentration of 1×107CFU/mL, and the survival rate was recorded for the next 96h. The results showed that HFD supplemented with 1.08% RSV significantly reduced the SGR and average daily feed intake of blunt snout bream when compared to the other groups, the similar trend found in feed efficiency rate of blunt snout bream. In comparison with NFD, HFD significantly increased the levels of plasma MDA and NO, and decreased the level of plasma GSH in blunt snout bream. QRT-PCR results demonstrated that long-term HFD consumption induced the up-regulation of TNF-α, HSP70 and HSP90, which means HFD potently weaken antioxidant defenses in blunt snout bream. HFD supplemented with RSV at 0.04% significantly suppressed the activities of the plasma SOD. And yet, it not only significantly reduced the contents of plasma MDA and NO, but also significantly inhibited the activities of plasma SOD and CAT when HFD supplemented with 0.36% and 1.08% RSV. Besides, the plasma GSH content increased significantly when the fish fed HFD supplemented with 1.08% RSV. HFD supplemented with RSV at 0.04%, 0.36% and 1.08% all significantly increased plasma complement 3 content, enhanced lysozyme activities, and down-regulated the mRNA expressions of hepatic HSP70, HSP90 and TNF-α in blunt snout bream. After A. hydrophila challenge, the significant highest survival rate was observed in fish fed 1.08% RSV supplemented diet. In summary, when blunt snout bream was fed with high-fat diet for long time, the body was in a state of oxidative stress. And, the appropriate dose of RSV added could ameliorate the state of oxidative stress in the body, then the optimal dose of resveratrol was 1.08%.

Resveratrol; High-fat diet; Antioxidant ability; Non-specific immunity; Blunt snout bream

S965.1

A

1000-3207(2017)01-0155-10

10.7541/2017.20

2016-08-15;

2016-11-04

国家大宗淡水鱼产业技术体系资金(CARS-49-20)资助 [Supported by the National Technology System for Conventional Freshwater Fish Industries (CARS-46-20)]

闫亚楠(1990—), 女, 河南商丘人; 硕士研究生; 主要研究方向为水产动物营养与饲料。E-mail: 2014105073@njau.edu.cn

张定东(1975—), 男, 博士, 副教授; 主要从事水产动物生理与营养、水产养殖生态的研究。E-mail: zdd_7597@njau.edu.cn