c⁃FLIPL在白血病中的表达及临床意义

迟昨非，何秋颖，杨威，傅煜，符爽，庄倩

（中国医科大学附属盛京医院1.小儿血液内科；2.第二血液内科；3.血液研究室，沈阳 110022）

c⁃FLIPL在白血病中的表达及临床意义

迟昨非1，何秋颖1，杨威2，傅煜3，符爽3，庄倩1

（中国医科大学附属盛京医院1.小儿血液内科；2.第二血液内科；3.血液研究室，沈阳 110022）

目的 探讨c⁃FLIPL在不同类型白血病中的表达水平及其临床意义。方法 应用实时PCR检测103例不同类型白血病患者骨髓单个核细胞c⁃FLIPLmRNA表达，包括急性淋巴细胞白血病（ALL）54例（其中初诊37例、复发5例、完全缓解12例）、急性髓细胞白血病（AML）38例（其中初诊24例、复发6例、完全缓解8例）、初诊急性未分化白血病（AUL）2例、初诊慢性粒细胞白血病（CML）6例、初诊慢性粒单核细胞白血病（CMML）3例。应用流式细胞术对所选病例进行免疫表型检测。结果 在初诊和复发的白血病中c⁃FLIPLmRNA呈异常高表达趋势，二者间差异无统计学意义（P＞0.05）。初诊AUL及初诊CML的c⁃FLIPLmRNA表达高于其他初诊组，但差异无统计学意义（P＞0.05）。初诊ALL、AML、AUL、CML、CMML与对照组、完全缓解组比较，c⁃FLIPLmRNA的差异均有统计学意义（P＜0.05）。c⁃FLIPLmRNA表达与患者危险度分级、初诊白细胞数、血乳酸脱氢酶（LDH）、血羟丁酸脱氢酶（HBDH）、CD45、融合基因TEL⁃AML1相关，与患者年龄、性别、血纤维蛋白原及染色体异常无关。结论 白血病患者c⁃FLIPLmRNA表达异常增高，并与危险度分级、初诊白细胞数、血LDH、血HBDH及预后密切相关。

c⁃FLIPL；白血病；实时PCR

白血病是一种造血干细胞恶性克隆性疾病，增殖异常、凋亡受阻、分化障碍导致患者体内白血病细胞大量增生浸润，临床表现为感染、贫血、出血、肝脾淋巴结肿大及骨骼疼痛等。细胞凋亡障碍、增殖异常是白血病发病及复发的重要机制。细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cellular Fas⁃associated death domain⁃like interleukin⁃1β converting enzyme inhibitory protein，c⁃FLIP）是一种重要的凋亡抑制蛋白，亦称CASH、CASP8AP1、CLARP、Casper、FLAME、FLAME⁃1、FLAME1、FLIP、I⁃FLICE、MRIT，在结直肠癌［1］、恶性黑色素瘤［2］、肝癌［3］、卵巢癌［4］、恶性淋巴瘤［5］及慢性淋巴细胞白血病［6］等肿瘤性疾病中高表达。c⁃FLIP的编码基因定位于人染色体2q33，表达3种蛋白产物，分别为55 000的c⁃FLIPL（长型）、26000的c⁃FLIPS（短型）及24000的c⁃FLIPR（短型）。c⁃FLIPL被证实是影响细胞凋亡敏感性的重要因素［7］，对凋亡具有明显的抑制作用，且近期研究发现c⁃FLIPL在白血病中高表达［8］。本研究通过实时PCR方法检测不同类型白血病初诊及复发患者骨髓单个核细胞c⁃FLIPLmRNA表达情况，并分析c⁃FLIPL与白血病类型、危险度分级、分子生物学改变、染色体异常以及治疗效果的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集2014年10月至2015年12月我院血液病治疗中心门诊及病房收治的103例不同类型和治疗阶段白血病患者骨髓单个核细胞样本，其中男59例，女44例，年龄1个月～83岁（平均23岁）。患者均接受MICC分型，急性淋巴细胞白血病（acute lym⁃phoblastic leukemia，ALL）54例（初诊37例、复发5例、完全缓解12例），其中FAB分型为L1型2例、L2型39例、L3型13例，免疫分型为B系表达36例、T系表达18例。急性髓细胞白血病（acute myelocytic leukemia，AML）38例（初诊24例、复发6例、完全缓解8例），初诊AML的FAB分型为M1型2例、M2型5例、M3型6例、M4型1例、M5型10例。2例急性未分化白血病（acute undifferentiated leukemia，AUL）、6例慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leuke⁃mia，CML）、3例慢性粒单核细胞白血病（chronic my⁃elomonocytic leukaemia，CMML）均为初诊。正常对照组15例，均为同期间白细胞数异常、单纯贫血、淋巴结肿大或骨痛的门诊患者，骨髓检查未见异常。白血病的诊断及完全缓解标准参照《血液病诊断及疗效标准》［9］。所有初诊患者均常规进行融合基因及染色体检测。

1.2 试剂与仪器

淋巴细胞分离液购于美国TBD公司，红细胞裂解液购于北京Solarbio公司，PBS购于美国HyClone公司，Trizol购于美国Invitrogen公司，引物由大连宝生物工程公司合成，反转录试剂盒、实时PCR试剂盒购于日本TaKaRa公司，三氯甲烷、异丙醇、乙醇、琼脂糖、EB为实验室常备试剂。PCR仪（GeneAmp PCR System 9700）、实时PCR仪（7500）购自美国Ap⁃plied Biosystems公司，流式细胞仪（FACSCalibur）购自美国BD公司。

1.3 骨髓标本采集和单个核细胞分离

所有患者取髂后上棘或胸骨抗凝骨髓2～4 mL，加1～2 mL PBS稀释后缓慢加入等量淋巴细胞分离液中，吸出中间单个核细胞层，PBS洗涤2次，光学显微镜下调整细胞浓度至3×106/mL，加1 mL Trizol吹打混匀后冻存于-80℃冰箱备用。

1.4 总RNA提取

将样本于室温解冻，敲打混匀，Trizol试剂常规方法提取总RNA，加DEPC水30～80 μL。

1.5 合成cDNA

反应液配制在冰上进行，按照反转录试剂盒说明书两步法进行，37℃15 min，85℃5 s，4℃终止反应。

1.6 实时PCR

反应液配制在冰上进行，每个样本设3个复孔，20 μL反应体系中含SYBR Premix Ex TaqⅡ（2×）10 μL、PCR Forward Primer（10 μmol/L）0.8 μL、PCR Reverse Primer（10 μmol/L）0.8 μL、ROX Refer⁃ence Dye or DyeⅡ（50×）0.4 μL、cDNA溶液6 μL、dH2O 6 μL。c⁃FLIPL上游序列：5’⁃GCGAAGCCACC TGTTGATG⁃3’，下游序列：5’⁃CTGCTCCGCAAAAC CAGAA⁃3’，片段长度为86 bp。β⁃actin上游序列：5’⁃TGGCACCCAGCACAATGAA⁃3’，下游序列：5’⁃CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA⁃3’，片段长度为186 bp。扩增条件：95℃预变性30 s，95℃5 s、60℃34 s，共40个循环。

1.7 PCR产物的定量校正和判定分析

β⁃actin作为内参，各样本c⁃FLIPL的Ct值与同一样本的β⁃actin的Ct值相减，即为该样本的c⁃FLIPL△Ct值，按目的基因相对表达量=2-△△Ct公式计算。

1.8 统计学分析

2 结果

2.1 Ct值的判读

Ct值越低，实际拷贝数越高。结果显示，所有样本的c⁃FLIPLcDNA呈指数增长，达到平台期，扩增曲线为一组典型的倒S型曲线（图1），扩增效率高。

图1 c⁃FLIPL扩增曲线Fig.1 Amplification ofc⁃FLIPL

2.2 产物特异性

由于不同序列和长度的实时PCR产物在不同的温度下熔解，因此可观察到不同峰值。结果显示，熔解温度均一，产物熔解曲线峰型单一（图2），说明产物特异性好。

图2 c⁃FLIPL实时PCR产物熔解曲线Fig.2 The melting curve ofc⁃FLIPLby real⁃time PCR

2.3c⁃FLIPLmRNA在不同类型白血病中的定量分析结果

白血病患者c⁃FLIPLmRNA的表达异常增高，初诊ALL（2.19±0.24，n=37）、复发ALL（3.40±0.40，n=5）、初诊AML（2.68±0.93，n=24）、复发AML（2.71±0.38，n=6）、初诊AUL（3.82±0.20，n=2）、初诊CML（3.50±0.55，n=6）、初诊CMML（2.81±0.26，n=3）分别与对照组（0.02±0.01，n=15）及完全缓解（complete remission，CR）组（0.05±0.02，n=20）比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），初诊AUL及初诊CML的c⁃FLIPLmRNA表达均高于其他初诊组，但差异无统计学意义（P＞0.05），初诊ALL与初诊AML比较差异无统计学意义（P=0.100），CR组与对照组比较差异无统计学意义（P=0.126）。初诊T⁃ALL（3.06±0.37，n=11）的c⁃FLIPLmRNA表达量明显高于初诊B⁃ALL（1.82±0.39，n=26），差异有统计学意义（P=0.004）。初诊AML的FAB亚型表达比较，M1型（3.28±0.22，n=2）、M2型（2.36±0.90，n=5）、M3型（2.56±0.10，n=6）、M4型（2.83±0，n=1）、M5型（2.78±0.79，n=10）中M1型的表达量最高，但各亚型之间差异无统计学意义（P＞0.05）。所有初诊白血病（2.53±0.22，n=72）与所有复发白血病（3.02± 0.36，n=11）比较，c⁃FLIPLmRNA表达量差异无统计学意义（P=0.224）。

2.4c⁃FLIPLmRNA与初诊白血病患者临床特征的关系

结果显示，不同年龄、性别、血纤维蛋白原值、染色体异常的c⁃FLIPLmRNA表达量比较差异无统计学意义（P＞0.05）。c⁃FLIPLmRNA的表达与患者危险度分级、初诊时白细胞数、血乳酸脱氢酶（lac⁃tate dehydrogenase，LDH）、血羟丁酸脱氢酶（hydroxy⁃butyrate dehydrogenase，HBDH）、CD45、融合基因TEL⁃AML1密切相关。61例初诊ALL及AML患者出现CR，部分缓解（partial remission，PR）和未缓解（non⁃remission，NR）共2例，2例半年内死亡患者c⁃FLIPLmRNA的表达量明显增高，分别为4.20和2.36。见表2。

3 讨论

c⁃FLIP是在病毒、真核生物及哺乳动物等物种中广泛存在的一种凋亡抑制蛋白，由IRMLER等［10］于1997年首次在恶性黑色素瘤内发现，并可以从激活的人外周血白细胞中克隆出来，与pro⁃caspase⁃8结构相似，在N端存在2个死亡效应结构域，从C端延伸包含1个caspase样的结构域。能与带有死亡结构域的Fas相关蛋白结合，亦能与caspase⁃8竞争结合到死亡诱导信号复合物，从而导致caspase⁃8不能被充分活化，强效抑制Fas、TRAIL⁃R、TNFR1等死亡受体及其配体介导的细胞凋亡。c⁃FLIPL被证实是影响细胞凋亡敏感性的重要因素，c⁃FLIPL基因在白血病中的研究较少。近期有研究发现其在一些实体瘤、骨髓增生异常综合征、淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病中表达明显增高，且与疾病进程具有相关性［11⁃12］。随着病情缓解，其表达呈下降趋势，而当肿瘤细胞出现凋亡耐受或耐药时可见持续的c⁃FLIPL高表达［13］。应用c⁃FLIPL抑制剂可使其表达下调，进而诱导细胞凋亡。因此，在某些肿瘤性疾病中监测其表达水平有可能具有诊断和判断预后的意义。

本研究应用实时PCR方法检测103例不同类型白血病初诊及复发患者骨髓单个核细胞中c⁃FLIPLmRNA表达情况。结果显示，15例正常对照者中，c⁃FLIPLmRNA呈低表达，有4例未检测出c⁃FLIPLmRNA表达。20例CR者中，3例未检测出c⁃FLIPLmRNA表达，余均为低表达。而c⁃FLIPLmRNA在初诊及复发白血病患者中的表达明显增高，对照组和CR组相比差异均具有统计学意义（P＜0.05）。不同类型初诊白血病的c⁃FLIPLmRNA表达量差异不明显，其中初诊AUL及初诊CML的c⁃FLIPLmRNA表达均高于其他初诊组。AUL一般被认为预后不良、治疗效果差，与其c⁃FLIPLmRNA高表达相符合。CML是一种骨髓增殖性疾病，粒系异常增生而凋亡受阻，其凋亡抑制蛋白c⁃FLIPL也异常增高，符合CML的发病机制，但差异均无统计学意义（P＞0.05）。也未发现AML的c⁃FLIPLmRNA表达与其FAB分型有联系，或许与病例数较少有关。值得注意的是，初诊T⁃ALL的c⁃FLIPLmRNA表达量明显高于初诊B⁃ALL，差异有统计学意义（P=0.004），这与临床上长期以来T⁃ALL的诱导治疗效果比B⁃ALL差很多和复发危险性高相一致。2例半年内死亡的患者分别为初诊T⁃ALL（对化疗不敏感，死于中枢神经系统浸润）和M3型（死于颅内出血），均表现为高白细胞血症，c⁃FLIPLmRNA的表达量明显增高，分别为4.20和2.36。且本研究发现复发患者的c⁃FLIPLmRNA的表达量高于初诊白血病患者（无统计学差异），这是否提示c⁃FLIPL的高表达与白血病耐药相关，需要增加样本量进行进一步研究。

表2 c⁃FLIPLmRNA与初诊白血病患者临床特征的关系Tab.2 Association between the expression level ofc⁃FLIPLmRNA and the clinical characteristics in newly diag⁃nosed leukemia patients

对c⁃FLIPLmRNA表达量与初诊白血病患者临床特征的关系进行分析，发现不同年龄、性别、血FIB值的c⁃FLIPLmRNA表达量的差异无统计学意义（P＞0.05），而与患者危险度分级、初诊时白细胞数、血LDH、血HBDH密切相关。高危、中危和低危患者的c⁃FLIPLmRNA表达量的差异显著。高白细胞血症（白细胞数＞100×109/L）被认为是白血病危险度分级的重要因素之一和白血病复发的独立危险因素，有研究［14］报道初诊白细胞数＞200×109/L者复发可能性高、预后差，本研究结果显示白细胞数＞100× 109/L的患者c⁃FLIPLmRNA明显高于白细胞数＜100×109/L者，差异有统计学意义（P=0.000），提示c⁃FLIPL亦可作为白血病的一个持续的预测指标。组织细胞一旦发生损伤，血清LDH就会增高，DIER⁃KSEN等［15］报道恶性血液病包括白血病患者的LDH水平显著高于健康人，且LDH越高提示预后不良。HBDH可以间接反映LDH的活力，其水平变化常与LDH相平行。本研究经过统计分析发现LDH＞1 000 U/L和HBDH＞1 000 U/L的初诊白血病患者其c⁃FLIPLmRNA的表达量高于LDH＜1 000 U/L和HBDH＜1 000 U/L者，差异均有统计学意义（P＜0.05），这提示高c⁃FLIPL表达也可以作为白血病预后不良的指标。

CD45已被广泛用于白血病的免疫分型，其高表达常与较高的复发风险相关，缺乏CD45表达的ALL预后较好，且有学者建议将CD45列为ALL分层治疗方案的影响因素之一［16］，亦有人将其用于白血病微小残留病灶的检测［17］。因此，本研究首选CD45作为免疫分型的研究对象。结果显示，CD45表达阳性组与阴性组比较，c⁃FLIPLmRNA表达量的差异有统计学意义（P=0.002）。干/祖细胞抗原CD34在B⁃ALL患者中的表达高于其在T⁃ALL患者中的表达，但CD34+的T⁃ALL预后差［18］。本研究中CD34+的B⁃ALL患者c⁃FLIPLmRNA的表达量（1.44±0.08，n= 17）低于CD34-的B⁃ALL患者（2.43±0.29，n=9），差异有统计学意义（P=0.016）。而有趣的是，CD34+的T⁃ALL患者c⁃FLIPLmRNA的表达量（3.34±0.29，n= 4）却高于CD34-的T⁃ALL患者（2.91±0.49，n=7），但差异无统计学意义（P＞0.05），可能与T⁃ALL病例数少有关，这与CD34在B⁃ALL（预后良好）和T⁃ALL（预后不良）中对预后的意义相似［19］。但本研究统计分析全部入组患者中CD34+者的c⁃FLIPLmRNA表达量与CD34-者的c⁃FLIPLmRNA表达量，差异却无统计学意义，可能是入组患者分型复杂所致。HLA⁃DR为干/祖细胞相关抗原，阳性提示细胞处于早期分化阶段，最常见于分化程度较低的亚型，导致患者对化疗药物敏感性较差，常被认为是预后不良因素［20］，与低CR率或短CR期显著相关。结果显示HLA⁃DR阳性患者的c⁃FLIPLmRNA表达量略高于阴性组，差异无统计学意义（P=0.681），可能与入组患者白血病分型较多，细胞分化程度参差不齐有关。以上结果均提示c⁃FLIPL高表达可以作为白血病预后不良的指标。

融合基因的检测对白血病患者预后的评估具有重要意义，因此本研究对c⁃FLIPL的表达量与某些常见的白血病融合基因的相关性进行分析。TEL⁃AML1融合基因在儿童ALL中较为常见，未发生TEL⁃AML1基因融合情况的患者化疗有效率不理想，TEL⁃AML1常被作为预后良好的指标［21］。本研究结果显示TEL⁃AML1阳性组的c⁃FLIPLmRNA表达量明显低于融合基因阴性组，差异有统计学意义（P=0.011），这更加提示c⁃FLIPL可以作为评估白血病预后的良好指标。BCR⁃ABL融合基因阳性是判断某些白血病预后的负相关指标，对于疾病化疗方案的选择及预后的评估均具有重要的临床意义。本研究中BCR⁃ABL阳性患者10例，其c⁃FLIPLmRNA表达量高于42例未检测出融合基因的患者，但差异无统计学意义（P=0.438），可能是融合基因阴性组患者的白血病分型复杂导致差异不显著。PML⁃RARα融合基因的持续阳性强烈预示着M3型的复发，本研究中M3型患者6例，PML⁃RARα阳性者5例，其c⁃FLIPLmRNA表达量高于融合基因阴性组，但差异无统计学意义（P=0.698），与1例PML⁃RARα阴性的M3型患者比较差异亦无统计学意义，可能与病例数少有关。

大部分白血病患者存在克隆性染色体异常，不同类型的染色体异常对化疗的反应差异较大，对预后有重要意义。本研究选取常见的且提示预后不良的3种染色体异常t（9；22）、t（15；17）及复杂核型（≥3种染色体异常）来分析c⁃FLIPL与白血病预后的关系，检测出t（9；22）与t（15；17）异常患者的c⁃FLIPLmRNA表达量高于39例未检测出染色体异常的白血病患者，但差异无统计学意义。美国国家癌症综合网按染色体异常提出不同预后风险，复杂核型被归为预后差组。本研究中检测出复杂核型的13例白血病患者的c⁃FLIPLmRNA表达量明显增高，均高于t（9；22）阳性者、t（15；17）阳性者及未检测出染色体异常者，提示c⁃FLIPL高表达的患者预后差。但差异均无统计学意义（P＞0.05），可能与病例数少或白血病分型复杂有关。

综上，c⁃FLIPLmRNA的表达情况与白血病的恶性程度相关，对评估预后有重要意义。既然c⁃FLIPL高表达提示预后不良，那么对能够特异性改变c⁃FLIPL表达水平的靶向基因药物的研究无疑具有重要的临床意义。ESMAILZADEH等［22］报道桥接整合因子1肿瘤抑制剂能够通过下调c⁃FLIP的表达水平引起Fas/FasL介导的细胞凋亡，提示c⁃FLIP可以作为皮肤T细胞淋巴瘤潜在的药物作用靶点。BRDEHOLT等［23］发现喜树碱可以通过下调c⁃FLIPL的表达水平，引起急性髓性白血病细胞株死亡。近期相继有研究报道，新型抗肿瘤药物选择性组蛋白去乙酰化酶抑制剂如Trichostatin A［24］、伏立诺他及恩替诺特［25］能够调节c⁃FLIPL的表达水平，通过下调c⁃FLIPL的转录、翻译水平或促进其降解来修复肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。因此，c⁃FLIPL将成为白血病治疗的新靶点。

参考文献：

［1］SONG X，KIM SY，ZHOU Z，et al.Hyperthermia enhances mapatu⁃mumab⁃induced apoptotic death through ubiquitin⁃mediated degra⁃dation of cellular FLIP（long）in human colon cancer cells［J］.Cell Death Dis，2013，4：e577.DOI：10.1038/cddis.2013.104.

［2］SHAO Y，LE K，CHENG H，et al.NF⁃κB regulation of c⁃FLIP pro⁃motes TNFα⁃mediated RAF inhibitor resistance in melanoma［J］.J Invest Dermatol，2015，135（7）：1839-1848.DOI：10.1038/jid.2015. 91.

［3］SUN J，LUO H，NIE W，et al.Protective effect of RIP and c⁃FLIP in preventing liver cancer cell apoptosis induced by TRAIL［J］.Int J Clin Exp Pathol，2015，8（6）：6519-6525.

［4］MATTE I，LANE D，BOVIN M，et al.MUC16 mucin（CA125）atten⁃uates TRAIL⁃induced apoptosis by decreasing TRAIL receptor R2 expression and increasing c⁃FLIP expression［J］.BMC Cancer，2014，14：234.DOI：10.1186/1471⁃2407⁃14⁃234.

［5］ESMAILZADEH S，HUANG Y，SU MW，et al.BIN1 tumor suppres⁃sor regulates Fas/Fas ligand⁃mediated apoptosis through c⁃FLIP in cutaneous T⁃cell lymphoma［J］.Leukemia，2015，29（6）：1402-1413.DOI：10.1038/leu.2015.9.

［6］SACHANAS S，LEVIDOU G，ANGELOPOULOU MK，et al.Apop⁃totic and proliferative characteristics of proliferation centers in lymph node sections of patients with chronic lymphocytic leukemia［J］.Leuk Lymphoma，2014，55（3）：571-582.DOI：10.3109/ 10428194.2013.806802.

［7］BAGNOLI M，CANEVARI S，MEZZANZANICA D.Cellular FLICE⁃inhibitory protein（c⁃FLIP）signaling：a key regulator of receptor⁃mediated apoptosis in physiologic context and in cancer［J］.Int J Biochem Cell Biol，2010，42（2）：210-213.DOI：10.1016/j.bio⁃cel.2009.11.015.

［8］SACHANAS S，LEVIDOU G，ANGELOPOULOU MK，et al.Apop⁃totic and proliferative characteristics of proliferation centers in lymph node sections of patients with chronic lymphocytic leukemia［J］.Leuk Lymphoma，2014，55（3）：571-582.DOI：10.3109/ 10428194.2013.806802.

［9］张之南，沈悌.血液病诊断及疗效标准［M］.3版.北京：科学出版社，2008：103-149.

［10］IRMLER M，THOME M，HAHNE M，et al.Inhibition of death re⁃ceptor signals by cellular FLIP［J］.Nature，1997，388（6638）：190-195.DOI：10.1038/40657.

［11］NOVELL A，MARTINEZ⁃ALONSO M，MIRA M，et al.Prognostic value of c⁃FLIPL/s，HIF⁃1α，and NF⁃κβ in stageⅡandⅢrectal cancer［J］.Virchows Arch，2014，464（6）：645-654.DOI：10.1007/s00428⁃014⁃1572⁃z.

［12］陈宝安，张波，高冲，等.骨髓增生异常综合征相关基因表达研究［J］.中国实验血液学杂志，2010，18（3）：666-670.

［13］HAN MH，PARK C，KWON TK，et al.The histone deacetylase in⁃hibitor trichostatin A sensitizes human renal carcinoma cells to TRAIL⁃induced apoptosis through down⁃regulation of c⁃FLIPL［J］. Biomol Ther（Seoul），2015，23（1）：31-38.DOI：10.4062/biomol⁃ther.2014.092.

［14］KONG SG，SEO JH，JUN SE，et al.Childhood acute lymphoblastic leukemia with hyperleukocytosis at presentation［J］.Blood Res，2014，49（1）：29-35.DOI：10.5045/br.2014.49.1.29.

［15］DIERKSEN J，BUJA LM，CHEN L.Clinicopathologic findings of hematological malignancy：a retrospective autopsy study［J］.Ann Clin Lab Sci，2015，45（5）：565-573.

［16］NANNM S，BUKHARI MH.Antigen expression on blast cells and hematological parameters at presentation in acute lymphoblastic leukemia patients［J］.J Coll Physicians Surg Pak，2015，25（6）：407-411.DOI：06.2015/JCPSP.407411.

［17］SHEN HQ，FENG JH，TANG YM，et al.Absolute lymphocyte count is associated with minimal residual disease level in child⁃hood B⁃cell precursor acute lymphoblastic leukemia［J］.Leuk Res，2013，37（6）：671-674.DOI：10.1016/j.leukres.2013.02.002.

［18］VAN GROTEL M，VAN DEN HEUVEL⁃EIBRINK MM，VAN WERING ER，et al.CD34 expression is associated with poor sur⁃vival in pediatric T⁃cell acute lymphoblastic leukemia［J］.Pediatr Blood Cancer，2008，51（6）：737-740.DOI：10.1002/pbc.21707.

［19］王弘，迟昨非，张欢，等.102例儿童急性淋巴细胞性白血病免疫分型、细胞遗传学改变及临床特征分析［J］.中国医学工程，2011，19（1）：14-16.

［20］GE F，LI B，GAO X，et al.Immuno⁃phenotypes and prognosis of acute leukemia in elderly patients［J］.Int J Clin Exp Med，2014，7（10）：3714-3718.

［21］PANDITA A，HARISH R，DIGRA SK，et al.Molecular cytogenet⁃ics in childhood acute lymphoblastic leukemia：a hospital⁃based observational study［J］.Clin Med Insights Oncol，2015，9：39-42. DOI：10.4137/CMO.S24463.

［22］ESMAILZADEH S，HUANG Y，SU MW，et al.BIN1 tumor sup⁃pressor regulates Fas/Fas ligand⁃mediated apoptosis through c⁃FLIP in cutaneous T⁃cell lymphoma［J］.Leukemia，2015，29（6）：1402-1413.DOI：10.1038/leu.2015.9.

［23］BREDHOLT T，DIMBA EA，HAGLAND HR，et al.Camptothecin and khat（Catha edulis Forsk.）induced distinct cell death pheno⁃types involving modulation of c⁃FLIPL，Mcl⁃1，procaspase⁃8 and mi⁃tochondrial function in acute myeloid leukemia cell lines［J］.Mol Cancer，2009，8：101.DOI：10.1186/1476⁃4598⁃8⁃101.

［24］PARK SJ，KIM MJ，KIM HB，et al.Trichostatin A sensitizes hu⁃man ovarian cancer cells to TRAIL⁃induced apoptosis by down⁃regulation of c⁃FLIPLvia inhibition of EGFR pathway［J］.Bio⁃chem Pharmacol，2009，77（8）：1328-1336.DOI：10.1016/j.bcp. 2008.12.027.

［25］CARSON R，CELTIKCI B，FENNINGe C，et al.HDAC inhibition overcomes acute resistance to MEK inhibition in BRAF⁃mutant colorectal cancer by downregulation of c⁃FLIPL［J］.Clin Cancer Res，2015，21（14）：3230-3240.DOI：10.1158/1078⁃0432.CCR⁃14⁃2701.

（编辑 陈 姜）

Expression of c⁃FLIPLin Leukemia and Its Clinical Significance

CHI Zuofei1，HE Qiuying1，YANG Wei2，FU Yu3，FU Shuang3，ZHUANG Qian1
（1.Department of Pediatric Hematology，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110022，China；2.The Second Department of Hematology，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110022，China；3.Department of Hematology Lab，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110022，China）

Objective To investigate the expression ofc⁃FLIPLin leukemia and explore its clinical significance.Methods The expression level ofc⁃FLIPLmRNA in bone marrow mononuclear cells was determined by real⁃time polymerase chain reaction（PCR）in 103 leukemia patients with different types of leukemia，including 54 cases of acute lymphocytic leukemia（ALL）with 37 newly diagnosed，5 relapsed，and 12 complete remis⁃sion，38 cases of acute myeloid leukemia（AML）with 24 newly diagnosed，6 relapsed，and 8 complete remission，newly diagnosed 2 cases of acute undifferentiated leukemia（AUL），6 cases of chronic myelocytic leukemia（CML），and 3 cases of chronic myelomonocytic leukemia（CM⁃ML）.The immunophenotype of patients were detected by flow cytometry.Results Expression level ofc⁃FLIPLmRNA was higher in newly diag⁃nosed and relapsed leukemia patients.There was no significant difference between newly diagnosed and relapsed leukemia patients（P＞0.05）.Ex⁃pression level ofc⁃FLIPLmRNA of AUL and CML was higher than that in other patients，but there was no significant difference（P＞0.05）.Ex⁃pression level ofc⁃FLIPLmRNA of all newly diagnosed and relapsed leukemia patients was significantly higher than that in control group and com⁃plete remission group（P＜0.05）.The expression level ofc⁃FLIPLmRNA was correlated with risk stratification，white blood cell（WBC），lactate dehydrogenase（LDH），hydroxybutyrate dehydrogenase（HBDH），CD45 andTEL⁃AML1，but was not associated with age，sex，fibrinogen and chromosome abnormality.Conclusionc⁃FLIPLmRNA is highly expressed in leukemia patients，and is closely related with risk stratification，WBC，LDH，HBDH and prognosis.

c⁃FLIPL；leukemia；real⁃time polymerase chain reaction

R552

A

0258-4646（2017）02-0120-06

10.12007/j.issn.0258⁃4646.2017.02.006

沈阳市科技计划（F13⁃316⁃1⁃08）

迟昨非（1982-），女，主治医师，硕士.

杨威，E-mail：yangw@sj⁃hospital.org

2016-08-25

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