培元胶囊对正常小鼠免疫功能的影响

汪光云 汪 宁 宣自华 杨 光 桂双英 戴 敏 王 键

(安徽中医药大学新安医学省部共建教育部重点实验室 安徽省中医药科学院中药药效与安全性评价研究所,安徽 合肥 230031)

培元胶囊对正常小鼠免疫功能的影响

汪光云 汪 宁 宣自华 杨 光 桂双英 戴 敏 王 键

(安徽中医药大学新安医学省部共建教育部重点实验室 安徽省中医药科学院中药药效与安全性评价研究所,安徽 合肥 230031)

目的 探讨培元胶囊(PYC)对正常小鼠免疫功能的影响。方法 3批小鼠，每批60只，随机分成空白对照组、阳性对照组、培元胶囊高、中、低剂量组(剂量分别为3.6、1.8、0.9 g生药/kg)。给药组连续灌胃培元胶囊15 d，空白对照组和阳性对照组分别以等量的生理盐水和甘露聚糖肽代替。灌胃结束后，测定小鼠脾脏、胸腺指数，脾淋巴细胞转化能力以及单核-巨噬细胞碳廓清指数。结果 培元胶囊各剂量组的正常小鼠的免疫器官脏器系数均显著高于空白对照组；培元胶囊中、高剂量组小鼠脾淋巴细胞转化能力显著高于空白对照组；培元胶囊各剂量组小鼠的吞噬系数显著高于空白组(P<0.05，P<0.01)。结论 培元胶囊能增强正常小鼠的免疫功能。

培元胶囊；免疫功能

培元胶囊保健方是在新安医家汪机“固本培元”的理论指导下，在其再传弟子孙一奎“壮元汤”的基础上拟方，强调补气、补阴、生血、补脾胃，从整体上激活机体的防御系统〔1～4〕。本文观察培元胶囊对正常小鼠免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 培元胶囊：安徽省中医院制剂室制备。昆明种清洁级小鼠，雌雄各半，常州卡文斯实验动物有限公司〔SCXK(苏)2011-0003号〕提供，甘露聚糖肽片：广东宏远集团药业有限公司生产；刀豆球蛋白(Con)A Sigma公司；MTT、二甲基亚砜 Sigma分装，武汉生命技术有限公司；PBS缓冲液：北京中杉金桥生物技术有限公司；胎牛血清(FBS)杭州四季青公司；Hanks液、RPMI1640 赛默飞世尔生物化学制品有限公司；Na2CO3宜兴市展望化工试剂厂；印度墨汁：上海远慕生物科技有限公司。

1.2 实验仪器和设备 Multiskan spectrum型酶标仪、371型二氧化碳培养箱、Multifuge XLR型水平离心机(德国Thermo Scientific公司)；紫外可见光分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；DMI4000型倒置显微镜(德国Leica公司)；Countstar IC1000型自动细胞计数仪(美国Inno-Alliance Biotech Inc公司)；FA2004型电子精密天平(上海精密科学仪器有限公司)；培养瓶、培养皿、96孔培养板(美国Corning公司)。

1.3 试验方法 3批昆明种小鼠，每批60只(18～22 g)，随机分为：空白对照组、阳性对照组、培元胶囊高、中、低剂量组(3.6、1.8、0.9 g生药/kg)，每组12只。实验组给小鼠灌胃不同剂量的培元胶囊,阳性对照组给予等量甘露聚糖肽溶液(3.9 mg/kg)，空白对照组给予等量生理盐水。每天1次,连续15 d。末次给样1 h以后进行各项免疫指标的测定〔5〕。

1.3.1 脏器/体重比值测定 末次给样1 h以后,称重并处死小鼠,无菌取出胸腺和脾脏,用滤纸吸干表面血污，在电子天平上称重,计算脏器/体重比值〔6～8〕。

1.3.2 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验 小鼠脱颈椎处死后无菌取脾,置于盛有适量无菌Hanks液的平皿中，轻轻将其磨碎，用4层纱布过滤，制成单细胞悬液。用 Hanks 液将细胞悬液洗涤2次，1 000 r/min离心10 min，然后将细胞悬浮于1 ml的完全培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数，调整细胞浓度为3×106个/ml。将每只实验小鼠的脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1 ml，其中一孔加75 μl ConA液，另一孔作为对照，置于5% CO2、37℃CO2孵箱中培养72 h。培养结束前4 h，每孔轻轻吸去上清液0.7 ml，加入0.7 ml不含小牛血清的 RPMI1640 培养液，同时加入 MTT(5 mg/ml)50 μl/孔，继续培养4 h。培养结束后，每孔加入1 ml DMSO，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解，最后将24孔中液体以每孔3个复孔分装于96孔培养板中，用酶联免疫检测仪，于570 nm波长处，测定每孔吸光度。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值D(570 nm)减去不加ConA孔的光密度值D(570 nm)表示〔9〕。

1.3.3 小鼠碳廓清实验 末次给样后1 h经尾静脉给小鼠注射用生理盐水稀释4倍的印度墨汁,每10 g体重注射0.1 ml墨汁注入后立即计时,于注入后第2和第10分钟分别从眼内眦静脉丛取血20 μl,加入到2 ml 0.1%Na2CO3溶液、摇匀,以Na2CO3溶液作空白对照,用半自动生化仪测光密度值D(600 nm)将小鼠处死,取肝和脾脏,称重,计算吞噬指数〔10〕。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1 各组小鼠免疫器官脏器/体重比值比较 与空白对照组相比，培元胶囊各剂量组可显著增加正常小鼠的脾脏及胸腺免疫器官的脏器系数(P<0.05，P<0.01)。见表1。

表1 各组小鼠免疫器官指数的比较

与空白对照组比较：1)P<0.05，2)P<0.01；下表同

2.2 各组小鼠脾淋巴细胞转化能力比较 与空白对照组相比，培元胶囊中、高剂量组可显著增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力(P<0.05，P<0.01)。见表2。

2.3 各组小鼠单核-巨噬细胞碳廓清功能比较 与空白对照组相比,培元胶囊剂量为3.6、1.8 g/kg时，小鼠的吞噬系数有显著差异(P<0.05，P<0.01)。见表2。

表2 各组小鼠脾淋巴细胞转化能力、碳廓清功能比较

3 讨 论

培元胶囊是在“固本培元”学说指导下，在孙一奎“壮元汤”的基础上，通过文献、临床疗效等调研、筛选确定处方组成，该方由人参、黄芪等中药组成。孙一奎是我国明代著名医学家，因善用参芪，历代以来多以“温补派”而备受推崇，他认为人参、黄芪不仅补气，亦能补血，不仅补阴，还能补阳〔11〕，其“固本培元”的“本”侧重于肾，通过推动肾间动气，即激发人体生命的原动力，来抵御外邪，治疗疾病。故孙一奎治疗疾病多采用益气药与温阳药共用〔12〕。免疫系统是机体内担负免疫功能的物质结构，由免疫器官、免疫细胞和免疫分子构成，它们是机体免疫应答的物质基础〔13〕。胸腺是中枢免疫器官，脾脏是外周免疫器官，二者均是体内的主要免疫器官，与体液免疫和细胞免疫均的功能有密切关系〔14〕。通过检测胸腺和脾脏等脏器系数的大小可反映机体免疫水平的高低，本文中培元胶囊各剂量组小鼠脾指数和胸腺指数均有显著升高，作为重要的免疫器官，胸腺与脾脏的重量增加，提示免疫功能的增强〔15,16〕。小鼠的脾细胞主要为免疫细胞，免疫增强剂能诱导其发生增殖反应。MTT法则通过检测细胞转化而间接反映细胞增殖的程度，是机体重要的细胞免疫指标〔17,18〕。本文提示培元胶囊对小鼠的免疫细胞及免疫功能有直接的调节作用。巨噬细胞是免疫效应细胞，具有多种免疫功能，包括免疫防御，免疫监视，免疫调节及抗原呈递等〔19〕，通过吞噬作用清除体内衰老损伤和凋亡细胞及免疫复合物和病原体等抗原性异物，因此单核吞噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一，单核吞噬细胞清除的速率可反映其吞噬功能〔20,21〕。本文显示培元胶囊的剂量为3.6、1.8 g/kg时，可显著提高小鼠吞噬指数，说明培元胶囊可以增强正常小鼠非特异性免疫功能。

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〔2016-01-04修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)

Effect of Peiyuan capsule on normal mice immunologic function

WANG Guang-Yun,WANG Ning,XUAN Zi-Hua,etal.

Key Laboratory of Xin′an Medicine, Ministry of Education, Hefei 230031, Anhui, China

Objective To observe the immunomodulatory activity of Peiyuan capsule(PYC) in normal mice.Methods The mice were divided into 5 groups: normal control, positive control, PYC high, middle and low dose (3.6, 1.8, 0.9 g/kg) groups.Mice in drug groups were administrated intragastrically with PYC for 15 days. Mice in normal and positive control groups were given equal amount of saline and mannatide. After that, mice were examined for the data of immune organs weights, lymphocyte transformation capability and mononuclear macrophage phagorytosis function. Results The spleen index and thymus index in PYC groups were significantly increased than those of normal control group (P<0.05,P<0.01).The lymphocyte transformation capability in middle and high dose PYC groups were significantly stronger than those of normal control group (P<0.01). High and middle dose of PYC could significantly increase the mononuclear macrophage phagorytosis function than that of normal control group (P<0.05,P<0.01).Conclusions PYC can improve the immune function of normal mice.

Peiyuan capsule(PYC);Immune function

十二五科技支撑计划 (No.2012BAI26B03)

汪 宁(1970-)，男，教授，硕士生导师，主要从事中药药效学与功能性评价研究。

汪光云(1989-)，男，硕士，主要从事中药药理学研究。

R151.41

A

1005-9202(2017)09-2090-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.09.004