P2X7受体在宫颈癌组织中的表达及其与病理相关参数的关系研究

汪静文， 徐明娟

(第二军医大学第三附属东方肝胆外科医院妇产科， 上海 201600)

P2X7受体在宫颈癌组织中的表达及其与病理相关参数的关系研究

汪静文， 徐明娟

(第二军医大学第三附属东方肝胆外科医院妇产科， 上海 201600)

目的：探讨配体门控离子通道受体(P2X7)在宫颈癌组织中的表达及其与病理相关参数的关系。方法：收集2013年1月至2015年6月门诊因宫颈病变行宫颈活检、LEEP手术治疗的90例CIN患者(CIN组)以及73例宫颈癌患者(宫颈癌组)和112例子宫肌瘤全子宫切除术患者(正常子宫组)的宫颈组织石蜡标本。采用免疫组织化学法检测3组研究对象宫颈组织中P2X7受体表达差异，分析P2X7受体在宫颈癌组织中表达与其分期间的关系， 探讨P2X7受体的表达强度与宫颈病变患者高危型HPV阳性CT值间关系及其与病理相关参数的关系。结果：宫颈癌组宫颈组织中P2X7受体阴性表达率90.41%最高，CIN组73.33%次之，子宫肌瘤全子宫切除术组4.46%最低，3组之间两两相较有统计学意义(P<0.05)；P2X7受体在宫颈癌组织中表达阴性率Ⅱ期高于I期(P<0.05)；随着P2X7受体表达强度增加，宫颈病变患者高危型HPV阳性CT值随之升高，不同强度之间两两相较有统计学意义(P<0.05)，P2X7受体阴性表达患者宫颈癌病灶大小≥4cm所占百分比较阳性表达组明显高(P<0.05)。结论：P2X7受体在宫颈癌组织中阴性表达率较正常宫颈组织明显高，其在宫颈癌组织中表达与宫颈癌病理分期、高危型HPV阳性CT值及病理相关参数存在一定关联，对指导本病诊治提供重要参考价值。

宫颈癌；P2X7受体；宫颈组织；免疫组织化学法

宫颈癌为临床常见女性生殖道恶性肿瘤，以接触性出血为主要临床表现，因其可发生周围浸润及远处转移，对女性身心健康造成严重影响，虽目前细胞学、宫颈高危人乳头瘤病毒等对本病早期诊断提供了重要参考，在一定程度上提高了宫颈癌早期准确诊断率，然而仍有20%的宫颈癌患者确诊时仍处于中晚期，致使远期预后效果不佳[1,2]。相关文献报告指出通过探讨宫颈癌发生及进展过程中相关生物学机制对改善患者远期预后效果有着重要参考价值[3]。宫颈癌发病机制较复杂，目前对其病因尚未完全明确，然而近期一项文献报告指出P2X7受体在妇科疾病肿瘤中发挥重要作用[4]，但一直以来对P2X7受体在宫颈癌组织中的表达及其与病理相关参数的关系研究较少涉及，为此笔者于本文展开临床对照性研究，结果报告如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料:收集2013年1月至2015年6月我院门诊收治的112例子宫肌瘤全子宫切除术患者(正常宫颈组，平均年龄47.24±9.80)、90例宫颈癌前病变(CIN)患者(CIN组，平均年龄46.83±9.92)及住院手术治疗的73例宫颈癌患者(宫颈癌组，平均年龄46.53±9.42)为研究对象。其中宫颈癌组鳞癌73例，患者的分期情况为，Ia1期5例(7%)，Ia2期1例(1%),Ib1期21例(29%)，Ib2期9例(12%)，IIa1期23例(32%)，IIa2期11例(15%)，IIb期3例(4%)。CIN组患者中，CIN I 47例(52%)，CIN II-III 43例(48%)。

1.2 入组标准: ①经手术病理学证实为宫颈癌；②纳入研究前未接受放化疗及免疫治疗；③子宫无先天畸形；④对本研究及目的知情并自愿签署知情同意书，征得本院伦理委员会批准同意。排除标准：①纳入研究前有妇科手术史；②合并凝血功能障碍；③合并严重心、肝、肾等重要脏器功能障碍；④对本研究依从性不高。子宫肌瘤全子宫切除术组年龄30～66(47.24±9.80)岁，体重48～72(63.87±7.03)kg；CIN组年龄31～61(46.83±9.92)岁，体重49～72(64.01±7.51)kg；宫颈癌组年龄32～59(46.53±9.42)岁，体重49～73(63.91±7.11)kg。3组研究对象上述基线资料相较无明显差异(P>0.05)，具有可比性。

1.3 研究方法①试剂：P2X7抗体(美国Santa Cruz)，稀释比1：200，二抗GTVisionIII抗鼠/兔通用型免疫组化学试剂盒及DBA显色剂(K5007)购自丹麦Dako公司。②检测方法：免疫组织化学法，采集3组研究对象宫颈组织并制成标本，将石蜡切片置于烘箱中62℃烤1～2h，常规脱蜡、水化；用PH=6.0的0.01mol/L柠檬酸钠抗原修复液修复；3%H2O2抑制内源性过氧化物酶室温孵育；血清封闭后孵育一抗、二抗， DAB显色3～5min；苏木素复染45s，流水冲洗5min；盐酸酒精分化1s,流水冲洗15min；梯度酒精脱水，二甲苯透明，树脂封片；镜下(购自上海精密仪器有限公司的Stemi508OLIPICS电子显微镜)观察，细胞核呈蓝色，阳性产物呈棕黄色或黄色。③结果判断：阳性显色为棕黄色颗粒，可依据切片中阳性细胞百分比和着色强度进行半定量分级评分：阳性细胞的百分比≤10%为0分，11%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，≥76%为4分。着色强度：0分为不着色，1分浅黄色，2分黄色，3分棕褐色。取上述两项分值的乘积作为总积分：0分为阴性(-)，1-4分为弱阳性(+)，6-8分为阳性(++)，9-12分为强阳性(+++)。其中阳性表达率=(阳性+强阳性)/总例数×100%。

1.4 观察指标:①3组研究对象宫颈组织中P2X7受体表达差异。②P2X7受体在宫颈癌组织中表达与宫颈癌分期间的关系，宫颈癌分期标准：Ⅰ期：Ⅰa 镜下浸润癌。所有肉眼可见的病灶，包括表浅浸润，均为ⅠB；Ⅰa1 间质浸润深度<3 mm，水平扩散≤7 mm；Ⅰa2 间质浸润深度3～5 mm，水平扩散≤7 mm；Ⅰb 肉眼可见癌灶局限于宫颈，或者镜下病灶>Ⅰa2；Ⅰb1 肉眼可见癌灶最大径线≤4 cm；Ⅰb2 肉眼可见癌灶最大径线>4 cm；Ⅱ期 肿瘤超越子宫，但未达骨盆壁或未达阴道下 1/3；Ⅱa 无宫旁浸润；Ⅱb 有宫旁浸润。③P2X7受体的表达强度与宫颈病变患者高危型HPV阳性CT值间的关系。④P2X7受体与宫颈癌病理相关参数的关系。

2 结 果

2.1 3组研究对象宫颈组织中P2X7受体表达差异:宫颈癌组宫颈组织中P2X7受体阴性表达率最高，CIN组次之，子宫肌瘤全子宫切除术组最低，3组之间两两相较有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 3组研究对象宫颈组织中P2X7受体表达差异n(%)

表2 P2X7受体在宫颈癌组织中表达与宫颈癌分期间的关系n(%)

2.2 P2X7受体在宫颈癌组织中表达与宫颈癌分期间的关系：P2X7受体在宫颈癌组织中表达阴性率Ⅱ期高于Ⅰ期，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3 P2X7受体表达强度与宫颈病变患者高危型HPV阳性CT值间的关系：随着P2X7受体表达强度增加，宫颈病变患者高危型HPV阳性CT值随之升高，不同强度之间两两相较差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 P2X7受体表达强度与宫颈病变患者高危型HPV阳性CT值间的关系

2.4 P2X7受体与宫颈癌病理相关参数的关系:P2X7受体阴性表达患者宫颈癌病灶大小≥4cm所占百分比较阳性表达组明显高，差异有统计学意义(P<0.05)；2组其它病理参数相较无明显差异(P<0.05)，经见表4。

表4 P2X7受体与宫颈癌病理相关参数的关系n(%)

3 讨 论

宫颈癌是目前国内发病率较高的恶性肿瘤，因本病早期易发生髂内淋巴结、闭孔淋巴结转移以及宫旁组织浸润程度较高，目前临床对其治疗尚缺乏行之有效的治疗方法，患者远期生存指标较差，此外患者无瘤生存期和疾病无进展生存期较短，一直以来临床对宫颈癌患者远期预后效果尚缺乏灵敏指标[5]。近年来细胞学检查及宫颈HPV检查在提高宫颈癌早期诊断水平中有着重要临床意义，其中P2X7受体在宫颈癌中的作用备受关注[6]。

早期相关文献报告指出P2X7受体参与细胞因子释放、骨重塑、炎症反应及神经源性疼痛及妇科肿瘤等疾病中，因而临床可考虑对宫颈癌患者组织中P2X7受体表达进行检测分析可能对疾病诊治有一定指导意义[7]。本文在既往研究基础上另展开临床对照性研究，研究结果显示宫颈癌患者宫颈组织中P2X7受体阴性表达率90.41%最高，宫颈癌前病变患者73.33%次之，子宫肌瘤全子宫切除术组4.46%最低，各组之间相较有统计学意义，且P2X7受体在宫颈癌组织中表达阴性率随着宫颈癌分期增加而升高，同时随着P2X7受体表达强度增加，宫颈病变患者高危型HPV阳性CT值随之升高， 此外P2X7受体阴性表达患者宫颈癌病灶大小≥4cm所占百分比较阳性表达组明显高，初步证实了P2X7受体在宫颈癌患者宫颈组织中阳性表达率明显降低，并且P2X7受体高阴性表达在宫颈癌患者分期及宫颈病变患者高危型HPV阳性鉴别诊断中有明显应用价值。P2X7受体属于胞外核苷酸激活的嘌呤类受体P2受体中的配体门控的离子通道受体，ATP为其天然配体，受适当浓度配体刺激后，P2X7受体调控非选择钙离子通道，当ATP浓度升高时，各种阳离子均可通过分子量较大的有机阳离子，引起细胞膜通透性增高，使细胞外本不该通过的物质进入细胞内，最终导致细胞溶胞死亡[8,9]。研究表明P2X7受体在正常宫颈细胞中表达比癌细胞表达水平高，在正常子宫，多数P2X7受体存在外宫颈上皮组织[10,11]；此外P2X7受体与配体结合后可通过膜孔形成、增强Ca离子内流以及依赖Ca离子活化的线粒体途径等机制诱导细胞凋亡。早期一项研究结果表明，P2X7受体特效激动剂BzATP可诱导正常及癌变宫颈细胞凋亡，并且这种作用在正常细胞中明显强于宫颈癌细胞[12]；子宫癌细胞可能通过下调P2X7的mRNA继而逃避生长控制，国外一学者研究结果表明，在肿瘤形成早期会出现一定的P2X7受体缺失[13]，此外临床标本检查表明P2X7受体的mRNA、蛋白表达水平在非典型增生、子宫内膜癌中低于正常组织[14]。

综上，P2X7受体在宫颈癌患者癌变组织中的表达较正常宫颈组织存在明显差异，本次研究初步证实了宫颈癌发病机理可能与P2X7受体表达水平下降有关，为宫颈癌的诊治疗提供新的研究方向和研究基础。

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1006-6233(2017)05-0806-04

长海医院“1255”学科建设计划，(编号：CH125512105)

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10.3969/j.issn.1006-6233.2017.05.030