7种肿瘤相关抗原自身抗体检测在肺癌诊断中的意义*

赵娟，刘宁，郭婧婧，陈伟，钟一鸣，刘文恩

(中南大学湘雅医院检验科，长沙 410008)

·临床实验研究·

7种肿瘤相关抗原自身抗体检测在肺癌诊断中的意义*

赵娟，刘宁，郭婧婧，陈伟，钟一鸣，刘文恩

(中南大学湘雅医院检验科，长沙 410008)

目的 探讨7种肿瘤相关抗原自身抗体(p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1和CAGE抗体)在初诊肺癌患者中的临床诊断价值。方法 收集我院108例初诊肺癌患者、96例体检健康者、120例肺部良性疾病患者和227例其他癌症患者。ELISA法检测各组血清中7种自身抗体的水平，绘制ROC曲线分析其对肺癌的诊断效能，并比较7种自身抗体联合检测在不同临床病理特征肺癌患者间和各受试组间的阳性率。结果 肺癌组7种自身抗体水平均高于健康人对照组、肺部良性疾病组和其他癌症组，差异均有统计学意义(P均<0.05)。7种自身抗体联合检测诊断初诊肺癌患者敏感性为62.00%，特异性为89.80%，AUCROC为0.769，其敏感性和AUCROC均高于各自身抗体单项检测。7种自身抗体联合检测在肺癌组的阳性率明显高于健康人对照组(χ2=50.885，P<0.01)、肺部良性疾病组(χ2=56.341，P<0.01)以及其他癌症组(χ2=46.812，P<0.01)。结论 7种肿瘤相关抗原自身抗体联合检测可作为潜在的肺癌辅助诊断指标。

自身抗体；肺癌；诊断价值

抗原性肿瘤标志物虽对肺癌有一定的诊断价值，但其主要用于疗效监测，对早期诊断意义不大[1]。肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen, TAA)自身抗体在肺癌早期诊断中有良好的诊断效能[2-3]。目前已证实多种TAA与肺癌相关，其相应的自身抗体可用于肺癌的临床诊断[4]。有学者筛选出14种TAA自身抗体组合用于肺癌诊断，但其成本较高，临床应用价值不大[5]。本研究依据孙苏彭等[5]的专利，进一步评估p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1 和CAGE 7种TAA自身抗体联合检测在初诊肺癌患者诊断中的临床应用价值。报道如下。

1 材料和方法

1.1 研究对象 收集我院2016年9-11月就诊的初诊肺癌患者108例，男85例，女23例，年龄32～78岁，中位年龄59岁。肺癌诊断依据中国临床肿瘤学会(CSCO)《原发性肺癌诊疗指南 2016.V1》。纳入标准：(1)患者初诊，此前未接受放化疗或手术治疗；(2)由纤支镜、经皮穿刺、淋巴结或浅表肿物活检和体腔积液细胞学检查等病理学检验确诊；(3)远处转移及分期经病理活检、CT或MRI评价；(4)未并发其他肿瘤且病史资料完整。同时具备以上4条者即可纳入肺癌组。排除标准：对接受过放化疗或手术治疗肺癌患者，或同时患有严重的肝肾功能不全、糖尿病、感染、其他类型肿瘤、分期不明确、非肺癌初诊患者予以排除。按病理组织学分期：肺腺癌 59例，肺鳞癌35例，小细胞肺癌9例，其他类型肺癌5例(大细胞肺癌2例，粘液表皮样癌2例和腺鳞癌1例)；按TNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期6例，Ⅲ期40例，Ⅳ期46例。收集同期就诊的体检健康者96例，男75例，女21例，年龄30～78岁，中位年龄58岁；肺部良性疾病患者120例，男78例，女42例，年龄16～88岁，中位年龄55岁，包括肺结核53例，肺炎42例，慢性阻塞性肺疾病(COPD)25例；其他癌症患者227例，男114例，女111例，年龄18～85岁，中位年龄54岁，包括肝癌[6]73例，乳腺癌[7]71例，结直肠癌[8]83例，此前均未接受任何放化疗等相关临床治疗且无肺部转移。本研究获本院医学伦理学委员会批准，研究对象知情同意。

1.2 标本收集与处理 所有研究对象均在入院时(体检健康者于体检时)清晨空腹采集静脉血10 mL，3 500 r/min离心5 min，分离血清，8 h内完成检测，不能及时检测的标本置-20 ℃保存。

1.3 主要试剂和仪器 7种自身抗体检测试剂盒(酶联免疫法)及其配套试剂盒购自杭州凯保罗公司；Synergy 2型酶联仪(BioTek公司)。

1.4 ELISA检测7种TAA自身抗体 严格按照试剂盒说明书操作，酶联仪读取450 nm处吸光度(A450 nm)值，各自身抗体试剂盒参考范围(U/mL)分别为：p53<13.1、PGP9.5<11.1、SOX2<10.3、GAGE7<14.4、GBU4-5<7.0、MAGE<11.9、CAGE<7.2。

1.5 统计学分析 用SPSS 21.0统计学软件进行。抗体水平经正态性检验为偏态分布，用中位数(四分位数)[M(P25,P75)]表示，多组间比较采用 Kruskal-WallisH检验，两组间比较采用非参数Mann-WhitneyU检验；自身抗体单项、联合检测诊断效能通过绘制ROC曲线分析；计数资料以卡方检验比较组间差异。以P<0.05表示有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清自身抗体检测水平 肺癌组患者血清p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1 和CAGE水平均高于健康人对照组、肺部良性疾病组和其他癌症组，差异有统计学意义(P均<0.05)。而健康人对照组、肺部良性疾病组和其他癌症组间7种自身抗体水平差异比较均无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 肺癌组和其他受试组血清中各自身抗体检测水平比较[ M(P25，P75)]

注：与肺癌组相比，*，P<0.05；#，P<0.01。

2.2 自身抗体单项和7种自身抗体联合检测对肺癌患者诊断能评价 以肺癌患者作为疾病组，非肺癌患者(健康人对照组、肺部良性疾病组和其他癌症组)作为对照组，绘制ROC曲线分析7种自身抗体单项检测以及联合检测(一个指标为阳性即判结果为阳性)对初诊肺癌患者的诊断效能。ROC曲线见图1。结果显示，7种自身抗体联合检测的敏感性(62.00%)和ROC曲线下面积AUCROC(0.769)均高于各自身抗体单项检测。见表2。

图1 自身抗体单项检测和联合检测诊断肺癌的ROC曲线

表2 各自身抗体单项检测与7种自身抗体联合检测诊断效能

2.3 7种自身抗体联合检测在不同临床病理特征肺癌患者中的阳性率比较 7种自身抗体联合检测在肺癌患者不同年龄段、不同性别、不同病理类型和不同临床分期中的阳性率差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表3。

表3 不同临床病理特征肺癌患者7种自身抗体联合检测的阳性率比较

参数总例数阳性例数(%)χ2P年龄(岁) <605333(62．26)0．0580．809 ≥605533(60．00)性别 男8553(62．35)0．2590．611 女2313(56．52)吸烟 有6340(63．49)0．3610．548 无4526(57．78)组织学分型∗ 小细胞肺癌95(55．56) 腺癌5933(55．93)0．9250．630 鳞癌3523(65．71)TNM分期 Ⅰ～Ⅱ期2213(59．09) Ⅱ～Ⅲ期4024(60．00)0．1310．937 Ⅳ期4629(63．04)

注：*，其他病理类型肺癌由于例数过少且分型不一致，未纳入统计。

2.4 7种自身抗体联合检测的阳性率比较 7种自身抗体联合检测在肺癌组的阳性率[61.11%(66/108)]明显高于健康人对照组[12.50%(12/96)]、肺部良性肺部疾病组[14.16%(16/120)]和其他癌症组[22.91%(52/227)]，差异均有统计学意义(χ2分别为50.885、56.341和46.812，P均<0.01)。肺部良性疾病组阳性率与健康人对照组间差异无统计学意义(χ2=0.033，P=0.896)。其他癌症组阳性率明显高于健康人对照组(χ2=4.600，P=0.032)和肺部良性疾病组(χ2=4.567，P=0.033)。

3 讨论

本研究结果显示，肺癌患者血清7种自身抗体水平均明显高于健康人对照组、肺部良性疾病组和其他癌症组，这与Chapman等[9]的研究结果较为一致，表明各自身抗体在非肺癌人群血清中含量较低，能很好地区分肺癌患者和非肺癌人群。此外，其他癌症组7种自身抗体水平较健康人对照组和肺部良性疾病组均升高。这与7种自身抗体联合检测在肺癌组阳性率最高，且其他癌症组阳性率高于肺部良性疾病组和健康人对照组的结果一致。提示所选用的自身抗体可能在其他癌症患者体内也存在。如p53抗体的产生与多种癌症的发生密切相关[10]，SOX2抗体可见于肝癌[11]，PGP9.5抗体可见于结直肠癌[12]，MAGE-A被证实与肺癌高度相关[13]。

在自身抗体单项检测中,各自身抗体敏感性低，诊断效能不佳。7种自身抗体联合检测特异性(89.80%)虽有所下降，但敏感性(62.00%)和AUCROC(0.769)明显升高，提示7种自身抗体联合检测可有效提高诊断效能。Wang等[4]采用5种自身抗体联合检测肺癌的诊断效能较本研究结果明显偏低。而Dai等[14]报道的7种自身抗体联合检测的诊断效能优于本研究。原因可能与所选抗体谱不同、研究对象存在地域和人群差异、检测方法不相同等因素有关。

将肺癌患者按不同临床特征进行分组分层，计算7种自身抗体联合检测在肺癌患者不同年龄段、不同性别、不同病理类型和不同临床分期中的阳性率均无明显区别(P均<0.05)，提示自身抗体总体在不同分组间分布较均匀，Chapman等[9]也得出了相同结论。特别是不同分期肺癌患者间阳性率差异无统计学意义，说明自身抗体在肺癌早期甚至临床症状出现前即可升高而被检测到，这可能与免疫应答强大的生物信号放大作用有关。因此，考虑将自身抗体联合检测作为肺癌早期筛查和诊断的指标，能弥补传统肿瘤标志物对早期肺癌敏感性过低的缺点[15]。但本研究中小细胞肺癌、其他病理类型肺癌和Ⅰ～Ⅱ期肺癌患者样本量偏少，后续研究可延长标本收集时间以增大样本量。

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(本文编辑：许晓蒙)

Clinical significance of seven autoantibodies determination in the diagnosis of lung cancer

ZHAOJuan,LIUNing,GUOJing-jing,CHENWei,ZHONGYi-ming,LIUWen-en

(DepartmentofClinicalLaboratory,XiangyaHospital,CentralSouthUniversity,Changsha410008,Hunan,China)

Objective To investigate the diagnostic value of seven tumour-associated autoantibodies, including p53, PGP9.5, SOX2, GAGE7, GBU4-5, MAGE A1 and CAGE autoantibodies, in the newly diagnosed patients with lung cancer. Methods A total of 108 patients with newly diagnosed lung cancer, 120 with benign lung diseases, 227 with other cancers and 96 healthy controls were enrolled in the study. Their serum levels of seven autoantibodies were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The ROC curve was drawn and used to analyze their diagnostic efficiency for lung cancer. The diagnostic value of the combination of seven autoantibodies in different groups was also compared. Results The serum levels of seven autoantibodies in lung cancer patients were significantly higher than those in the patients with benign lung diseases or other cancers and healthy controls (P<0.05). The sensitivity, specificity and AUCROCof the combination of seven autoantibodies in the preliminary diagnosis of lung cancer were 62.00%, 89.80% and 0.769, respectively, and its sensitivity and AUCROCwere higher than those of single autoantibody. The positive rate of the combination of seven autoantibodies in lung cancer patients was significantly higher than those in healthy controls (χ2=50.885,P<0.01) and the patients with benign lung diseases (χ2=56.341,P<0.01) or other cancers (χ2=46.812,P<0.01). Conclusion The combination detection of seven autoantibodies, including p53, PGP9.5, SOX2, GAGE7, GBU4-5, MAGE A1 and CAGE, may serve as potential markers for the diagnosis of lung cancer.

autoantibody; lung cancer; diagnostic value

10.13602/j.cnki.jcls.2017.05.02

国家自然科学基金(81672066)。

赵娟，1991年生，女，硕士研究生，主要从事实验方法评价与微生物学研究。

刘文恩，教授，博士，博士研究生导师，E-mail:Wenenliu@163.com。

R734.2

A

2017-03-22)