不同抗凝剂浓度及最佳抗凝剂不同放置时间对血细胞参数的影响

张京霞 郑红琴

(登封市妇幼保健院检验科，河南 登封 452470)

不同抗凝剂浓度及最佳抗凝剂不同放置时间对血细胞参数的影响

张京霞 郑红琴

(登封市妇幼保健院检验科，河南 登封 452470)

目的：探讨不同抗凝剂浓度及最佳抗凝剂不同放置时间对血细胞参数的影响。方法：选择2015年12月于我院行健康体检的35例健康成年人的静脉血为研究标本，分别制成抗凝浓度为2.4 mg·mL-1、3.6 mg·mL-1、4.8 mg·mL-1的A、B、C三组血液检测标本。采用全自动血细胞分析仪进行检测，其中B组放置时间延长至15 min再次检测。比较三组血细胞参数变化情况，分析不同放置时间血细胞参数。结果：A组、B组、C组以及B组不同放置时间血细胞参数之间均无明显差异(P>0.05)。结论：EDTA-K2浓度在接近标准浓度时，或放置时间在15 min以内，抗凝剂的使用浓度与放置时间对血细胞参数均无明显影响。

抗凝剂；放置时间；血细胞参数

血液分析是临床医学常规检验项目之一，在评估机体健康状态、诊断疾病方面具有重要意义[1]。由于客观因素的影响，不少患者标本无法得到及时检查，故临床普遍应用抗凝剂以确保检验结果[2]。乙二胺四乙酸盐(Ethylene diamine tetraacetie acid，EDTA-K2)是临床公认为抗凝效果佳、对血细胞参数影响较小的一种抗凝剂。但抗凝剂浓度及放置时间等因素可能对血细胞检验结果造成不同的影响[3]。因此，本研究采用全血细胞分析仪对EDTA-K2抗凝标本进行检验，探讨抗凝剂浓度及放置时间对血细胞参数的影响，现报道如下。

1 临床资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年12月于我院行健康体检者35例，男19例，女16例；年龄20-58岁，平均年龄41.52±3.83岁。所有受检者均知晓本研究，并自愿接受研究内容，均于入组后签署知情同意书。排除患有影响血液循环及相关性疾病者。

1.2 方法

1.2.1 仪器

选用产自日本的希森美康XT-1800血细胞分析仪以及希森美康配套试剂、定标液、质控物等。

1.2.2 制备抗凝剂

分别称量240 mg、360 mg、480 mg EDTA-K2，将不同剂量EDTA-K2各自加至5 mL蒸馏水内，从而制成浓度为48 mg·mL-1、72 mg·mL-1、96 mg·mL-1的EDTA-K2溶液。所有患者均抽取6 mL静脉血，分别置入A组、B组、C组试管，各2 mL。三组试管均含有100 μL的EDTA-K2溶液，其中A组试管内EDTA-K2浓度为48 mg·mL-1、B组为72 mg·mL-1、C组为96 mg·mL-1，最终A组试管内EDTA-K2抗凝浓度为2.4 mg·mL-1、B组为3.6 mg·mL-1、C组为4.8 mg·mL-1。3组标本均放置5 min时采用全血细胞分析仪进行检测，另选B组标本于放置15 min时再次检测，详细记录测定结果。

1.3 观察指标

采用电阻抗法检测白细胞(White blood cell，WBC)、红细胞(Red blood cell，RBC)、血红蛋白(Hemoglobin，HGB)、血小板(Platelet，PLT)、淋巴细胞(Lymphocyte，LYM)等血细胞参数，具体方法如下：采用等渗电解质溶液对细胞悬液进行稀释，后加入不导电容器内，插入小孔管，小孔管内外各有一个电极，接通电源产生稳定电流，细胞悬液经小孔管外侧流向小孔管内部，增高小孔感应区电阻，改变瞬间电压，产生脉冲信号。脉冲振幅与细胞体积正相关，脉冲数量则反映细胞数量，进而获得血细胞参数。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 三组血细胞参数比较

三组间血细胞参数相比，无显著差异(P>0.05)，见表1。

2.2B组不同时间血细胞参数比较

最佳浓度抗凝剂不同时间放置时间血细胞参数相比，无明显差异(P>0.05)，见表2。

表1 三组血细胞参数比较

表2 B组不同时间血细胞参数比较±s)

3 讨论

血液分析作为临床常规的一项检测环节，其检测结果的准确性与患者及时诊断与治疗紧密相关。样本分析的质量把控是减少检测误差的重要保证，故如何控制好样本分析前阶段质量已成为临床关注的重点[4]。EDTA-K2与血液中钙离子亲和力较强，结合钙离子后，可经膜离子通道到达血小板膜内，阻止凝血酶原转化为凝血酶，最终达到血液抗凝的目的[5-6]。本研究即通过观察EDTA-K2不同浓度及不同放置时间对血细胞参数的影响，探讨检验血液指标最佳的抗凝剂浓度及放置时间。

目前，全血分析仪已广泛应用于临床检验血液参数，使血液分析的准确性得到显著提升。但由于采血过程受护士主观因素影响，采血量往往控制欠佳，过多的采血量容易导致EDTA-K2比例失调，从而造成血液标本轻微凝血，严重者可堵塞分析仪管道或影响检测结果的准确性。而采血量过少亦可因血液标本稀释而降低检验结果准确性[7-8]。本研究中，A组、B组、C组试管分别采用不同浓度抗凝剂，三组间WBC、RBC、HGB、PLT等血细胞参数均无显著差异，表明在浓度为1-3 mg·mL-1范围内，EDTA-K2浓度的变化对血细胞参数并无明显影响。本研究采用电阻抗法检测血细胞参数，其中PLT与RBC检测时，二次稀释检测样本后进入检测单元，形成脉冲信号，而通过小孔的细胞数与脉冲数相近，细胞体积与脉冲幅度正相关，故EDTA-K2浓度未低至造成细胞破裂时，PLT与RBC计数未受影响[9]。因此该法检测结果具备良好的准确性，可避免因检测方法的不同对血细胞水平造成影响。同时，由于血样本量与抗凝剂相比为40:1，可忽略抗凝剂对血液的稀释作用。另有研究显示，EDTA加入血液后，可改变WBC形态，随着浓度的增加与放置时间的延长，可造成部分中性粒细胞肿胀、崩解，形成碎片。而本研究中不同浓度组间WBC计数无明显差异，可能与研究中所采用的EDTA-K2浓度与标准浓度较为接近，且检测时间较短，WBC的变化尚未显现。另外，本研究尚对B组进行15 min的检测，仍未发现血细胞参数存在明显差异。表明在该时间内，适合检测血细胞相关参数[10]。因此，抗凝剂浓度为2.4 mg·mL-1～4.8mg·mL-1，放置5-15 min时均可准确检测血液参数，从而获得相对理想的检测结果。由于本研究检测条件受限，关于EDTA-K2浓度及放置时间对血细胞参数的影响仍需深入探讨，后期研究中可适当增加抗凝剂浓度范围，延长放置时间，以进一步完善研究结果。

综上所述，EDTA-K2浓度在接近标准浓度时，其浓度的变化对血细胞参数无明显影响，同时标准浓度下，放置15 min检测对血细胞检测结果的影响较小。

1 伍亚云,李霞,郭建华,等. 乙二胺四乙酸二钾浓度对红细胞形态影响因素的探讨[J]. 国际检验医学杂志, 2014, 35(13): 1806-1806,1817.

2 黄亮,梁瑜金. 抗凝剂对血小板计数结果的影响分析[J]. 国际检验医学杂志, 2015, 36(8): 1104-1105.

3 徐全中,王伟佳,阚丽娟,等. 不同抗凝剂、不同保存温度和保存时间对降钙素原检测的影响[J]. 检验医学, 2013, 28(7): 639-642.

4 王明慧,杨涛. 静脉血标本放置时间对血细胞分析结果的影响[J]. 中国基层医药, 2014, 21(16): 2524-2526.

5 王洪,魏杰,王吉星,等. 两种抗凝剂对实验用小型猪血液生理指标的影响[J]. 中国比较医学杂志, 2014, 24(4): 28-32.

6 龚卫锋,毛慧. 血液透析患者生化项目检测中抗凝剂的使用分析[J]. 山西医科大学学报, 2013, 44(7): 554-556.

7 刘学斌,邹雪松,黄冬梅,等. 两种抗凝剂对血小板的影响因素临床分析[J]. 河北医学, 2013, 19(10): 1595-1597.

8 马科,左路广,常晓彤,等. 体液添加EDTA-K2抗凝剂对细胞计数的影响[J]. 医疗卫生装备, 2015, 36(4): 91-93.

9 刘晓婷,向代军,徐菡,等. 迈瑞BC-5000全自动血细胞分析仪性能的可靠性研究[J]. 中国医学装备, 2016, 13(4): 36-40.

10颜宇飞,张庆五. EDTA-K2抗凝剂对外周血淋巴细胞形态的影响[J]. 检验医学, 2015, 30(3): 287-288.

Different anticoagulant concentration and anticoagulant effects of different placement time of blood cell parameters

Zhang Jing-xia, Zheng Hong-qin

(Laboratory of Dengfeng Maternal and Child Care Service Centre, Henan Dengfeng 452470)

Objective：To study the different anticoagulant concentration and anticoagulant effects of different placement time of blood cell parameters. Methods: The venous blood in 35 healthy adults in our hospital for health examination of December 2015 as study samples, were made from the anticoagulant concentration of 2.4 mg mL-1, 3.6mg mL-1, 4.8mg mL-1A, B, C three groups of blood samples. Automatic blood cell analyzer was used to detect the B group, and the time was extended to 15 min. The changes of blood cell parameters were compared between the three groups. Results: A group, B group, C group and B group had no significant difference in blood cell parameters (P<0.05). Conclusion: EDTA-K2 concentration towards the standard concentration, or placed in less than 15 min, use of anticoagulant concentration and keeping time on blood cell parameters were not significantly affected.

Anticoagulants; Time; Blood cell parameters

张京霞，女，主管技师，主要从事临床检验工作，Email：dfzhangjingxia@126.com。

2017-3-7)