透脓散对浅部化脓性炎症趋化因子补体5a、白三烯4的影响

石志强，班秀芬，李元奎，张小平，肖 成*

（1.内蒙古医科大学，呼和浩特 010110；2.内蒙古自治区中医医院，呼和浩特 010020）

透脓散对浅部化脓性炎症趋化因子补体5a、白三烯4的影响

石志强1，班秀芬1，李元奎1，张小平2，肖 成2*

（1.内蒙古医科大学，呼和浩特 010110；2.内蒙古自治区中医医院，呼和浩特 010020）

目的 研究透脓散对浅部化脓性炎症血中趋化因子补体5a（C5a）、白三烯4（LTB4）及局部愈合情况的影响，探讨透脓散扶正托毒的作用机理。方法 将Wistar大鼠分为病模对照组，透脓散高、中、低剂量组、头孢拉定组，采用金黄色葡萄球菌局部注射致大鼠背部浅部化脓性炎症模型，分别给予相应药物灌胃，观察脓肿大小及愈合情况，于3、6、9 d取血检测C5a、LTB4。结果 透脓散可使脓肿缩小，促进脓肿愈合；透脓散6 d小组能降低血C5a水平，9 d小组升高血C5a水平，且与头孢拉定组比较差异显著；透脓散3 d小组明显降低血LTB4水平，6 d小组与9 d小组可升高血LTB4水平，且与头孢拉定组比较差异显著。结论 透脓散能使浅部化脓性炎症缩小局限，加快愈合，并且可以影响血C5a、LTB4水平，具有双向调节作用。

透脓散；浅部化脓性炎症；愈合率；C5a；LTB4

Abstract: Objective To explore effect of Tounong powder on C5a, LTB4 and abscess healing in superficial purulent inflammation, and analyse its mechanism.Methods The wistar rats were divided into disease model control group, high, middle and low doses of Tounong powder groups, cefradine group, inject staphylococcus aureus into rat’s back with superficial purulent inflammation, the different groups rats were treated with different treatment.Observing the size and healing of abscess, taking blood sample to test C5a and LTB4 on the 3,6 and 9-day.Results Tounong powder can reduce the size of abscess and promote the healing of the abscess; 6-day group of the Tounong powder can reduce the C5a level, 9-day group of it increased C5a level, and the difference was significant between it and cefradine group; 3-day group of the Tounong powder can reduce the LTB4 level, 6-day group and 9-day group of the Tounong powder can increased the LTB4 level, the difference was significant between it and cefradine group.Conclusion Tounong powder can reduce the size of abscess, promote the healing of the abscess, and affect the blood C5a, LTB4 levels with dual regulation.

Keywords: Tounong powder; superficial purulent inflammation; healing rate; C5a; LTB4

托法是中医外科内治三大法则之一，适用于疮疡（狭义指发生于体表的化脓性疾病）的中期[1]，其中透托法代表方透脓散，由生黄芪、当归、川芎、穿山甲、皂角刺5味药物组成，包涵了“托”和“透”的治疗思想，可使脓肿早日成熟、破溃，病灶由深及浅，趋于局限，轻者吸收消散[2-3]。近年来，该方临床应用逐渐拓宽，除了广泛用于痈[4]、乳腺炎[5]与肛周脓肿[6]等外科浅部化脓性疾病外，还用于肝肾脓肿[7]、化脓性阑尾炎[1]及肺部感染[8]等内脏化脓性疾病，以及粉刺性乳痈[9]、急性胰腺炎[10]等，均取得了满意疗效。然而关于其作用机理研究甚少，这是需要迫切解决的问题，是中医学者发扬光大透托法乃至托法的重要任务。在化脓性炎症反应中，血液中的白细胞发生边集、粘着和游出，之后在趋化因子的作用下到达炎症局部而发挥吞噬和免疫作用，构成炎症反应的主要防御环节[11]。因此，本实验通过观察透脓散对皮下脓肿模型大鼠的外周血白细胞趋化因子C5a、LTB4的影响，以及对局部脓肿愈合的作用，来探讨托法扶正托毒的作用机理。

1 材料

1.1 实验动物 SPF级Wistar大鼠128只，雄性，体质量（200±20）g，购于中国人民解放军军事科学院实验动物中心，动物饲养许可证：2012-004。

1.2 药物与试剂 透脓散（外科正宗方,生黄芪12 g，当归6 g，穿山甲3 g，皂角刺5 g，川芎9 g），购于北京同仁堂呼和浩特药店；头孢拉定胶囊（广州白云山制药股份有限公司，批号：2150010）；金黄色葡萄球菌冻干粉（26003-5a25），培养为3代工作用菌；Rat LTB4 ELISA Kit（DRE 20553，批号201511）、Rat C5a ELISA Kit（DRE 20418，批号201511），均购于武汉基因美生物科技有限公司。

1.3 主要仪器 TECAN Infinnite M200酶标仪（瑞士TECAN公司），SIGMA 3-30 k离心机（德国sigma），DG3090型自动洗板机（华东电子集团医疗装备有限责任公司），SPX-150生化培养箱（上海申贤恒温设备厂）。

2 方法

2.1 动物造模与分组 按大鼠体质量由轻到重编号，将大鼠随机分成6组，即病模对照组24只、透脓散高剂量组24只、透脓散中剂量组24只、透脓散低剂量组24只、头孢拉定组24只、空白对照组8只，除空白对照组外，每组又分3小组，即3、6、9 d 小组，每小组8只。除空白组外，其他适应性饲养5 d后，各实验组大鼠背部正中3 cm2区域剪毛，第2天开始在背部剪毛区域正中注射金黄色葡萄球菌悬液6×109/mL，连续3 d[12]。注射部位出现明显红肿凸起、触痛、有脓液为造模成功。

2.2 给药方法 将透脓散煎煮2次，过滤后水浴蒸发浓缩，分别调整含药浓度为1.2、0.6、0.3/mL（高、中、低浓度），造模成功后，对应给予透脓散高剂量组、中剂量组、低剂量组；每只大鼠灌胃2 mL/(200 g·d) ，2次/d ，其中3 d小组灌服3 d，6、9 d小组依此类推。头孢拉定组每只大鼠灌服浓度18 mg/mL的头孢拉定液2 mL/(200g·d) ，2次/d ，3、6、9 d小组灌胃同透脓散组。病模对照组每只大鼠灌服生理盐水2 mL/(200 g·d) ，3、6、9 d小组灌胃同透脓散组。空白组正常饮水，喂食。

2.3 观察指标与检测方法

2.3.1 局部脓肿与一般状况观察 每日测量大鼠背部脓肿大小变化，观察大鼠精神状态、活动、毛色、尾巴颜色，测量肛温、体质量。

2.3.2 血液采集与检测方法 各实验组造模成功后给药，分别在3、6、9 d，将各组对应小组大鼠心脏取血，离心取血浆置 – 20 ℃冰箱内贮存备测。以Rat LTB4 ELISA Kit、Rat C5a ELISA Kit用酶联免疫吸附法测定LTB4、C5a。

2.4 统计学方法 数据采用SPSS 16.0软件进行统计分析；计量资料为正态分布时采用均数±标准差（x± s ）进行描述，方差齐时，各组资料间的比较采用方差分析；方差不齐时，采用秩和检验。计数资料（非反应变量有序）采用x2检验及Fisher确切概率法。

3 结果

3.1 6 d 脓肿直径比较 见表1。

表1 6 d脓肿直径比较(x± s ， n=16)

3.2 9 d脓肿愈合情况比较 见表2。

表 2 9 d脓肿愈合情况

3.3 对大鼠血C5a水平的影响 见表3。

3.4 对大鼠血LTB4的影响 见表4。

表3 对大鼠血C5a水平的影响(x± s ，n=8) ng/mL

表4 对大鼠血LTB4的影响(x± s ，n=8) ng/mL

4 讨论

研究中，通过观察大鼠疮疡模型的脓肿大小、愈合情况，可以直接反映透脓散的治疗作用。各实验组大多给药后6 d红肿、触痛消失，脓肿明显变小而局限于结痂处，与病模对照组比较，透脓散高中低剂量组均能使脓肿缩小局限，且透脓散高剂量组作用较头孢拉定组显著。之后陆续痂皮翘起，脱落愈合，透脓散高中剂量组较病模对照组能明显促进脓肿愈合，但与头孢拉定组比较无差异。实验结果证实了透脓散可使脓肿趋于局限、早日愈合。

C5a具有很强的过敏毒素和趋化作用，可使肥大细胞、中性粒细胞等释放组胺、白三烯、前列腺素等炎症介质，又可趋化中性粒细胞与单核细胞。本研究中，与病模对照6 d小组比较，血中C5a水平降低，而与病模对照9 d小组比较，透脓散组血中C5a水平升高，说明透脓散可影响炎症C5a水平，调节其高低。

白三烯主要来源于活化中性粒细胞的溶酶体，参与炎症反应，LTB4同时又能趋化中性粒细胞[12]。透脓散组与病模对照组3 d小组比较，能降低大鼠血中LTB4水平，而与病模对照6 d小组、9 d小组比较，则可升高血中LTB4水平。揭示透脓散可减轻早期炎症反应，避免过度损伤机体；脓肿中后期炎症减轻，在炎症介质低水平的基础上，透脓散又可升高LTB4，同样可以促进中性粒细胞趋化吞噬坏死组织，加快修复。且与头孢拉定组比较差异显著。

综上，透脓散能使浅部化脓性炎症缩小局限，加快愈合。并且可以影响血中C5a、LTB4水平，具有双向调节作用，炎症早中期可降低C5a、LTB4水平，炎症中后期可升高C5a、LTB4水平。中药具有多靶点、多途径的作用特点，其他作用机理有待进一步研究。

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Effect of Tounong powder on chemotactic factor C5a and LTB4 in superficial purulent inflammation

SHI Zhiqiang1, BAN Xiufen1, LI Yuankui1, ZHANG Xiaoping2, XIAO Cheng2*
(1.Inner Mongolia Medical University, Huhhot 010110, China;2.Inner Mongolia TCM Hospital, Huhhot 010020, China）

R288.5

A

2095-6258(2017)05-0703-03

2016-09-20）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.05.005

国家自然科学基金项目（81660792）;内蒙古自治区自然科学基金资助项目（2014MS0838）;内蒙古自治区卫生和计划生育委员会资助项目（201301020）。

石志强（1980 -），男，硕士，副教授，主要从事中医外科学托法、中医外用药药效学研究。

*通信作者：肖 成，男，博士，主任医师，电子信箱- xiaochengy@126.com