海棠凝胶家兔单次皮肤给药毒性实验

周继刚 付婷婷 汪鋆植 王海燕 容丽霞

(1. 三峡大学 中医临床医学院(宜昌市中医医院)，湖北 宜昌 443003；2.三峡大学 中医临床医学院，湖北 宜昌 443002；3. 天然产物研究与利用湖北省重点实验室(三峡大学)，湖北 宜昌 443002；4.湖北省药物安全性评价中心，武汉 430061)

海棠凝胶家兔单次皮肤给药毒性实验

周继刚1付婷婷2汪鋆植3王海燕1容丽霞4

(1. 三峡大学 中医临床医学院(宜昌市中医医院)，湖北 宜昌 443003；2.三峡大学 中医临床医学院，湖北 宜昌 443002；3. 天然产物研究与利用湖北省重点实验室(三峡大学)，湖北 宜昌 443002；4.湖北省药物安全性评价中心，武汉 430061)

通过家兔皮肤急性毒性实验，初步评价海棠凝胶对动物完整皮肤及破损皮肤所产生的毒性反应，为后续毒性试验和临床试验提供参考信息．采用最大给药量法，家兔16只，分为4组，即海棠凝胶完整皮肤组及破损皮肤组、赋形剂完整皮肤组及破损皮肤组，每组4只(♀、♂各半)，给药前24 h用电推剪推去背部两侧毛(约150 cm2)，破损皮肤制作：在脱毛区用9号针头划“#”字状，以划破表皮渗血为度，给药量均为2 g/kg凝胶，给药组主药剂量为0.05 g/kg，将供试品和赋形剂涂于脱毛区，用一层称样纸覆盖及兔固定衣固定，并用兔脖套将兔固定，24 h后用生理盐水洗去受试物及赋形剂，仔细观察和记录动物出现的毒性反应情况，连续观察14 d，并记录体重和进食量情况．结果表明：海棠凝胶完整皮肤组及破损皮肤组无动物死亡，动物体重、进食量与赋形剂组比较无显著性差异(P>0.05)，呼吸、自主活动等均未见中毒反应，动物处死后经对各组家兔系统剖检，对皮肤给药部位及其它组织脏器进行观察，未见明显病理性改变．结论：海棠凝胶单次皮肤给药2 g/kg凝胶(主药剂量为0.05 g/kg)，家兔未见明显毒性反应．

海棠凝胶； 单次给药； 毒性实验

海棠凝胶已用于临床多年，由三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室、宜昌市中医医院联合制备而成，其成分主要由湖北海棠提取物多酚、根皮苷及白芨多糖组成．李楠[1]通过对DPPH、ABTS自由基清除能力和对铁离子还原能力的测定，以及对牛血清白蛋白氧化损伤的保护作用研究，来评定海棠提取物多酚的体外抗氧化活性强弱，结果表明:海棠提取物多酚具有较强的抗氧化活性作用；另外，通过测试海棠提取物对大肠杆菌、粪链球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌作用及其最小抑菌浓度，结果表明：海棠多酚具有良好的抑菌活性．张宏岐等[2]利用DPPH自由基、羟基自由基的反应体系，检测湖北海棠提取物的体外抗氧化活性，其中根皮苷消除DPPH自由基的EC50是0.75 mg/ml，50%乙醇洗脱物消除DPPH自由基的 EC50是0.38 mg/ml，20%乙醇洗脱物消除DPPH自由基的EC50是1.2 mg/ml，结果表明湖北海棠提取物根皮苷、20%乙醇洗脱物、50%乙醇洗脱物、总提物都有抑制羟基自由基产生的能力，其中根皮苷的抗氧化活性最强．陈德利等[3]通过对白芨的研究表明白芨能促进角质形成细胞的游走，加速创伤愈合．多年临床观察结果也表明，海棠凝胶能有效治疗皮肤干燥、裂口导致的出血、疼痛，用于治疗皮肤皲裂症、慢性湿疹、手足癣等皮肤病．为了对其安全性作出客观、科学的评价，进一步指导临床用药，本文对海棠凝胶的的皮肤过敏性实验进行研究，为其临床安全应用提供药理学依据．

1 材 料

1.1 海棠凝胶

由宜昌市中医医院制剂室提供，为黄棕色稠厚固体，批号：20121101，含量或纯度：2.5%，规格：20 g/瓶，避光、密封、阴凉处保存．

海棠凝胶空白(赋形剂) 由宜昌市中医医院制剂室提供，批号：20121101，纯度、规格、保存同上．

1.2 动物

日本大耳白兔，普通级，购入20只，实验用16只，雌雄各半，购入年龄为110 d左右，体重为2.12～2.66 kg，实验用年龄为120 d左右，体重为2.5～2.85 kg，均由河南康达实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(豫)2011-0001，实验动物使用许可证号：SYXK(鄂)2009-0023．每天给实验家兔喂兔生长繁殖颗粒饲料，饲料购于北京科澳协力饲料有限公司，批号为13024111，自由饮用净化水．实验室温度为20～25.4℃，相对湿度为37%～70%，光照为12 h明暗交替．

2 方 法

2.1 实验方法

家兔16只，于给药前24 h家兔背部去毛，范围约相当于体表面积的10%左右(约150 cm2)，将家兔分为4组，每组4只，一组为供试品完整皮肤，二组为供试品破损皮肤，三组为赋形剂完整皮肤，四组为赋形剂破损皮肤．破损皮肤的制作：在脱毛区用9号针头划“#”字状，以划破表皮渗血为度．将供试品和赋形剂按2 g/kg涂于脱毛区，然后用一层称样纸覆盖，用无刺激性胶布或绷带固定，再加兔脖套固定和兔固定衣，24 h后用生理盐水洗去受试物及赋形剂，药后每日观察，连续14d．给药后观察动物的全身中毒表现和死亡情况，包括动物体重、皮毛、眼睛和粘膜的变化，呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等的变化．若在实验过程中有死亡动物则进行尸检，及实验结束时全部动物处死进行大体解剖，当肉眼可见病变时，则进行病理学检查．

2.2 观察指标与观察频度

2.2.1 一般临床症状观察

给药后连续观察6 h，以后每天观察一次，记录皮毛、眼睛和粘膜的变化、自主活动等中毒表现．

2.2.2 体重观察

给药前和给药后3、7、10、14 d称体重．

2.2.3 食量观察

给药前和给药后7、14 d称食量，共称3次．

2.3 统计学方法

体重及进食量实验数据采用SPSS17.0统计软件进行统计，采用单因素方差t检验分析．

3 结 果

3.1 一般症状观察

海棠凝胶及赋形剂完整皮肤组和破损皮肤组经家兔皮肤2g/kg凝胶给药后，无动物死亡，体态、呼吸、自主活动等也未见异常．

3.2 体重观察

海棠凝胶完整皮肤组和破损皮肤组的体重变化情况与赋形剂完整皮肤组和破损皮肤组相近，经统计学处理无显著性差异(P>0.05)，实验结果见表1．

表1 对家兔皮肤给药的体重变化情况

*与赋形剂组比较：P>0.05.

3.3 食量观察

海棠凝胶完整皮肤组、破损皮肤组的进食量与赋形剂完整皮肤组及破损皮肤组相近，经统计学处理无显著性差异(P>0.05)，结果见表2．

表2 对家兔皮肤给药进食量变化情况

*与赋形剂组比较：P>0.05.

3.4 肉眼尸检

给药后14 d，处死家兔，对家兔的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、前列腺、子宫、卵巢、脑、骨髓、甲状腺、乳腺、膀胱、胰腺、胆囊、胃、直肠、十二指肠、气管、食管、唾液腺、主动脉、坐骨神经、淋巴结、给药部位眼睛等主要脏器进行全面肉眼尸检，结果海棠凝胶及赋形剂完整皮肤组和破损皮肤组家兔肉眼观察全身组织未见明显病变．

3.5 病理检查报告

将16只家兔全部送检，经对各组家兔系统剖检，对皮肤给药部位及其它组织脏器进行观察，未见明显病理性改变．

4 讨 论

海棠凝胶及赋形剂经家兔完整皮肤和破损皮肤单次给药2 g/kg凝胶(主药剂量为0.05 g/kg)，药后连续观察14 d，无动物死亡，体态、呼吸、自主活动等也未见异常；海棠凝胶完整皮肤组、破损皮肤组的体重、进食量变化情况与赋形剂完整皮肤组、破损皮肤组比较，经统计学处理无显著性差异；观察期结束全部动物进行大体解剖，海棠凝胶及赋形剂完整皮肤组和破损皮肤组家兔肉眼观察全身组织未见明显病变，病检结果正常，表明各组动物均未见明显毒性反应．

综上所述，海棠凝胶的毒性实验是按国家食品药品监督管理局编写“新药(西药)临床前研究指导原则”[4]和化学药物急性毒性试验技术指导原则[5]设计的．在本试验条件下，2.5%海棠凝胶单次皮肤给药2 g/kg凝胶(主药剂量为0.05 g/kg)，家兔未见明显毒性反应，其用药安全可靠．

[1] 李 楠.海棠多酚的种类及其体外抗氧化活性和抑菌活性研究[D]．杨凌：西北农林科技大学，2014．

[2] 张宏岐，汪鋆植，邹 坤，等．湖北海棠提取物的体外抗氧化活性研究[J]．食品科技，2008，33(11)：183-186．

[3] 陈德利，施伟民，徐 倩，等．中药白芨促进角质形成细胞的游走[J]．中华皮肤科杂志，1999，32(3):161-162．

[4] 国家食品药品监督管理局.新药(西药)临床前研究指导原则汇编[S]．1993：204-205．

[5] 国家食品药品监督管理局.化学药物急性毒性试验技术指导原则[S]．2005．

ToxicitytestofBegoniaGelatinRabbitsinSingleDermalAdministration

Zhou Jigang1Fu Tingting2Wang Junzhi3Wang Haiyan1Rong Lixia4

(1. Chinese Medicine Hospital & Yichang City Traditional Chinese Medicine, China Three Gorges Univ., Yichang 443003, China; 2. Traditional Chinese Medicine College, China Three Gorges Univ., Yichang 443002, China; 3. Key Labotory of Natural Products Development & Research of Hubei Province, China Three Gorges Univ., Yichang 443002, China; 4. Hubei Province Drug Safety Evaluation Center, WuHan 430061, China)

Through the acute toxicity test of rabbits, the toxicity of Begonia gel to the skin and damaged skin of the animals was evaluated, which provided reference information for the subsequent toxicity test and clinical trial. A total of 16 rabbits were divided into four groups: namely Begonia gel complete skin group and damaged skin group, excipient complete skin group and damaged skin group; each group has 4 rabbits (♀, ♂ half). Before the administration of 24 hours, using the clippers to push the back of the hair on both sides of the hair (about 150 cm2), damaged skin production：in the hair removal area with #9 needle plan “#” shape to break the epidermal oozing for the degree of administration for amount of 2g/kg gel, the main dose of 0.05 g/kg, the test sample and excipients applied to the hair removal area, covered with a layer of paper and fixed rabbit fixed clothing, and rabbit neck The rabbits were fixed overnight. After 24 hours, the test substance and excipients were washed with physiological saline. The toxicities of the animals were observed and recorded; and the weight and food intake were recorded for 14 days. The results show that there was no significant difference in animal body weight, food intake and excipient group (P>0.05). There was no poisoning reaction in the respiratory and autonomic activities. After the animals were sacrificed, the animals were sacrificed. The septum of the rabbits in each group was examined; and the organs of the skin and other tissues were observed. No obvious pathological changes were observed. It is concluded that the Begonia gel single skin administration 2g/kg gel (the main dose of 0.05g/kg), no significant toxic effects in rabbits.

Begonia gelatin; single dose; toxicity test

10.13393/j.cnki.issn.1672-948X.2017.05.021

2017-03-29

湖北省科技厅重大专项(项目编号：2016ABA107)

周继刚(1958-)，男，主任医师，教授，研究方向为中医药防治皮肤病．E-mail：71094314@qq.com

R285

A

1672-948X(2017)05-0106-03

[责任编辑周文凯]