连云港市规模猪场新生仔猪腹泻病因分析

单玉平，李 锋，邓建新，洪 枫，闫 艳，黄继康，周庆雨，史 慧，王韶山，朱国强

（1.江苏省连云港市畜牧兽医站，连云港222001；2. 江苏省盐城市滨海县畜牧兽医站，滨海224500；3.江苏省徐州市铜山县禽病门诊部，徐州221116；4.江苏省连云港市赣榆区畜牧兽医站，连云港222100；5. 江苏省连云港市灌云县畜牧兽医站，连云港222200；6.正大集团（中国区）饲料技术线，连云港222047；7.江苏东海老淮猪产业发展有限公司，东海222300；8.扬州大学兽医学院，扬州 225009；9. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州225009）

连云港市规模猪场新生仔猪腹泻病因分析

单玉平1，李 锋1，邓建新2，洪 枫3，闫 艳4，黄继康5，周庆雨6，史 慧1，王韶山7，朱国强8,9

（1.江苏省连云港市畜牧兽医站，连云港222001；2. 江苏省盐城市滨海县畜牧兽医站，滨海224500；3.江苏省徐州市铜山县禽病门诊部，徐州221116；4.江苏省连云港市赣榆区畜牧兽医站，连云港222100；5. 江苏省连云港市灌云县畜牧兽医站，连云港222200；6.正大集团（中国区）饲料技术线，连云港222047；7.江苏东海老淮猪产业发展有限公司，东海222300；8.扬州大学兽医学院，扬州 225009；9. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州225009）

为了有效防控连云港市规模猪场新生仔猪腹泻，本研究对其辖区内50头以上的规模猪场进行了流行病学调查和主要病因分析。结果显示：致病性大肠杆菌是主要的细菌病病原体，猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis of pigs，TGEV）、猪轮状病毒（Porcine Rotavirus, PROV）为主要的病毒病病原体。上述研究为连云港市甚至国内其他猪场的新生仔猪腹泻的防控提供了科学依据。

新生仔猪腹泻；病因分析

新生仔猪腹泻是世界各地猪场常见疾病[1]，对于本病的发病机制，病因复杂且尚无确切的定论。早期报道中致病性大肠杆菌是被研究最多的病原，但大肠杆菌并不是新生仔猪腹泻的唯一病原[2-5]，Morin等[6]在1983年对加拿大魁北克省325次腹泻暴发中的749头仔猪的调查发现，病毒病占据60%，细菌病占23%，其中传染性胃肠炎病毒占据52%，大肠杆菌病占据22.4%。近些年来，新生仔猪腹泻病的病因变得越来越复杂，如从泰国新生仔猪腹泻病例中分离到1株具有多重药物耐药的产气荚膜梭菌[7]；近年来在中国、美国、泰国等全球范围内猪流行性腹泻也给猪养殖业造成了很大损失[8-10]；在丹麦，猪群出现了新的疫病综合征，当时并未有相对应的疫苗和及时控制[11]。值得注意的是，混合和并发感染更是加剧了本病预防和控制的难度，在南美洲的巴西，发现了多重轮状病毒感染的仔猪腹泻[12]。

近几年来，江苏省连云港市及周边地区大部分规模猪场都不同程度地发生以初生至10日龄哺乳仔猪为主的猪腹泻病，该病在一个猪场可连续多批次发生，流行可延绵半年之久，无明显季节性，发病率50%以上，死亡率达到80%以上，给养猪业带来了极大损失。为了解和掌握连云港市规模猪场新生仔猪腹泻发生、发展，综合分析病因和疫情发展趋势，本研究开展了规模猪场新生仔猪腹泻流行病学调查，对相关致泻病原体进行了检测和分析。

1 材料与方法

1.1 材料

以连云港市辖区内饲养量50头以上的规模猪场为调查对象，发病猪体温在40℃左右，部分病猪体温正常，腹泻初期多保留吮乳欲，脱水发生较快，眼球下陷明显，一般不见DIC（弥漫性血管内凝血）过程，病程约3～5 d；仔猪多在出生后1～3 d先呕吐、后拉稀并很快死亡，粪便多呈黄色稀粥样，呕吐物为黄白色乳凝块与胃液。

1.2 调查方法

猪瘟、高致病性繁殖与呼吸道综合征病毒血清学检测试剂盒购自韩国安捷动物诊断试剂有限公司；传染性胃肠炎、流行性腹泻、轮状病毒、圆环病毒血清学检测试剂盒购自深圳芬德生物技术有限公司；猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒病原学试剂盒购自上海拜诺生物科技有限公司；细菌鉴定所用试剂购自天津生物芯片技术有限责任公司；并按照大肠杆菌O抗原定型血清诊断液使用说明书进行和判定结果。

1.2.1 调查方法 通过发放《连云港市规模猪场新生仔猪腹泻调查表》，座谈、走访、查看养殖档案等形式进行调查，主要调查规模猪场、县区畜牧兽医门诊、动物诊疗机构和乡村防疫员，了解近2年来的新生仔猪发病情况，调查内容主要涵盖临床症状、圈舍条件、温度与湿度控制情况、环境卫生及饲养管理条件、营养水平等。

1.2.2 病原体检测 及时采集发病仔猪腹泻样品、死亡仔猪的小肠及其内容物、死亡仔猪的组织样品（肝、脾、肾、肠系膜淋巴结等）、母猪的粪便、血样等，并将采集样品进行实验室处理后，通过血清学检测、细菌培养分离鉴定、病原分离鉴定等方法，查找分析病因。

2 结果与讨论

2.1 引起新生仔猪腹泻病的可能因素

通过填写调查表、座谈、查看养殖档案、走访等形式初步了解近2年来全市规模猪场新生仔猪腹泻发病、死亡、免疫、治疗、防控等情况，本研究统计汇总了新生仔猪腹泻病影响可能因素，见表1。本研究共调查了全市3县3区1026个发病规模养殖场，母猪9865头，新生仔猪29 378头，其中发病严重的地区有赣榆区、东海县和灌南县，发病率为61.7%（326／528），死亡率为85.4%（2630／3478）。新生仔猪腹泻病因复杂，是多因素共同作用的结果，因此要认真分析原因，采取综合性的防控措施，减少新生仔猪腹泻的发生。

2.2 病原体检测

2.2.1 血清学检测 利用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测试剂盒检测发病仔猪及其同群母猪中猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒、轮状病毒、圆环病毒等病毒的抗体含量，其中发病仔猪猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒、轮状病毒、圆环病毒抗体量合格率分别为77.5%（372／480）、89.3%（429／480）、22.7%（109／480）、12.9%（62／480）、8.5%（41／480）、15.6%（75／480），同群母猪中猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒、轮状病毒、圆环病毒抗体量合格率分别为82.5%（396／480）、84.1%（452／480）、28.5%（137／480）、16.25%（78／480）、18.5%（89／480）、41.3%（198／480）。结果表明，规模养殖场普遍重视猪瘟和高致病性猪繁殖与呼吸综合征的免疫，对传染性胃肠炎、流行性腹泻、轮状病毒、圆环病毒等疫病的免疫不够。

2.2.2 主要病原体检测结果统计 针对血清学检测结果，对抗体合格率较低的猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和圆环病毒4种病原体分别进行了RT-PCR检测[14]及细菌培养分离鉴定[15]，确定引起本次连云港市新生仔猪腹泻的主要病原体，详见表2。

表1 新生仔猪腹泻病影响可能因素Table 1 The effecting factors of new neonatal porcine diarrhea-based syndrome

表2 新生仔猪腹泻样品中主要病原体检测结果统计Table 2 The PCR detection results of the samples from new neonatal porcine diarrhea-based syndrome

2.2.3 细菌病原体培养分离鉴定 无菌操作，将采集的病料进行细菌分离培养，分别接种于鲜血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、普通营养琼脂平板和伊红美蓝培养基上，37℃培养18～24 h内观察；对新生仔猪腹泻大肠杆菌通过玻板凝集和试管凝集进行了血清型定型，结果详见表3。

表3 新生仔猪腹泻大肠杆菌分离株的O型血清型Table 3 Details about the O serotypes of isolated E.coli from new neonatal porcine diarrhea syndrome

由此，表明引起本次江苏省连云港市规模猪场新生仔猪腹泻病因复杂，是多因素共同作用的结果，因此要认真分析原因，采取综合性的防控措施。消灭传染源、切断传播途径；保护易感染动物，从而控制腹泻的流行，最终消灭腹泻。

[1] 翁善钢. 新生仔猪腹泻的病原体检测[J]. 今日养猪业,2015(10): 67-68.

[2] 李刚. 新生仔猪腹泻的病因分析[J]. 中国猪业, 2013(2):122-123.

[3] Jones G W, Rutter J M. Role of the K88 Antigen in the Pathogenesis of Neonatal Diarrhea Caused by Escherichia coli in Piglets[J]. Infec and Immun, 1972, 6(6): 918-927.

[4] Nakazawa M, Sugimoto C, Isayama Y,et al.Virulence factors in Escherichia coli isolated from piglets with neonatal and post-weaning diarrhea in Japan[J]. Vet Microbiol, 1987, 13(4): 291-300.

[5] Soderlind O, Thafvelin B, Mollby R. Virulence factors in Escherichia coli strains isolated from Swedish piglets with diarrhea[J]. J Clin Microbiol, 1988, 26(5): 879-884.

[6] Morin M, Turgeon D, Jolette J,et al. Neonatal Diarrhea of Pigs in Quebec: Infectious Causes of Significant Outbreaks[J]. Can J Comp Med, 1983, 47(1): 11-7.

[7] Ngamwongsatit B, Tanomsridachchai W, Suthienkul O,et al. Multidrug resistance in Clostridium perfringens isolated from diarrheal neonatal piglets in Thailand[J].Anaerobe, 2016, 38(88-93).

[8] Stevenson G W, Hoang H, Schwartz K,et al.Emergence of Porcine epidemic diarrhea virus in the United States:clinical signs, lesions, and viral genomic sequences[J]. J Vet Diag Invest, 2013, 25(5): 649-654.

[9] Li W, Li H, Liu Y,et al.New Variants of Porcine Epidemic Diarrhea Virus, China, 2011[J]. Emerg Infec Dis, 2012, 18(8): 1350-1353.

[10] Puranaveja S, Poolperm P, Lertwatcharasarakul P,et al.Chinese-like Strain of Porcine Epidemic Diarrhea Virus,Thailand[J]. Emerg Infec Dis j, 2009, 15(7): 1112-1115.

[11] Kongsted H, Toft N, Nielsen J P. Risk factors and epidemiological characteristics of new neonatal porcine diarrhoea syndrome in four Danish herds[J]. BMC Vet Res, 2014, 10(1):151.

[12] Molinari B L D, Possatti F, Lorenzetti E,et al. Unusual outbreak of post-weaning porcine diarrhea caused by single and mixed infections of rotavirus groups A, B, C,and H[J]. Vet Microbiol, 2016,193: 125-132.

[13] Zhao Z P, Yang Z, Lin W D,et al. The rate of coinfection for piglet diarrhea viruses in China and the genetic characterization of porcine epidemic diarrhea virus and porcine kobuvirus[J]. Acta Virol, 2016(60): 55-61.

[14] Ishikawa K, Sekiguchi H, Ogino T,et al. Direct and rapid detection of porcine epidemic diarrhea virus by RTPCR[J]. J Virol Methods, 1997, 69(1-2): 191-195.

[15] 宦海霞, 苗晓青, 周琼, 等. 江苏省部分地区鹅源致病性大肠杆菌的分离、鉴定和耐药性分析[J]. 饲料工业,2007(15): 62-64.

INVESTIGATION OF CAUSATIVE AGENTS FOR NEONATAL PORCINE DIARRHEA SYNDROME ON LARGE-SCALE PIG FARMS IN LIANYUNGANG AREA

SHAN Yu-Ping1, LI-Feng1, DENG Jian-Xing2, HONG-Feng3, YAN-Yan4, HUANG Ji-Kang5,ZHOU Qing-Yu6, SI-Hui1, WANG Shao-Shan7, ZHU Guo-Qiang8,9(1. Lianyungang Husbandry and Veterinary Station, Lianyungang 222001, China; 2. Yancheng Binhai Husbandry and Veterinary Station, Binhai
224500, China; 3. Xuzhou Tongshan Avain Disease Diagnosis Department, Xuzhou 221116, China; 4. Lianyungang Ganyu Husbandry and
Veterinary Station, Lianyungang 222100, China; 5. Lianyungang Guanyun Husbandry and Veterinary Station, Lianyungang 222200, China;
6. Zhengda Group (China) Feed Technology, Lianyungang 222047, China; 7. Jiangsu Donghai Old Huai Pig Industry Development co. LTD,Donghai 222300, China; 8. College of Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China; 9. Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou 225009, China)

The etiological agents involved in neonatal porcine diarrhea syndrome in more than 50 pigs in Lianyungang area of Jiangsu province were investigated in this study. The results showed that pathogenicEscherichia coliwas the major pathogen detected frombacteriological diseases and Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), Porcine transmission gastroenteritidis virus(TGEV), Porcine rotavirus (PRoV) were the major pathogens involved in virological diseases. This study provided scientific basis for prevention and control of neonatal porcine diarrnea syndrome in Lianyungang and other areas.

Neonatal porcine diarrhea syndrome; cause analysis

S852.612

B

1674-6422（2017）06-0070-04

2017-08-16

连云港市科技攻关项目（CN1505）；省“ 333工程”科研资助项目（BRA2016304）；省“六大人才高峰”资助项目（NY-149）；连云港市“521工程”科研资助项目

单玉平，男，农业推广研究员，主要从事畜牧兽医技术推广、重大动物疫病防控

朱国强，E-mail：yzgqzhu@yzu.edu.cn