红松子油的体外抗氧化活性

杨明非 苏雯 王海英

(北日本制药株式会社产品研发室，日本富山县，930-0314) (广东省珠海市斗门区公立医疗卫生机构管理中心) (东北林业大学)

红松子油的体外抗氧化活性

杨明非 苏雯 王海英

(北日本制药株式会社产品研发室，日本富山县，930-0314) (广东省珠海市斗门区公立医疗卫生机构管理中心) (东北林业大学)

测定了红松子油的总还原力、二苯基苦基肼自由基(DPPH·)的清除能力和羟基自由基(·OH)的清除能力。结果表明：红松子油的总还原力较弱，质量分数为50%时吸光度为0.211，远低于对照组抗坏血酸的还原力。红松子油对DPPH·和·OH清除能力相对显著，对DPPH·的清除率略高于·OH，红松子油质量浓度在500 g/L以上时对二者清除率可达到100%，拮抗剂的半抑制质量浓度(IC50)分别为22.05～23.69、13.74～13.74 g/L。红松子油的体外清除自由基能力较强。

红松子油;抗氧化活性;清除自由基能力

红松(Pinuskoraiensis)为松科松属植物，是东北常见的具有经济价值的树种之一。红松松子含有蛋白质、糖类、粗纤维以及粗脂肪，其中有多种人体必需的氨基酸和维生素；本草纲目中记载松子有“补气血，祛风寒，润肺止咳”等功效。

已有研究表明，以红松松子为原料制成的松子油中，含有大量对人体有益的不饱和脂肪酸，约占松子油的总质量分数的90%，如亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸等无法自身合成，必须由食物中获取的脂肪酸[1-3]。其中含量最高的为亚油酸，具有降低血压和降低胆固醇的作用[4-5]。因此，红松子油作为一种极其健康的新型油脂，具有广阔的科研和商业开发空间。目前，对红松子油的研究，多侧重于其中脂肪酸成分组成及其含量分析。除少量饱和脂肪酸棕榈酸和硬脂酸占总质量分数的7%，其余主体部分为亚麻酸、亚油酸和皮诺敛酸，还有少量花生酸、花生四烯酸、芥酸、二十碳三烯酸；但各成分具体含量因树种不同、海拔不同、所处环境温湿度不同而存在较大差异[6-8]。另一主要研究方向，是关于松子油的提取方法。现今常见的应用于松子油提取的方法有压榨法、超临界萃取法、超声辅助提取法、有机溶剂浸取法等；其中压榨法分为冷榨和热榨，冷榨法为最传统也是大面积投入生产应用的方法，不仅避免高温产生的反式脂肪酸，同时保留了松子天然的风味和有效成分[9-10]。本实验采用的原料，即为冷榨法提取的红松子油；测定了红松子油的抗氧化活性，包括总还原力、二苯基苦基肼自由基(DPPH·)和羟基自由基(·OH)的清除能力，为日后红松子油的开发和应用提供参考。

1 材料与方法

红松子油：为冷榨法提取的红松子油，来源于黑龙江宏泰松果有限公司。

主要试剂：铁氰化钾、三氯化铁、三氯乙酸、二苯基苦基肼自由基(DPPH·)、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸亚铁、水杨酸、质量分数为30%的过氧化氢、无水乙醇，均为分析纯。

主要仪器：722型可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司。

总还原力测定方法：利用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠配置pH=6.6的磷酸缓冲液，将红松子油样品用无水乙醇稀释质量分数为50.00%、43.75%、37.50%、31.25%、25.00%、18.75%、12.50%、6.25%。将1 mL不同质量分数的红松子油醇溶液和2.5 mL的磷酸缓冲液(浓度为0.2 mol/L，pH=6.6)加入试管中，再加入2.5 mL质量分数为1%的铁氰化钾溶液，混合均匀后置于50 ℃恒温水浴锅中反应20 min。取出后，再加入2.5 mL质量分数为10%的三氯乙酸终止反应，5 000 r/min离心10 min。取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸馏水和0.5 mL质量分数为0.1%的三氯化铁溶液，混匀后静置10 min，在700 nm处检测吸光值。用抗坏血酸重复该实验，作为其阳性对照组。

清除DPPH·的方法：称取7.9 mg的DPPH·粉末溶于100 mL无水乙醇中，棕色瓶暗处保存备用。将待测的红松子油用倍数稀释法，以无水乙醇为溶液分别稀释质量浓度为500.00、375.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63 g/L的样品溶液备用。之后，用移液管分别移取2 mL不同质量浓度的待测样品溶液于试管中，加入2.0 mL的DPPH·溶液，立即混匀，暗处放置30 min，测定517 nm的吸光度(Ai)，同时测定2.0 mL样液加入2.0 mL无水乙醇的吸光度(Aj)及2.0 mL无水乙醇加入2.0 mL的DPPH·溶液的吸光度(A0)。实验以2.0 mL蒸馏水和2.0 mL无水乙醇混合液作参比。每个质量浓度平行操作3次，取平均值。计算样品对DPPH·的清除率(RDPPH·)：RDPPH·=(1-(Ai-Aj)/A0)×100%。

数据处理：利用Excel 2007、SPSS19.0进行数据统计分析、处理。

2 结果与分析

2.1 红松子油的总还原力

由表1可见：红松子油具有一定的还原能力，但还原力较弱。红松子油的还原能力与其质量分数具有相关性，通过拟合得出相关回归方程：A=0.012 5w+0.099(A为吸光度，w为质量分数)，决定系数(R2)为0.954 7。红松子油质量分数为50%时，其还原力所对应的吸光度仅为0.211，远低于对照组最低质量浓度(2 g/L)抗坏血酸对应的吸光度。这一结果与徐广新[11]所测定的结果相类似。

表1 红松子油总还原力

注：表中“吸光度”数据为“平均值±标准差”。

2.2 红松子油对DPPH·的清除能力

由表2可见：红松子油对DPPH·有良好的清除能力，红松子油质量浓度在375.00 g·L-1以上可达到100%的清除率。拮抗剂的半抑制质量浓度(IC50)值越小，说明样品清除能力越强，本次样品红松子油IC50为22.05～23.69 g·L-1。红松子油中含有的脂肪酸和维生素，还有槲皮素和山奈素等活性组分，均会影响红松子油清除DPPH·的能力。常晨等[12]比较了6种不同山体红松子油的DPPH·清除能力，其IC50的值均有差异。但总体看，红松子油清除DPPH·的能力较强，具有一定预防因自由基引起的细胞和肌体损伤的作用。

表2 红松子油对自由基的清除能力

注：表中“自由基清除率”数据为“平均值±标准差”。

2.3 红松子油对·OH的清除能力

由表2可见：红松子油对·OH的清除能力较强；红松子油质量浓度为500.00 g·L-1时，对·OH的清除率可达到100%；红松子油质量浓度相对较低时，对·OH的清除率仍在50%。根据SPSS回归计算得出的IC50值，清除·OH的IC50值为13.74～13.82 g·L-1。但清除率与红松子油质量浓度间线性关系不显著，各个质量浓度间清除率数值波动较大，误差分析还需进一步试验求证。

3 结论

红松子油具有一定的抗氧化活性。相对于抗坏血酸，红松子油的总还原力较弱，但对DPPH·、·OH清除效果较为显著。红松子油较高质量浓度时清除率可达到100%，低质量浓度时也有较好的清除效果。拮抗剂的半抑制质量浓度(IC50)都较低，分别为23.69、13.74g/L，二者相比，虽然清除·OH的IC50值较小，但在同质量浓度时，DPPH·的清除率略高出·OH。酚类、酸类和多不饱和脂肪酸均有抗氧化作用，而红松子油中包含多种不饱和脂肪酸、维生素及酚类，其中还有少量山奈素和槲皮素等活性因子；初步推测，因为这些物质，红松子油体外抗氧化活性效果较为显著。

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TheinvitroAntioxidantActivitiesofPinuskoraiensisSeedOil

Yang Mingfei

(Research and Development Department of Kitanihon Pharmaceutical CO., Toyama 9300314, Japan); Su Wen(Public Medical Institutions Management Center, Doumen District, Zhuhai, Guangdong Province, P. R. China); Wang Haiying(Northeast Forestry University)Journal of Northeast Forestry University，2017,45(12)：80-82.

Pinuskoraiensisseed oil, Antioxidant properties, Scavenging free radicals

杨明非，男，1989年10月生，北日本制药株式会社产品研发室，临床医学硕士。E-mail：ymfarcher@163.com。

王海英，东北林业大学林学院，副教授。E-mail：haiyingwang908@126.com。

2017年10月10日。

张 玉。

S789.7

Theinvitroantioxidant activity ofPinuskoraiensisseed oil was studied, the total reducing power ofP.koraiensisseed oil was determined, and the scavenging ability of DPPH·, and the ability to remove hydroxyl groups were determined. The total reducing power ofP.koraiensisseed oil was weak, and the absorbance at 50% content was 0.211, which was much lower than that of control group. DPPH·, and ·OH scavenging ability was more significant, the DPPH· clearance rate was slightly higher than that of the ·OH. The concentration above 500 g/L ofP.koraiensisseed oil on the two clearance rate reached 100%, and IC50 of two were 22.05-23.69 g/L and 13.74-13.74 g/L, respectively. Therefore, the ability ofinvitroscavenging free radicals ofP.koraiensisseed oil was significant.