紫茎泽兰提取物对小鼠肝乙酰胆碱转移酶的影响

农向+旷欢+赵乐乐

摘要：通过饲喂小鼠紫茎泽兰乙醇提取物及左缺诺孕酮炔雌醚进行毒性试验，结果表明：紫茎泽兰和左缺诺孕酮炔雌醚对小鼠小鼠肝中乙酰胆碱转移酶活力在不同药剂作用的结果是F值>F0.01，P<0.01，有极显著性差异，在小鼠肝中乙酰胆碱转移酶活力在药剂持续时间作用的结果是F0.05

关键词：紫茎泽兰；肝；肝；乙酰胆碱转移酶活力

引言

紫茎泽兰是一种外来物种[1]，它对本地的植物构成严重的危害，对土壤形成一种绝对占有的优势，它的扩散趋势还未减弱，拿乐山为例它的入侵已成定局，风险评估是会成为乐山外来物种入侵近几年的前五名[7]。紫茎泽兰[2]的乙醇提取物开发成新型的杀虫剂[5]已是当代一个热点，本实验为了证明紫茎泽兰对于小鼠的毒性大小，有利于更好的为紫茎泽兰杀虫剂的生产实用提供依据。左缺诺孕酮炔雌醚是避孕药主要成分，对小鼠的卵巢功能有影响，20mg/kg剂量降低了雌性鼠的生育率和小鼠的出生时的死亡率，但5mg/kg剂量对母鼠没有伤害性[6]，但同时经过了临床试验对人体的无害性，副反应发生相对较低且有良好的耐受性[3]。本实验为了证明紫茎泽兰提取物和左缺诺孕酮炔雌醚对小鼠的重要器官肝和肾是否有影响。采用了空白對照来进行对照，同时保持灌胃药物的持续时间对照，肝和肾是哺乳动物的重要解毒和排毒的器官。肝是体内重要的解毒器官，肾虽然也有解毒功能但主要还是起排毒的作用。乙酰胆碱转移酶的作用，它是合成乙酰胆碱的一种酶，乙酰胆碱是生物体一种重要的神经传递物质[1，120]。

1 材料与方法

1.1 材料

紫茎泽兰的乙醇提取液（2g/ml纯浓液和1g/ml稀释一倍）。左缺诺孕酮炔雌醚，华润紫竹药业有限公司[8]。各种酶购于南京建成科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 测定方法

蛋白质测定用考马斯亮蓝法，乙酰胆碱转移酶活力测定采用乙酰胆碱转移酶测试盒[9]。

1.2.2 喂药方法

将24只老鼠分成四组，对照组6只小鼠不灌胃药只提供和别的小组实验同样的水和饲料，2g/ml紫茎泽兰浓度和1g/ml紫茎泽兰浓度各5只，为公鼠，左缺诺孕酮炔雌醚组5只，为母鼠。从第一天8月3号解剖第一次的，8月4号开始灌胃的四组小鼠中的三组要灌胃对应药物的，6天后中各取一只进行解剖测定，记录数据。同时剩下的三组要灌胃药物的鼠都分别灌胃2g/ml紫茎泽兰，1g/ml紫茎泽兰，左缺诺孕酮炔雌醚，同时对照组和其他组一样继续保持供水和饲料。6天后，重复过程，先解剖测量，记录数据，再灌胃。灌胃三次，最后一次测定后不进行灌胃等鼠恢复6天再进行解剖测定。

1.2.3 样品制备方法

每组取一只小鼠，解剖，快速取其肝脏，用人工研磨方法，在冰块上充分研磨，并按照测试盒要求加入超纯水混匀，提取需要的部分和含量在离心机上进行设置好的转速和时间离心。取上清液先测定蛋白质的含量，然后按照测试盒中测定小鼠肝脏乙酰胆碱转移酶酶的活力。

2 实验结果

2.1小鼠肝中的乙酰胆碱转移酶含量方差分析表

通过方差分析得知，FA=7.70471，FB=5.298761，对于药剂的影响，由于dfA=3，dfe=12查F值表得，F0.05=3.49 F0.01=5.95，FA>F0.01，P<0.01，表明药剂对小鼠体内的肝中的乙酰胆碱转移酶的影响差异极显著，对于持续时间，根据dfB=4，dfe=12，查F值表得，F0.05=3.26 F0.01=5.41，F0.05

2.2.小鼠肾和肝中的的乙酰胆碱转移酶活力

乙酰胆碱转移酶活力在小鼠肝中与不同的药剂的影响是差异极显著，就是小鼠肝中的乙酰胆碱转移酶活力与不同药剂作用的影响有关，而在乙酰胆碱转移酶活力在小鼠肝中与灌胃药物持续时间的影响是差异显著，那就有95%的把握说小鼠肝中的乙酰胆碱转移酶活力与灌胃药物持续时间有关，这从侧面也验证了小鼠的肾和肝的作用，功能不一样，在解毒方面肝的作用要更大。

2.3不同药剂对小鼠肝中的乙酰胆碱转移酶活力影响趋势

图1可以看出，小鼠肝中乙酰胆碱转移酶活力在没有喂药时基本一致，药剂中2g/ml浓度的紫茎泽兰在第一次喂药之后对肝中的乙酰胆碱转移酶活力的影响是在没有喂药的空白对照组的较低水平上的，第二次喂药后含量开始快速上升，但还是低于空白对照组的数值，第三次含量持续上升，但一直都是低于对照组的，当不喂药时含量就开始有一些下降。左缺孕酮避孕药对小鼠肝中的乙酰胆碱转移酶活力的影响是在第一次喂药比没有喂药的空白对照低出很多，第二次喂药后即有显著上升，第三次继续上升，但数值一直低于空白对照组的活力，停止喂药乙酰胆碱转移酶活力的水平出现急剧下降。1g/ml浓度的紫茎泽兰组在第一次喂药后，与空白对照相比就远远的低于对照水平，第二次喂药后含量保持上升，第三次喂药活力上升的速率要慢一点，至喂药截止恢复期时还在上升，但它的数值始终在对照组水平之下。2g/ml浓度的紫茎泽兰和左缺孕酮避孕药变化趋势基本一致，出现的乙酰胆碱转移酶活力变化趋势较大。1g/ml浓度的紫茎泽兰从第一次喂药至第三次喂药都是呈现上升趋势，乙酰胆碱转移酶活力的总体变化趋势是较大的。但三种药剂的乙酰胆碱转移酶都是始终低于对照组的乙酰胆碱转移酶活力的。

3.结论

紫茎泽兰提取物对小鼠体内肝中的乙酰胆碱转移酶活力有显著性，其他的各项变化均无显著性差异，所以紫茎泽兰的2g/ml，1g/ml浓度和左缺诺孕酮炔雌醚对小鼠有轻微的影响但基本不构成危害[13]。而1g/ml浓度的紫茎泽兰则对小鼠的影响要更小。所以紫茎泽兰和左缺诺孕酮炔雌醚对小鼠影响不大，与参考文献中对小鼠的的肝肾有损害，且有轻微中毒现象[14]基本一致，以此作为紫茎泽兰环保型杀虫剂的毒性试验的依据。

参考文献：

[1]Oelrichs P B，Calanasan C A，MacLeod J K，Seawright A A，Ng J C. Isolation of a compound from Eupatorium adenophorum （Spreng.） [Ageratina adenophora （Spreng.）] causing hepatotoxicity in mice.[J]. Natural toxins，1995，3（5）

[2]张显理，段玉海，吴永峰，王万宁，曹文丽.人用不育剂对小鼠繁殖的影响[J].宁夏大学学报（自然科学版），2005，（01）：71-74.

[3]陈丽刚.短效复方口服避孕药Yasmin的临床研究[D].华中科技大学，2006.

[4]罗屿，藏宇，钟远等新型杀虫剂对蚯蚓超显微结构影响的研究[J]，电子显微学报，2002，21（5）；513-514.

[5]农向.紫茎泽兰提取物对动物寄生螨类的杀灭效果及杀虫活性成分研究[D].四川农业大学，2013.

[6]陈思东，许雅，曾转萍，杨翌.左炔诺孕酮炔雌醚抗雌鼠生育的实验研究[J].中国卫生检验杂志，2008，（12）：2491-2492+2604.

[7]易建平，印丽萍，李大春，李风婷，叶军.四川乐山地区紫茎泽兰的入侵定殖和风险评估[J].植物检疫，2003，（06）：333-336+319-386.

[8]何玉仙，王长方，陈锋，杨秀娟，翁启勇.杀虫剂处理对甜菜夜蛾幼虫体内酶活性的影响[J].江西农业大学学报，2003，（06）：896-899.

[9]杜淑红，陈剑杰.分光光度法测定海蜇中过氧化氢的含量[J]. 广东微量元素科学，2012，（11）：9-11.

[10]李妙魚.乙酰胆碱酯酶抑制剂的合成、表征及其对电鳗AChE抑制活性的研究[D].山西大学，2004.

[11]杨帆，帅霞.桃蚜高效氯氰菊酯抗药性与乙酰胆碱酯酶的关系[J].植物保护，2008，（05）：60-62.

[12]吕林兰，杨家新，董学兴，黄金田，吕富.马拉硫磷对双齿围沙蚕乙酰胆碱酯酶和过氧化氢酶的影响[J].农业环境科学学报，2010，（03）：431-436.

[13]谢全喜，张建梅，王文春，韩广泉，王凯，谷巍.紫茎泽兰脱毒草粉对小白鼠的亚慢性毒性试验研究[J].广东饲料，2014，（05）：25-27.

[14]董强，赵宝玉，顾强，王蕾，卢岩，史志诚.紫茎泽兰全草对小鼠毒性试验[J].西北大学学报（自然科学版），2011，（03）：469-472.

[15]简淑娟.HPLC外标法测定左炔诺孕酮炔雌醚片含量[J].中国现代药物应用，2009，（02）：43-44.

作者简介：

#为并列第一作者

*为通讯作者

第一和通讯作者简介：

农向：男，1980.11，博士，副教授，研究方向为天然药物和林业病虫害，endprint