树突细胞-细胞因子诱导杀伤细胞联合术后化疗治疗非小细胞肺癌的疗效

姜海燕 刘达兴 徐 刚 宋永祥 (六盘水市人民医院胸心外科,贵州 六盘水 553000)

树突细胞-细胞因子诱导杀伤细胞联合术后化疗治疗非小细胞肺癌的疗效

姜海燕 刘达兴1徐 刚1宋永祥1(六盘水市人民医院胸心外科,贵州 六盘水 553000)

目的评价Ⅱa～Ⅲa期非小细胞肺癌(NSCLC)术后辅助化疗联合树突细胞(DC)-细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞治疗的效果。方法NSCLC手术病例79例，随机分为术后辅助化疗组40例(对照组)和术后辅助化疗联合3个疗程DC-CIK细胞治疗组39例(治疗组)；两组完成术后4个疗程化疗后，对比随访1年的复发率和生存率、每次化疗前血清癌性标志物癌胚抗原(CEA)、CYFRA21-1含量；密切观察细胞回输不良反应，评价患者生活质量评分。结果术后1年，治疗组肿瘤复发率明显低于对照组(P<0.05)；死亡率两组无明显差异(P>0.05)。治疗结束后6个月，两组功能状况(KPS)、生活质量(QOL)评分无明显差异(P>0.05)；治疗结束后12个月治疗组KPS、QOL评分较对照组明显增高 (P<0.05)。治疗结束后6个月、12个月治疗组体力状态(ZPS)评分明显低于对照组(P<0.05)。两组患者第2、3、4次化疗前比第1次化疗前CEA 和CYFRA21-1含量明显降低(P<0.05)。第4次化疗前，治疗组CEA水平明显低于对照组 (P<0.05)。第2、3、4次化疗前治疗组CYFRA21-1水平均低于对照组(P<0.05)。治疗组发生恶心，呕吐，纳差，失眠的人次均明显低于对照组(P<0.05)；而发生乏力人次两组无明显差异 (P>0.05)。结论术后化疗联合3个疗程DC-CIK细胞治疗可降低NSCLC术后1年肿瘤复发率，降低血清癌性标志物CEA和CYFRA21-1的含量，提高患者生活质量。

肺癌；手术；化疗；DC-CIK细胞治疗

采用手术为主，放、化疗为辅的综合治疗是目前中晚期肺癌最有效的治疗手段，但肺癌患者总体5年生存率仍不足15%，其治疗给患者带来极大的毒副作用，严重影响了肺癌患者的生活质量。相关研究表明树突细胞(DC)-细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞治疗晚期肺癌可明显提高晚期肺癌患者机体免疫功能，减轻放化疗引起的不良反应等〔1，2〕。本文观察DC-CIK联合术后化疗对非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效。

1 资料与方法

1.1病例纳入和剔除标准 (1) 纳入标准：①手术病理证实为NSCLC患者；②临床TNM分期为Ⅱa～Ⅲa期(2011年UICC标准)；③均实施根治性手术+规范化系统淋巴结清扫术；④45岁≤年龄≤70岁；⑤术后患者一般情况好，临床判断能耐受术后辅助化疗≥3 w，体力状况(ZPS)评分≤ 2分，功能状况(KPS)评分≥70分；⑥预计生存期≥3个月，心、肝、肾功能、造血系统正常；白细胞数≥3.5×109/L，血小板数≥90×109/L， 血清谷丙转氨酶≤40 IU/L；血清总胆红素≤18 μmol/L，肌酐≤130 μmol/L；⑦医护人员知情告知，患者签署知情同意书。(2) 剔除标准：①实验期间病情恶化者；患者出现无法耐受的副作用；要求退出治疗者；②器官衰竭者；③患有其他获得性、先天性自身免疫缺陷疾病，或有器官移植史者；④患有不可控制的严重感染性疾病者；⑤对本细胞治疗中所有生物试剂过敏者；⑥患有或并发T细胞淋巴瘤者。

1.2临床资料 收集2012年3月至2013年3月遵义医学院附属医院治疗的Ⅱa～Ⅲa期NSCLC手术患者79例，根据住院号末尾数随机分组，奇数设为治疗组，偶数设为对照组。对照组仅予术后辅助化疗，共40例，男25例，女15例，腺癌16例，鳞癌24例，年龄45～69〔平均(53.50±8.79)〕岁。治疗组予术后辅助化疗联合DC-CIK细胞治疗3个疗程，共39例，男22例，女17例，腺癌16例，鳞癌23例，年龄45～69〔平均(57.23±9.30)〕岁。对照组与治疗组性别、年龄、病理分型、临床TNM分期比较无明显差异(P>0.05)。

1.3治疗前准备 使用COM.TEC血细胞分离机(Fresenius Kabi)采集患者自体外周血单个核细胞(PBMNCs)，立即送细胞制备室。在严格无菌条件下，由实验室技术人员对采集送至临床级GMP实验室的患者PBMNCs参照文献〔3〕及相关标准进行DC-CIK细胞制备，化疗前1 d通过细胞分离机与淋巴细胞分离液获取患者本人PBMNCs。DC培养：经淋巴细胞分离液密度梯度离心获得PBMNCs，经 RPMI1640培养液洗涤，置于无血清培养基中混悬，在 37℃、5%CO2培养箱中培养 4 h 后加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(1 000 U/ml)和白细胞介素(IL)-4(5 000 U/ml) 继续培养，每隔2 d换液1次，第5天加入肿瘤坏死因子(TNF)-α(500 U/ml)诱导成熟DC。CIK 细胞培养：分离后淋巴细胞加入重组人干扰素(IFN)-γ(1 000 U/ml)和 10%AB 型人血清RPMI1640培养液，24 h后加入小鼠抗人CD3单抗 (100 ng/ml)、IL-2(1 000 U/ml)，以后隔天半量换液维持培养。DC-CIK细胞联合培养：收获第7天DC及CIK细胞按1∶5计数混合培养 3 d，隔天补加IL-2(1 000 U/ml) 培养液。

1.4术后治疗方案 (1)对照组：遵抗癌协会NSCLC化疗指南〔4〕，采用含铂二联方案。具体为：长春瑞滨(上海旭东海普药业有限公司，生产批号11122534)25 mg/m2静脉注射，第1、8日；顺铂(江苏恒瑞医药股份有限公司，生产批号：12011023)25 mg/m2静脉注射，第1～3天，4 w为1个周期，共4个周期。(2)治疗组：在对照组治疗方案的基础上，联合DC-CIK细胞治疗。在化疗周期间隔第 2、4、6、8、10 d，将 DC-CIK细胞用100 ml 0.9%生理盐水液回输体内，每次回输细胞(4～5)×109个，5 次为1个疗程，使用3个疗程。治疗过程中出现胃肠道反应、骨髓抑制、肝肾功损害等对症处理。

1.5观察指标 ①治疗结束后，评价完成化疗6个月和12个月的生存情况并评价其生活质量，主要包括KPS评分、ZPS评分、生活质量(QOL)评分；②每次化疗前检测血清癌性标志物：所有研究对象抽取空腹肘静脉血3.0 ml，3 000 r/min离心10 min，取上清待测。采用化学发光法测定血清癌胚抗原(CEA)、CYFRA21-1的含量；③记录并评估两组治疗过程中发生不良反应的人次数。

1.6统计学方法 采用SPSS19.0软件进行χ2及t检验。

2 结 果

2.1两组肿瘤复发和死亡情况比较 治疗后12个月内，治疗组肿瘤复发率明显低于对照组〔2.6%(1/39) vs 17.5%(7/40)，χ2=4.840,P=0.028〕；治疗组死亡率低于对照组〔7.7%(3/39) vs 15.0%(6/40)〕，但无统计学差异(χ2=1.045，P=0.307)。其中治疗组1例死于化疗后6个月内，2例死于化疗后12个月内；对照组4例死于化疗后6个月内，2例死于化疗后12个月内。

2.2两组KPS、ZPS、QOL评分比较 化疗后6个月两组KPS、QOL评分无明显差异(P>0.05)；化疗后12个月治疗组KPS、QOL评分明显高于对照组(P<0.05，P<0.01)。化疗后6和12个月ZPS评分治疗组均明显低于对照组(P<0.05)，见表1。

2.3两组化疗前血清CEA、CYFRA21-1水平比较 两组第2、3、4次化疗前血清CEA 和CYFRA21-1水平均明显低于第1次化疗前(P<0.05)。第4次化疗前，治疗组血清CEA水平明显低于对照组(P<0.05)；第2、3、4次化疗前治疗组血清CYFRA21-1水平均明显低于对照组(P<0.05，P<0.01)，见表2。

2.4两组不良反应比较 治疗组发生恶心、呕吐(34人次)、纳差(45人次)、失眠(45人次)人次均明显低于对照组(67、60、67人次；χ2=7.82,P=0.00;χ2=6.17,P=0.00;χ2=5.03,P=0.02)；而乏力人次数治疗组与对照组比较无明显差异 (33人次vs 29人次，χ2=2.11,P=0.19)。

表1 两组KPS、QOL、ZPS评分比较分)

与对照组比较:1)P<0.05，2)P<0.01

表2 两组不同时点化疗前血清CEA及CYFRA21-1水平比较

与本组第1次化疗前比较:1)P<0.05；与对照组同一时点比较:2)P<0.05,3)P<0.01

3 讨 论

DC-CIK细胞在临床应用中特别是对于手术后的癌症患者，清除残留极微转移病灶，防止癌细胞的扩散和复发，提高患者的自身免疫能力等具有重要作用〔5〕，广泛应用于肝癌、食管癌、直肠癌、乳腺癌、肾癌、宫颈癌、卵巢癌、白血病等恶性肿瘤的术后治疗中〔6～9〕。研究表明〔10〕，化疗联合DC-CIK治疗NSCLC的有效率高达 41.6%～42.9%。本研究结果显示，DC-CIK联合化疗治疗NSCLC的复发率明显低于对照组与既往相关研究报道一致〔11〕，其可能的机制是：CIK 细胞是人PBMNCs在体外经多种细胞因子刺激后获得一群异质性细胞，该细胞表面可以表达 CD3和CD56 这2种膜蛋白分子，兼有T淋巴细胞溶瘤活性和NK细胞非主要组织相溶性复合物限制性杀瘤特点。CIK细胞体外培养细胞表型发生变化，其细胞毒活性与增殖能力大为增强，且对人体骨髓干细胞和造血祖细胞几乎没有毒性，因而在肿瘤生物治疗上表现出强大优势。CIK细胞进入体内活化后可以分泌 IL-2、IL-6、TNF-α等多种细胞因子，此类因子可直接发挥细胞毒作用，并可诱导癌细胞表达 Fas 和 FasL 细胞表面分子，加速细胞凋亡。体外实验表明 CIK 细胞能诱导并加速人肺癌细胞株A549早期凋亡〔12〕。CIK 细胞在体内受到其他因子刺激后，可以将胞质颗粒释放到胞外，而促进癌细胞裂解。DC是目前功能最强专职抗原提呈细胞，成熟DC可通过Ⅱ型组织相容性抗原等途径呈递肿瘤抗原，诱导特异性免疫反应，抵制肿瘤细胞免疫逃逸。它既可有效诱导静止T细胞增殖，也可促进细胞毒性T淋巴细胞和辅助性T淋巴细胞生成〔13〕。将具有肿瘤抗原提呈能力 DC与细胞毒效应CIK细胞联合培养，理论上可明显提高CIK细胞毒活性。肺癌患者外周血清CEA、CYFRA21-1水平的连续动态监测对肺癌的转移和预后判断有一定临床意义，其化疗前、后血清中含量变化与治疗效果密切相关〔14〕。肿瘤患者生活质量的评价已成为评价肿瘤患者治疗疗效的重要标准〔15〕。本研究显示Ⅱa～Ⅲa期NSCLC患者术后化疗联合3个疗程DC-CIK细胞治疗，可提高肺癌患者综合治疗效果。

1Zhong R，Han B，Zhong H.A prospective study of the efficacy of a combination of autologous dendritic cells，cytokine-induced killer cells，and chemotherapy in advanced non-small cell lung cancer patients〔J〕.Tumour Biol，2014；35(2)：987-94.

2Yang L，Ren B，Li H，etal.Enhanced antitumor effects of DC-activated CIKs to chemotherapy treatment in a single cohort of advanced non-small-cell lung cancer patients〔J〕.Cancer Immunol Immunother，2013；62(1)：65-73.

3张志伟，宋 鑫.DC-CIK细胞临床制备规范化研究〔J〕.中国肿瘤，2011；20(2)：85-8.

4支修益，吴一龙，马胜林，等.原发性肺癌诊疗规范(2011年版)〔J〕.中国肺癌杂志，2012；15(12)：677-88.

5Wang QJ，Wang H，Pan K，etal.Comparative study on anti-tumor immune response of autologous cytokine-induced killer (CIK) cells，dendritic cells-CIK (DC-CIK)，and semi-allogeneic DC-CIK〔J〕.Chin J Cancer，2010；29(7)：641-8.

6Wei XC，Yang DD，Han XR，etal.Bioactivity of umbilical cord blood dendritic cells and anti-leukemia effect〔J〕.Int J Clin Exp Med，2015;8(10)：19725-30.

7Gao D，Li C，Xie X，etal.Autologous tumor lysate-pulsed dendritic cell immunotherapy with cytokine-induced killer cells improves survival in gastric and colorectal cancer patients〔J〕.PLoS One，2014；9(4)：e93886.

8Zhou P，Liang P，Dong B，etal.Phase Ⅰ clinical study of combination therapy with microwave ablation and cellular immunotherapy in hepatocellular carcinoma〔J〕.Cancer Biol Ther，2011；11(5)：450-6.

9Wang ZX，Cao JX，Liu ZP，etal.Combination of chemotherapy and immunotherapy for colon cancer in China：a meta-analysis〔J〕.World J Gastroenterol，2014；20(4)：1095-106.

10Yuanying Y，Lizhi N，Feng M，etal.Therapeutic outcomes of combining cryotherapy，chemotherapy and DC-CIK immunotherapy in the treatment of metastatic non-small cell lung cancer〔J〕.Cryobiology，2013；67(2)：235-40.

11彭大为，李建旺，元建华，等.自体DC-CIK细胞联合培美曲塞治疗老年非小细胞肺癌的疗效与安全性〔J〕.中国免疫学杂志，2012；28(7)：648-51，656.

12蒋 涛，付立业，李 妍.CIK细胞对RNAi沉默PD-L1基因的肺腺癌A549细胞的体外抑制作用〔J〕.现代肿瘤医学，2015；23(12)：1641-3.

13Franceschetti M，Pievani A，Borleri G，etal.Cytokine-induced killer cells are terminally differentiated activated CD8 cytotoxic T-EMRA lymphocytes〔J〕.Exp Hematol，2009；37(5)：616.

14王群慧，郑 华，胡范彬，等.伴有EGFR突变的非小细胞肺癌血清CYFRA21-1和CEA水平与EGFR-TKIs的疗效关系〔J〕.中国肺癌杂志，2016；19(8)：550-8.

15杜军华，乔洪源，尹宜发.血清CEA、CA125及Cyfra21-1水平对中晚期非小细胞肺癌患者预后的影响〔J〕.肿瘤防治研究，2016；43(2)：137-40.

R73

A

1005-9202(2017)24-6118-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.24.049

贵州省省长资金临床应用课题(黔省专合字号2012107号)

1 遵义医学院附属医院胸心血管外科

刘达兴(1970-)，男，硕士，主要从事心脏血管外科研究。

姜海燕(1986-)，女，硕士，主要从事肺癌的诊断与治疗研究。

〔2016-07-19修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)