母源抗体对HuN4-F112株HPRRS活疫苗免疫的影响

（江苏省动物疫病预防控制中心，江苏南京 210036）

高致病性猪蓝耳病（HPRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征（俗称蓝耳病，PRRS）病毒变异株引起一种急性高致死性疫病，临床上以高热，厌食或不食，咳嗽、气喘等呼吸道症状，妊娠母猪晚期流产、早产、产死胎、弱胎和木乃伊胎，以及高死亡率为主要特征[1]。2006年国内暴发了HPRRS疫情，仔猪发病率高达100%，死亡率高达50%以上，母猪流产率高达30%以上，给养猪业造成巨大伤害[2]。疫苗免疫是HPRRS防治的重要技术措施，高致病性猪蓝耳病疫苗主要包括灭活疫苗和弱毒活疫苗等2种类型，实际应用中灭活疫苗的使用效果并不理想，一般用于不适合弱毒活疫苗免疫的种猪的免疫，弱毒活疫苗才是该病防治的主导疫苗，但弱毒活疫苗由于疫苗本身的特点，容易受到机体内已有的抗体，特别是母源抗体的干扰，不能刺激机体产生有效免疫应答，导致免疫效果不确切。因此，摸清弱毒活疫苗的免疫特性，是科学制定免疫程序，保证免疫效果的前提和基础。本试验以HuN4-F112株HPRRS弱毒活疫苗为对象，进行免疫试验研究，结果表明该疫苗能够突破母源抗体干扰，有效刺激机体产生免疫抗体。现总结报告如下：

1 材料与方法

1.1 试验疫苗

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（HuN4-F112株），哈药集团生物疫苗有限公司提供。

1.2 诊断液

北京世纪动物防疫技术有限公司生产的猪繁殖与呼吸综合征病毒（Nsp2 1594-1680变异株）实时荧光RT-PCR检测试剂盒；法国LSI公司生产的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA检测试剂盒。

1.3 试验猪与分组

预先检测筛选，选择PRRS母源抗体为阳性，病原为阴性的断奶仔猪30头，分为2组，一组进行疫苗免疫，一组作为不免疫对照。选择PRRS母源抗体和病原均为阴性的断奶仔猪30头，分为2组，一组进行疫苗免疫，一组作为不免疫对照。（详见表1）

表1 试验猪分组情况

1.4 样品采集

A组和C组各选择5头试验猪，B组和D组各选择2头试验猪，用于连续采样监测。

免疫后14d、28d、60d分别对各组试验猪采样进行PRRS免疫抗体和病原监测。A组和C组各采集10份血清样品，其中5份为连续采样监测，5份为同组其他试验猪血清样品；B组和D组各采集5份血清样品，其中2份为连续采样监测，3份为同组其他试验猪血清样品。

1.5 检测方法

免疫后机体疫苗毒检测用猪繁殖与呼吸综合征病毒（Nsp2 1594-1680变异株）实时荧光RT-PCR方法；抗体检测用ELISA方法。

2 结果

2.1 免疫后机体疫苗毒消长变化

对各组采集的血清样品进行PRRS（Nsp2 1594-1680变异株）实时荧光RT-PCR跟踪检测，结果如下：

表2 免疫后各组试验猪机体内疫苗毒检测结果

检测结果显示，PRRS母源抗体为阳性的免疫试验A组和PRRS母源抗体为阴性的C免疫试验组均在免疫后14d、28d、60d检出PRRS（Nsp2 1594-1680变异株）阳性，而相同环境饲养的作为不免疫对照的B组和D组试验猪均为阴性。

2.2 免疫后抗体消长变化

对各组采集的血清样品进行ELISA跟踪检测，结果如下：

表3 免疫后各组试验猪免疫抗体检测结果

图2 连续采样监测猪免疫抗体阳性变化情况

各试验组HPRRS群体免疫抗体阳性率检测结果和连续采样监测猪免疫抗体ELISA试验IRPC值显示，PRRS母源抗体为阳性的免疫试验A组，在免疫后14d至28d期间，IRPC值均有一个下降过程，部分猪转为阴性，阳性率低于100%，然后至免疫后60d，IRPC值出现回升，前期转为阴性的试验猪又全部转为阳性，阳性率回升至100%；PRRS母源抗体为阳性的不免疫对照B组，在同批试验14d后出现下降，至60d全部转为阴性；PRRS母源抗体为阴性的免疫试验C组，在免疫14d后出现上升，至60d全部转为阳性；PRRS母源抗体为阴性的不免疫对照D组，在同批试验期间，始终保持阴性。

3 讨论

（1）疫苗免疫必须考察母源抗体的干扰影响。本次试验，有PRRS母源抗体的试验猪，免疫HuN4-F112株PRRS弱毒活疫苗后14d开始检出PRRSV变异株阳性，而同期不免疫对照组均无检出，说明疫苗在机体内得到有效增殖。血清抗体检测结果显示，有PRRS母源抗体的试验猪，群体抗体阳性率和连续采样监测PRRSV抗体检测IRPC值均呈现先降低后升高的态势，而同期有PRRS母源抗体的不免疫对照组则表现为只降不升的态势，说明疫苗有效刺激机体产生了免疫应答。同时，有PRRSV母源抗体的试验猪，免疫HuN4-F112株PRRSV弱毒活疫苗后，群体抗体阳性率经过降低后又回升到100%，说明HuN4-F112株PRRSV弱毒活疫苗免疫母源抗体阳性猪，可以突破母源抗体干扰，达到有效免疫保护。

（2）当前用于PRRS免疫的弱毒活疫苗还有JXA1-R株和TJM-F92株，这2种疫苗能否突破母源抗体的干扰，需要进一步试验研究。

（3）PRRS不仅致病力强，对生猪生产安全构成严重威胁，同时，该病还是一个免疫抑制性疫病[3]，该病的发生和病原侵袭都会破坏口蹄疫、猪瘟等其他疫病的免疫，导致免疫失败。因此，生猪免疫可以充分利用HuN4-F112株PRRSV弱毒活疫苗可以突破母源抗体干扰，刺激机体产生免疫保护的特性，尽早实施PRRS免疫，一方面减少PRRS野毒侵袭，减少其他疫病免疫失败的发生，另一方面也可以规避PRRS免疫与其他疫病免疫的相互干扰，为生猪主要疫病免疫的科学组织赢得了时机。

[1]宋李杰.高致病性猪蓝耳病[A].南京农业大学畜牧兽医学术年会[C].2009：124.

[2]Tian K，Yu X，Zhao T，et al.Emergence of fatal PRRSV variants：unparalleled outbreaks of atypical PRRS in China and molecular dissection of the unique hallmark[J].PloS one，2007，2（6）：e526.

[3]杨汉春.猪免疫抑制性疾病的流行特点与控制对策[J].中国畜牧兽医，2004，31（5）：41-43.