复方甘草酸苷对趋化因子受体CCR3、CCR5在过敏性紫癜患儿中的表达

张小霞 ，任妹，吴俭

(1、江西省萍乡市人民医院，萍乡 337000；2、南昌大学第一附属医院儿科，南昌 330006)

过敏性紫癜（anaphlactoid purpumra）是以小血管炎为主要病变的系统性血管炎[1]，其发病与T细胞免疫功能紊乱有关[2]，表现为 Th1/Th2 失衡[3，4]，Th2优势表达。已有研究报道，复方甘草酸苷对HSP有免疫调节作用。本文通过复方甘草酸苷治疗HSP，并检测HSP患儿治疗前后的趋化因子受体CCR3、CCR5的水平，来探讨复方甘草酸苷对HSP的疗效。

1　资料与方法

1.1研究对象2016年5月-2017年3月我院收治的HSP患儿40例，年龄4-12岁，根据就治顺序编号，采取随机数字表法分为治疗组和对照组2组，每组各20例。其中对照组男10例，女10例，治疗组男10例，女10例，对照组单纯型8例，腹型5例，关节型5例，混合型2例；治疗组单纯型7例，腹型6例，关节型4例，混合型3例。两组在年龄、性别、等一般资料无统计学意义，采用症状评分法评定病情严重程度。入选标准：⑴符合第7版《儿科学》HSP诊断标准；⑵首次发病；⑶无自身免疫性疾病；⑷无严重感染；⑸治疗前均无免疫抑制剂应用；⑹对所用药物成分既往无过敏史；⑺出血时间、凝血时间及血小板计数均为正常；⑻排除紫癜性肾炎或肾型。各组患儿的年龄、性别无统计学意义（P＞0.05）。症状评分标准：参考Fessatou及有关报道[5]，予以修改，按下述3项进行评价，评分相加即为总积分。⑴紫癜分布：将紫癜分为5个部位，即双足和双小腿、双上肢、双大腿、腰臀及其他部位；无皮损为0分，1个部位受累为1分，2个部位受累为2分，3个及其以上部位受累为3分。⑵腹部症状和（或）大便常规隐血：无腹痛为0分；轻微腹痛和（或）大便常规（+）为1分；中度腹痛和（或）大便常规（++）为 2分；重度腹痛和（或）大便常规（+++）为3分。⑶关节症状、体征：无关节痛为0分；关节痛和（或）轻微肿胀（正常行走）为1分；关节痛和（或）轻微中度肿胀（跛行）为2分；关节痛和（或）重度肿胀（抗拒行走）为3分。疗效判定标准：⑴临床痊愈：症状和皮损完全消失；⑵显效：症状消失，皮损消退≥80%；⑶有效：症状明显减轻，皮损消退≥30%；⑷无效：症状改善不明显，皮损消退＜30%。总有效率为痊愈加显效。治疗8d后进行疗效判定。临床观察指标：临床症状消失时间、不良反应。

1.2方法对照组患儿予以常规治疗，包括卧床休息，避免可疑过敏原，清除感染，钙剂、维生素C、西咪替丁静滴等。治疗组在常规治疗基础上静滴复方甘草酸苷 1-2mg/(kg·d)，1 次/d，最大量为 2mg/(kg·d)，治疗 8d。

1.3趋化因子受体CCR3、CCR5的测定 分别采集HSP患儿入院当天及治疗8d后 （试剂均购自深圳晶美生物工程有限公司上海分公司）清晨抽取静脉血2ml，用肝素抗凝后立即送检，4个试管中各加入100μl全血，均加入抗人CD4单克隆抗体 （美国Phar Minger公司出品）20μl；之后分别加入抗人FITC-CCR3单克隆抗体、同型阴性对照鼠IgG2a、抗人FITC-CCR5单克隆抗体、同型阴性对照鼠IgG2b各20μl（均为美国R&D System公司出品）。室温避光孵育20min，每管加入溶血剂（Caltag公司）100ul，室温避光孵育15min。加入1ml蒸馏水室温避光放置15min，待溶血完全后离心（1500r/min，5min）；弃去上清，用PBS液混匀后上机检测（美国B.B公司的FACSCalibur流式细胞仪）。

1.4统计方法计量资料用均数±标准差 （x±s）表示。用SPSS 18.0软件分析，两组间差异比较使用单因素方差分析，对疗效的分析采用重复测量的方差分析；计数资料用相对量进行描述，差异比较使用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组过敏性紫癜比较，治疗组疗效显著高于对照组，治疗时间短于对照组，比较有统计学意义（P＜0.05），见表 1，表 2。

表1　治疗组和对照组临床效果的比较

表2　治疗组和对照组的症状、体征消失时间比较（d，x±s）

2.2治疗前，两组CCR3、CCR5水平 无统计学差异（P＞0.05）。

治疗后，两组CCR3水平均下降，CCR5水平均升高，对比治疗前，有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3　治疗前后治疗组和对照组CCR3、CCR5的比较

对治疗组和对照进行重复测量的方差分析，结果显示，P＜0.05，说明治疗组与对照组之间有统计学意义，治疗组的治疗疗效优于对照组。见表4。2.3两组均未见不良反应。

表4　疗效的重复测量的方差分析结果

3　讨论

CCR是近年来提出的新概念，是趋化因子或称趋化蛋白的受体，与趋化因子（一种具有趋化作用的细胞因子，在调控免疫细胞定向迁移中有着重要作用）结合后能激活各类白细胞，促进它们游走、聚集引起炎症反应。T细胞在特定组织中浸润，发挥特异性免疫效应的一个重要原因在于T细胞其表面趋化因子受体的表达。趋化因子受体与相应的趋化因子结合后介导Th细胞在不同的组织中迁移浸润，也是调节Thl/Th2优势性反应的重要因素。不同的趋化因子受体差异性地表达于Th1和Th2细胞表面，CCR5、CCR3分别特定性表达于Th1、Th2 细胞[6，7]。 本文采用 CCR5/CCR3 作为 Th1细胞/Th2细胞特异性的表面标志来测定Th1细胞及Th2细胞的数量，比较治疗前后的变化。

复方甘草酸苷是由0.2%甘草酸苷、0.1%半胱氨酸和2%的甘氨酸配制的复方制剂，具有较强的抗炎、抗病毒、免疫调节及对肝细胞膜的直接保护作用，其中甘草酸苷具有较强的稳定细胞膜、抑制肥大细胞、释放组织胺抑制局部反应、抑制花生四烯酸诱导的皮肤炎性反应等作用。同时还具有活化T细胞诱发干扰素Y，活化NK细胞增强胸腺外周血T细胞的分泌功能，发挥其免疫调节作用。本研究显示，治疗组临床症状、体征消失的时间明显缩短，且疗效显著优于对照组；治疗后CCR3水平降低，CCR5水平升高，对比治疗前差异有统计学意义 （P＜0.05），其中治疗组的差别显著大于对照组，证实了复方甘草酸苷治疗HSP疗效确切，作用机制可能是通过下调CCR3表达，上调CCR5表达，从而调节Th1/Th2失衡来发挥其免疫调节作用。且在本研究中，未发现不良反应。因此，治疗儿童过敏性紫癜，复方甘草酸苷是一种理想的辅助用药，具有很好的应用前景和临床价值。

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