血清CAM、GDF-15、ox-LDL在急性缺血性脑卒中患者中的变化及其与神经功能的关系

赵连江 亓法英 任 萍

(临沂市第三人民医院神经内科，山东 临沂 276000)

急性缺血性脑卒中时动脉栓子在血管内由近心端推移至远心端的过程中及治疗后血管再通时均会导致机体脑组织缺血发生再灌注损伤，从而引发脑细胞再损伤，加重病情〔1，2〕。因此，及时有效对老年急性缺血性脑卒中患者进行诊断和干预在减轻机体脑组织损伤、降低患者相关死亡的危险性中尤为重要。相关研究表示，血清标志物由于其便捷性、快速性，已被应用于评价神经系统疾病病情严重程度〔3〕。近年来研究显示，血清钙调蛋白(CAM)、血清生长分化因子(GDF)-15及血清氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)在急性缺血性脑卒中疾病中具有关键作用，可用于反映疾病进展，但其具体机制尚未明确〔4〕。本研究通过对急性缺血性脑卒中患者血清CAM、GDF-15及ox-LDL水平的观察，探讨其与病情之间的关系，并利用受试者工作特征(ROC)曲线分析诊断效能。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2016年1～12月临沂市第三人民医院接诊的经磁共振成像确诊为老年急性缺血性脑卒中患者80例。按照入院时美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分分为A组(≤15分)和B组(>15分)，各40例。纳入标准〔5〕：①所有患者符合全国第4届脑血管病学术会议通过的诊断标准；②首次发病；③无家族遗传史；④发病前无严重残疾；⑤对本研究均知情同意。排除标准：①患有心、肝、肾等重要器官性疾病；②合并脑出血；③近期有手术史、妊娠史、外伤史等；④患有严重内分泌疾病；⑤近期有降脂药物、炎症抑制药物等服用史；⑥资料不全者。另选择同期接受体检的健康志愿者40例作为对照组。所有受试者知情同意此研究，且研究已获得伦理委员会批准实施，三组一般资料见表1，且各指标差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 三组一般资料比较

1.2方法

1.2.1一般资料及标本采集 患者入院时对其年龄、体重、家族疾病史、生活习惯等进行了解，于次日晨起采集所有患者空腹静脉血进行血糖检测，同时检测患者肝、肾功能及相关生化指标。采集所有患者静脉血5 ml，经低温离心(3 000 r/min，10 min)后，提取血清置于冷冻箱内保存。

1.2.2血清CAM、GDF-15、ox-LDL水平检测 ①血清CAM水平检测：选择瑞士哈美顿公司生产的全自动酶标仪，采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测，试剂盒购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司；②血清GDF-15水平检测：采用ELISA法进行检测，试剂盒购自北京义翘神州科技有限公司；③血清ox-LDL水平检测：采用生物素双抗体夹心ELISA检测，试剂盒购自武汉默沙克生物科技有限公司。所有操作严格按照试剂盒说明进行。

1.2.3NIHSS量表评分〔6〕入院时对所有患者进行评分，内容包括意识水平、凝视、视野、上下肢运动、肢体共济失调、感觉、语言、构音障碍及忽视共11个项目，0～1分表示正常或近乎正常，15分以下为轻中度脑卒中，15～42为重度脑卒中，分数越高，则表示病情越严重。

1.3统计学方法 以SPSS18.0软件进行方差分析、t及χ2检验，相关性分析使用Pearson相关，采用ROC分析诊断效能。

2 结 果

2.1各组血清CAM、GDF-15、ox-LDL水平及NIHSS评分比较 A组、B组及对照组血清CAM分别为(235.26±61.85)ng/ml、(152.62±31.36)ng/ml、(87.85±22.32)ng/ml，差异有统计学意义(F=123.437，P<0.05)；A组、B组及对照组血清GDF-15分别为(967.22±75.28)pg/ml、(648.14±50.26)pg/ml、(417.14±47.03)pg/ml，差异有统计学意义(F=492.206，P<0.05)；A组、B组及对照组血清ox-LDL分别为(516.35±122.38)mg/L、(420.47±75.04)mg/L、(332.58±68.23)mg/L，差异有统计学意义(F=5.387，P<0.05)；A组、B组及对照组NIHSS评分分别为(23.25±3.36)分、(12.73±2.28)分、(1.05±0.69)分，差异有统计学意义(F=872.351，P<0.05)。

2.2急性缺血性脑卒中患者血清CAM、GDF-15、ox-LDL水平与NIHSS评分的相关性 血清CAM、GDF-15、ox-LDL水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.517，P<0.05，r=0.851,P<0.05，r=0.338，P<0.05)。

2.3血清CAM、GDF-15、ox-LDL水平对急性缺血性脑卒中的临床诊断价值 血清CAM预测急性缺血性脑卒中的ROC曲线下面积为0.824，95%CI为0.731～0.918，敏感度为72.71%，特异性为74.00%，准确率为78.94%；血清GDF-15预测急性缺血性脑卒中的ROC曲线下面积为0.876，95%CI为0.800～0.952，敏感度为71.23%，特异性为70.48%，准确率为76.25%；血清ox-LDL预测急性缺血性脑卒中的ROC曲线下面积为0.709，95%CI为0.594～0.824，敏感度为67.25%，特异性为58.43%，准确率为64.41%；联合诊断预测急性缺血性脑卒中的ROC曲线下面积为0.956，95%CI为0.913～0.998，敏感度为97.59%，特异性为88.36%，准确率为96.66%(均P<0.05)。

3 讨 论

我国新发脑卒中患者中60%～80%为缺血性脑卒中，且病残率高达76%，已严重威胁患者的生命安全〔7〕。因此，在对急性缺血性脑卒中的处理中，需早诊断、早治疗、早康复〔8〕。相关研究认为，急性缺血性脑卒中的发病机制有钙离子稳态失衡、炎症反应、氨基酸兴奋及蛋白酶激活等方面〔9〕，故对脑卒中患者血清相关细胞因子水平进行测定有助于了解其病情，并及时干预。

CAM属于真核生物细胞中的胞质溶胶蛋白，由148个氨基酸组成单条多肽，其相对分子质量为16.7 kD，存在于各种真核生物细胞内，是细胞内功能中最为重要的钙受体蛋白〔10〕。CAM作为Ca2+的受体蛋白，对神经细胞内钙超载有较为关键的调控作用，可对生物体内多种Ca2+依赖细胞功能及酶体进行调节，从而参与到疾病的进展过程中，在多种疾病的病理进程中Ca2+/CAM信号通路均有重要作用〔11〕。相关研究显示，CAM与高浓度的Ca2+相结合后，可有效激活CAM依赖性激酶Ⅱ，从而促进一氧化氮合酶的表达，加重血管损伤〔12〕。张芳等〔13〕对外伤性大鼠模型进行研究，发现其前额内侧皮质的Ca2+浓度会随着外伤性应激而增加，且高浓度的Ca2+会激活CAM信号转导通路，继而对记忆、行为等认知功能造成一定影响。以往关于CAM与急性缺血性脑卒中的相关研究较少，且多是局限于动物缺血再灌注模型的研究，其结果显示神经元细胞内Ca2+超载，继而引发CAM活性、含量均有所增加〔14〕。本研究中，急性缺血性脑卒中患者CAM呈明显上升，且CAM水平与NIHSS评分呈正相关，分析可能是与钙超载具有一定关系，因钙离子通过与CAM结合发挥生理病理作用，故钙超载会引发CAM表达的增高。

GDF-15是转化生长因子-β超家族成员之一，属于分泌蛋白，具有保护心脑血管、抗肿瘤、抗炎、促进凋亡等作用，在心肌缺血和缺血再灌注所引起的心肌损伤的病程中有所参与，可抗心肌肥厚〔15〕。因GDF-15对血细胞具有不依赖性，因此其表达较为稳定且容易检测。相关研究表明，在脑卒中小鼠模型中，GDF-15与脑卒中关系密切，当小鼠大脑中动脉被阻断24 h时，其GDF-15蛋白水平异常升高〔16〕。本研究中，急性缺血性脑卒中患者GDF-15水平明显上升，且与NIHSS评分呈正相关，分析可能与GDF-15的抗动脉粥样硬化、抗炎等作用机制相关。当机体发生缺血性脑卒中时，GDF-15因其具有调节器官生长及分化特点，从而在抑制机体的炎症反应中起到了重要作用，同时随着脑损伤的发生，其自我保护功能则会启动，机体会自动释放大量GDF-15，以抑制损伤后的炎症反应对脑组织进行再次损伤，因此病情越严重，GDF-15表达水平越高。

动脉粥样硬化斑块的不稳定性是急性缺血性脑卒中的发病机制之一，ox-LDL在动脉粥样硬化斑块的形成、发展及消失中具有重要作用〔17〕。ox-LDL是由自由基介导、细胞氧化LDL而形成，可通过巨噬细胞表示的SR-A被摄取，从而导致巨噬细胞内的胆固醇脂质颗粒逐渐聚集，形成团体，同时还会通过自身的毒作用对巨噬细胞进行刺激，诱导巨噬细胞集落刺激因子产生，进而导致巨噬细胞逐渐凋亡，直至转变为泡沫细胞〔18〕。泡沫细胞会因摄取的ox-LDL超出其清除能力而死亡，从而形成脂质斑块〔19〕。本研究中，急性缺血性脑卒中患者ox-LDL水平明显上升，且与NIHSS评分呈正相关，分析可能是ox-LDL水平表达升高，在诱导巨噬细胞凋亡转变为泡沫细胞的同时对组织因子、促凝血因子表达等均有所刺激，同时会导致内膜损伤进一步增厚，使得动脉出现狭窄或狭窄加重，继而导致动脉粥样硬化斑块的不稳定性上升，故ox-LDL表达水平越高，则表示病情越严重。

国外研究证实〔20〕，血清CAM、GDF-15、ox-LDL在急性缺血性脑卒中患者的疾病进展及预后均存在重要预测价值。本研究结果与之一致。

4 参考文献

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