中老年女性压力性尿失禁患者盆底组织转化生长因子-β1及雌激素受体的表达及临床意义

刘兆春 刘晓婉 赵 霞

(石河子大学医学院第一附属医院妇科，新疆 石河子 832000)

压力性尿失禁(SUI)是尿失禁中最常见的类型，约占尿失禁患者总数的49%〔1，2〕。由于男女尿路解剖结构不同，SUI患者绝大部分为女性，且多为绝经后的女性。女性在绝经后生理上最大的改变为卵巢功能明显下降，同时其雌激素分泌量也明显降低，进而导致一系列的代谢紊乱，雌激素受体(ER)在其中发挥了重要的作用，因此可以推测绝经期的女性发生SUI可能与ER的变化有关〔3〕。转化生长因子(TGF)-β1是一种具有调节细胞生长和分化功能的蛋白肽，能促进合成以胶原为主的间质蛋白质。Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)是筋膜、皮肤、肌键中的主要成分，其含量可影响盆底结构。相关研究显示〔4〕，TGF-β1能增加体外培养细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达，另有研究显示〔5〕，SUI的发生与Ⅰ型和Ⅲ型胶原的含量有关，因此可以推测TGF-β1可能影响了SUI的发生发展。本研究通过探讨中老年女性SUI患者盆底组织TGF-β1及ER的表达及临床意义，进一步研究SUI的发生发展机制。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2015年5月至2017年6月在石河子大学医学院第一附属医院接受治疗的中老年女性SUI患者200例作为SUI组，纳入标准：(1)均符合《压力性尿失禁的诊断》中相关标准〔6〕；(2)年龄≥40岁；(3)临床病历资料齐全。排除标准：(1)近3个月内服用过激素类药物者；(2)合并有严重器质性疾病者；(3)患有恶性肿瘤者。选取同期收治的盆腔脏器脱垂(POP)患者50例纳入POP组，另外选取无POP的良性子宫病变患者50例纳入对照组，两组均无尿失禁症状。三组患者一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。具有可比性。研究对象对本次研究涉及内容均知情同意，且本研究获医院伦理委员会审批通过。

表1 三组年龄、产次、体质量指数(BMI)比较

1.2方法

1.2.1组织标本 对照组和POP组患者在进行阴式子宫切除术或开腹子宫切除术时获取阴道前壁12点处组织，SUI组患者在进行经阴道无张力尿道中段悬吊术或Burch手术时获取阴道前壁12点处组织。用生理盐水冲洗离体后组织上的血迹，之后将其置入10%甲醛液中固定24 h，再进行脱水、石蜡包埋、切片处理。

1.2.2苏木素-伊红(HE)染色 采用二甲苯对组织切片进行脱蜡处理，后置于梯度酒精中HE染色约10 min，置于分化液盐酸乙醇30 s，水洗终止分化。用自来水浸泡返蓝5 min，伊红复染3 min，后用自来水冲洗，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，镜检。

1.2.3免疫组化法检测ER、TGF-β1、Collagen I的表达 采用60℃恒温烤箱对切片进行融蜡，二甲苯脱蜡，后置于梯度酒精中，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次，每次3 min，0.3%过氧化氢孵育10 min，PBS冲洗3次，每次3 min，置入枸橼酸盐缓冲液中进行抗原修复，PBS冲洗3次，每次3 min，滴加牛血清白蛋白(BSA)封闭20 min，滴加稀释好的一抗(兔抗人TGF-β1多克隆抗体、鼠抗人ER多克隆抗体，鼠抗人Collagen I多克隆抗体)，4℃过夜。PBS冲洗3次，每次3 min，二氨基联苯胺(DAB)显色，在显微镜下对显色情况进行观察，显色结果满意后终止反应，自来水冲洗，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，镜检。

1.3判断标准 在400倍高倍镜下观察每张切片的细胞染色情况。TGF-β1阳性着色为胞质或胞膜呈棕黄色，计算每组切片中阳性细胞的占比，若阳性细胞≤10%判为阴性(-)；若阳性细胞在11%～30%则判为弱阳性(+)；若阳性细胞在31%～70%判为阳性()，若阳性细胞>70%判为强阳性()，阳性表达率=〔(+)例数+()例数+()例数〕/总例数×100%。ER阳性着色为细胞核呈棕黄色，由于ER阳性细胞少，均以同种细胞中ER阳性率表示染色情况。以乳腺癌作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。Collagen I阳性着色为胞质呈黄色，利用图像分析仪测量其灰度值。

1.4统计学方法 应用SPSS19.0软件，计数资料采用χ2检验，计量资料三组比较采用单因素方差分析，采用Spearman相关性分析研究ER、TGF-β1、Collagen Ⅰ的相关性。

2 结 果

2.1三组TGF-β1、ER阳性率比较 SUI组TGF-β1阳性率为22.00%(44例)，且均为+；POP组TGF-β1阳性率为18.00%(9例)，且均为+；对照组TGF-β1阳性率92.00%，+11例，22例，13例。SUI组、POP组TGF-β1阳性率低于对照组(P<0.05)，SUI组和POP组之间TGF-β1阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。SUI组、POP组、对照组的ER阳性率分别为0.50%(1/200)、2.00%(1/50)、4.00%(2/50)，SUI组、POP组ER阳性率低于对照组，差异有统计学意义(χ2=3.014，2.810；P=0.014，0.032)，SUI组和POP组之间ER阳性率比较差异无统计学意义(χ2=1.862，P=0.089)。

2.2三组Collagen Ⅰ灰度值比较 SUI组、POP组及对照组的Collagen Ⅰ灰度值分别为(96.36±0.31)、(98.61±0.40)、(101.14±0.24)，SUI组、POP组的Collagen Ⅰ灰度值低于对照组，差异有统计学意义(t=4.151，3.742，P=0.015，0.023)，而SUI组和POP组之间的Collagen Ⅰ灰度值比较差异无统计学意义(t=2.018，P=0.083)。

2.3ER与Collagen Ⅰ相关性分析 ER与Collagen Ⅰ表达呈正相关(r=0.267，P=0.028)。

3 讨 论

SUI是泌尿外科常见的老年性疾病，同时常合并POP〔7〕。国际尿控协会(ICS)将SUI定义为一种在进行大笑、咳嗽、喷嚏或提重物等腹压增高活动时出现不自主的尿液溢出的疾病〔8〕。SUI虽然不会对患者的生命构成威胁，但会对患者日常活动造成严重的影响，并可导致患者出现抑郁、焦虑、自尊感下降等心理疾病。女性盆底主要由封闭骨盆出口的肌肉和筋膜组成，当尿道支持系统及括约肌关闭系统异常时将会出现控尿问题，同时完整的下尿路神经纤维支配也对控制排尿有重要的作用，因此SUI患者常伴有膀胱括约肌或神经功能受损〔9〕。绝经后的女性SUI发生率明显高于未绝经的女性，这提示SUI的发生与雌激素及其受体ER有关〔10〕。相关研究结果显示〔11〕，SUI女性患者的盆底支持组织胶原蛋白含量明显降低，使得盆底支持组织出现弹性下降，盆底肌收缩功能异常，出现盆底松弛。TGF-β1是一种关键性的生长因子，可抑制胶原酶等金属蛋白酶的分泌，同时增加金属蛋白酶抑制剂的活性，进而抑制胶原降解。因此，TGF-β1水平可直接影响盆底支持组织的功能，进而影响SUI发生与发展〔12〕。

本研究结果显示，SUI和POP的发生或与TGF-β1、ER含量降低有关。对上述结果进行分析，雌激素通过与ER发生作用，能改善盆底血液循环、促进盆底组织修复、增加盆底肌力等。中老年女性由于卵巢功能减退，导致雌激素含量降低，出现盆底血供减少，阴道黏膜上皮退化，盆底肌肉组织退化萎缩，尿道上皮萎缩，黏膜下血管减少，上述变化综合导致尿道闭合障碍，进而发生SUI〔13〕。康建萍等〔14〕的研究表明，妊娠晚期SUI患者孕激素受体(PR)和ER的含量低于无尿失禁者，这与本研究结果类似，同时也说明PR的含量也与SUI有关。TGF-β1隶属具有调节细胞生长和分化能力的TGF-β家属，能促进胶原合成，增加以胶原为主的间质蛋白质合成，并且可以影响平滑肌中Smad2及基质金属蛋白酶的表达，从多个方面影响盆底组织的功能〔15〕。SUI患者盆底组织中的TGF-β1含量降低，可导致盆底组织中的总胶原蛋白含量降低，出现盆底组织松弛，无法维持正常尿道闭合压，出现尿失禁〔16〕。本文结果说明SUI患者盆底组织的Collagen Ⅰ含量较低，筋膜、皮肤、肌键、韧带中均富含Collagen Ⅰ，胶原的总含量、构成可影响盆底结缔组织的张力和松弛性，进而影响到尿道闭合功能。因此，SUI的发生与Collagen I含量降低有直接的关系。本研究结果说明二者存在一定的联系，通过协同作用影响SUI的发生与发展，但其联系的内在机制还有待进一步研究。

4 参考文献

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