葛根素对糖尿病性白内障大鼠模型病情进展的影响

张 剑 韩方菊

(佳木斯大学附属第一医院眼科，黑龙江 佳木斯 154002)

糖尿病临床上以高血糖为主要指标，可导致多器官系统损害，尤其以眼、心脏、神经、血管、肾损伤最多见〔1〕。糖尿病性眼病最常见类型是白内障，它可致患者视力减退，直至失明。目前糖尿病性白内障的治疗策略仍以手术为主，但对于不适于手术治疗的患者，给予相应药物以延缓糖尿病性白内障进程就显得格外重要。葛根素是从葛根中分离提取而成的一种中药成分，主要活性成分为葛根黄酮，具有广泛的生物活性〔2〕。本实验分析葛根素治疗对糖尿病性白内障大鼠体重、血糖及晶状体前囊膜肿瘤蛋白(P53)表达的影响及作用机制。

1 材料与方法

1.1实验动物、材料及试剂 清洁级Wistar 雄性大鼠30只〔体重(180±10)g，北京维通利华〕；链脲佐菌素(STZ)，美国Sigma；葛根素(浙江康恩贝制药)；P53抗体(美国Santa Cruz公司)；β-actin和辣根过氧化物酶标记二抗(北京中杉金桥)。

1.2动物筛选 实验前Wistar雄性大鼠进行以下两项指标检测，达到者具备造模标准，不符合任一指标者弃用：①散瞳后裂隙灯检测确认晶状体透明度正常；②空腹采尾静脉血，测得血糖浓度<16.7 mmol/L。

1.3模型制备与葛根素干预 将实验大鼠随机分成对照组、模型组和葛根素治疗组各10只。大鼠禁食 24 h后，模型组和葛根素治疗组一次性腹腔注射柠檬酸缓冲液(0.1 mmol/L)配置的STZ(60 mg/kg)；对照组则仅腹腔注射柠檬酸缓冲液。模型组和葛根素治疗组于STZ注射后72 h，空腹采尾静脉血测量血糖浓度，血糖浓度≥16.7 mmol/L为造模成功，<16.7 mmol/L者弃用。成模后葛根素治疗组每日腹腔注射葛根素(140 mg/kg)，对照组和模型组每日腹腔注射等量生理盐水。

1.4Western印迹 将晶状体前囊膜浸入预冷磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤；加入组织裂解液后用匀浆器匀浆、离心，测定蛋白浓度后取50 μg总蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)并转膜；5%脱脂奶粉37℃封闭1 h；PBS-吐温(PBS-T)洗膜3次×6 min；P53抗体(1∶100)和β-actin抗体(1∶1 000)4℃冰箱过夜；PBS-T洗膜3次×6 min；二抗(1∶10 000)37℃反应30 min；PBS-T洗膜5次×8 min；显影液显色后于凝胶成像系统中拍照、分析；用P53与β-actin光密度值之比代表各样本P53相对表达量。

1.5统计分析 应用SPSS19.0软件进行q检验。

2 结 果

2.1实验后各组体重变化 实验后4、8和12 w， 与对照组比较，模型组和葛根素治疗组体重显著降低(P<0.01)；实验后8和12 w， 与模型组比较，葛根素治疗组体重显著升高(P<0.05)。见表1。

2.2实验后各组血糖水平 实验后4、8和12 w， 与对照组比较，模型组和葛根素治疗组血糖水平显著增高(P<0.01)；实验后8和12 w， 与模型组比较，葛根素治疗组血糖水平显著降低(P<0.05)。见表2。

表1 实验后各组体重变化

与对照组比较：1)P<0.01;与模型组比较：2)P<0.05；表2同

表2 实验后各组大鼠的血糖水平

2.3晶状体P53表达量 实验后12 w，对照组、模型组和葛根素治疗组晶状体前囊膜P53表达量分别为0.56±0.09、1.13±0.15和0.71±0.11。对照组显著低于模型组和葛根素治疗组(P<0.01)，模型组显著高于葛根素治疗组(P<0.05)。见图1。

图1 各组晶状体P53蛋白相对表达量

3 讨 论

糖尿病性白内障发生机制是长期高血糖状态引发晶状体微循环发生改变，代谢异常和透明性降低〔3〕。晶状体上皮细胞主要存在于晶状前囊膜中，具有维护晶状体透明性和维持内环境稳定等重要功能〔4〕。Li等〔5〕研究表明，人类和动物非先天性白内障发生的细胞学基础是晶状体上皮细胞凋亡。作为一种肿瘤抑制基因，P53的两种类型，野生型和突变型分别具有细胞凋亡的促进和抑制作用，上调B淋巴细胞瘤-2相关X 蛋白(Bax)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)基因表达、增加Bax/Bcl-2比值是野生型P53发挥促凋亡的重要途径之一〔6，7〕。万丽等〔8〕研究发现，糖尿病大鼠晶状体可检测到P53、Bax表达上调和Bcl-2蛋白表达下调，提示P53诱导的细胞凋亡在糖尿病性视网膜病变中发挥重要作用。葛根素是从葛根中分离提取而成的一种中药成分，主要活性物质为黄酮类化合物葛根黄酮，具有增强免疫力，减轻炎症反应、保护心肌、降血糖、降血压，降血脂、抗血小板聚集、抗氧化应激等多种功效〔2〕。本研究结果可见，葛根素可经改善胰岛素抵抗状态及抑制晶状体上皮细胞凋亡而发挥延缓糖尿病性白内障进程的作用。

4 参考文献

1付文亮，付秀美，和亚强，等.生长激素/胰岛素样生长因子-1轴与糖尿病研究进展〔J〕.中国老年学杂志，2010;30(19):2869-72.

2罗 春，步世忠，王福艳.葛根素治疗2型糖尿病的药理机制和临床进展〔J〕.基础医学与临床，2016;36(11):1582-5.

3马来玉，李莎莎.超声乳化白内障术后高眼压患者的护理田〔J〕.中华现代护理杂志， 2012;15(35):4272-3.

4张 婧，陈垠衫，王思玲.白内障动物模型的建立及评价参数的研究进展〔J〕.沈阳药科大学学报，2008;25(8):674-8.

5Li WC，Kuszak JR，Dunn K，etal.Lens epithelial cell apoptosis appears to be a common cellular basis for non-congenital cataract development in humans and animals〔J〕.J Cell Biol， 1995;130(1):169-81.

6金子夜，王心淼，郜青叶，等.老年性白内障和糖尿病性白内障晶状体上皮细胞的超微结构改变及凋亡相关基因的表达〔J〕.中国临床保健杂志，2015;18(5):483-5.

7张晓岩，张先钧，贾 炜，等.西红花苷对急性高海拔低氧条件大鼠脑海马P53表达及凋亡的影响〔J〕.中国老年学杂志，2017;37(1):1-3.

8万 丽，刘文斌，沈烨宇，等.链脲佐菌素诱导糖尿病性大鼠白内障的氧化应激-细胞凋亡机制及葛根素的改善作用〔J〕.国际眼科杂志，2014;14(10):1773-5.