明目疏脉片对鼠抗血栓、抗凝血、扩张血管的作用

魏 丹 韩 宁 高林林 蔡文瑞 王兆华 李亚萍 刘早霞

(吉林大学第二医院眼科中心，吉林 长春 130031)

明目疏脉片主要用于治疗视网膜动脉硬化、血管阻塞等眼缺血性疾病及脑血管缺血性疾病等。本文对明目疏脉片的主要药效学进行研究。

1 材料与方法

1.1仪器 紫外光可见光分光光度计UV-2000(上海尤尼克),高速冷冻离心机TGL-16G(上海安亭),恒温水浴振荡器DKZ-2B(上海一恒),DHG-9053A型鼓风干燥箱(上海一恒),体外血栓形成仪DY-S5(北京宇华国际技术公司)。

1.2试药 明目疏脉片由当归、桃仁、赤芍、红花、熟地、川芎、枸杞、菟丝子、丹参、白蒺藜组成，0.3 g/片，为本课题组研制，批号070401。临用前用蒸馏水配成含生药0.2 g/ml混悬液。和血明目片，0.3 g/片，批准文号国药准字Z20025067，西安碑林药业股份有限公司，批号070901；血纤维蛋白原(批号140626-200608)、凝血酶(批号140626-200608)购自中国药品生物制品检定所；其他试剂均为国产分析试剂。

1.3动物 昆明种小鼠,雌雄各半,体重18～22 g;Wistar 大鼠,雌雄各半,体重180～220 g,购自长春生物制品研究所有限责任公司，生产许可证号：SCXK(吉)-2011-0003，合格证号：201600011928。

1.4方法

1.4.1凝血时间检测〔1,2〕小鼠50 只,随机分为5 组,每组10 只，为对照组(同体积生理盐水)，阳性组(和血明目片1.0 g/kg)，低、中、高剂量组(明目疏脉片0.5、1.0、2.0 g/kg)。每组每天灌胃给药1次，共7 d，末次灌胃给药1 h 后,抽血1 ml，放进试管，37℃水浴3 min，检测血液凝固时间。

1.4.2凝血酶原时间检测〔2〕大鼠50 只,随机分为5 组,每组10只，为对照组(同体积生理盐水)，阳性组(和血明目片1.0 g/kg)，低、中、高剂量组(明目疏脉片0.5、1.0、2.0 g/kg)。每组每天灌胃给药1次，共7 d，末次灌胃给药1 h后,取血，加柠檬酸钠(0.10 mol/L)抗凝,混匀,3 000 r/min离心15 min,取上清按文献〔2〕方法进行。拿试管3只，每管放血浆、0.025 mol/L的CaCl2及兔脑浸出粉各0.1 ml，37℃恒温水浴，同时开始计时，记录液面不再变动时间，计算3管的时间平均值，计算凝血酶原时间。

1.4.3纤维蛋白原含量测定 将1.4.2中大鼠血浆加入离心管中,56℃加温10 min,3 000 r/min离心10 min,按Bradford 法〔3〕测定血纤维蛋白原含量。

1.4.4血凝块的溶解率计算〔4〕取小鼠血1 ml，凝结后，用生理盐水洗60 min后，将凝块烘干称重为W。另用同样方法取血漂洗，将凝块直接加入试管中，明目疏脉片给药组分别加明目疏脉片2 ml(0.8、0.4、0.2、0.1 mg/ml),阳性组放入等体积和血明目片2 ml(0.2 mg/ml),对照组加等体积生理盐水。于37℃保温1、2、4、6、8 h后，将凝块取出，用生理盐水洗60 min后，烘干称重为G，按下式计算血凝块溶解率。血凝块溶解率(%)=〔(W-G)/W〕×100%。

1.4.5体内血栓形成溶解实验 大鼠分组与给药同1.4.2。各组每天灌胃给药1次，共7 d，末次灌胃给药1 h后,各组腹腔注射3% 戊巴比妥钠(1 ml/kg)麻醉,电刺激大鼠颈动脉以形成血栓,检测血栓形成时间。

1.4.6体外血栓形成实验 大鼠分组给药同1.4.2，末次灌胃给药1 h后,3% 戊巴比妥钠(1 ml/kg)腹腔注射麻醉,沿腹中线打开腹壁,腹主动脉抽血约1.8 ml,加进硅化胶管中,将胶管两端对接紧密,放入血栓形成仪中,37 ℃恒温15 min,拿出胶管中血栓置于滤纸上,吸净表面血液,测血栓长度、湿重、干重,并记录。

1.4.7改善微循环、扩张血管作用 小鼠分组与给药同1.4.1。每组每天灌胃给药1次，共7 d，末次灌胃给药1 h后,3 % 戊巴比妥钠(1 ml/kg)腹腔注射麻醉,用WX-7533型多部位微循环生物显微镜(80倍)观测给药前后小鼠耳廓静脉直径及血液流态。以每只小鼠给药前后变化做自身对照。

1.5统计学分析 应用SPSS22.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1各组凝血时间、凝血酶原时间、纤维蛋白原含量、血凝块溶解率、血栓形成时间比较 与对照组比较，阳性组，高、中、低剂量组凝血时间、凝血酶原时间、血栓形成时间均显著延长(P<0.05,P<0.01,P<0.001)；纤维蛋白原含量显著降低(P<0.05,P<0.01)；见表1。对照组、阳性组、明目疏脉片0.8 mg/ml、0.4 mg/ml、0.2 mg/ml、0.1 mg/ml组血凝块溶解率分别为：(14.87±1.98)%、(25.94±3.01)%、(35.96±4.75)%、(31.65±4.11)%、(29.87±3.87)%、(25.81±3.13)%。与对照组比较，其余5组血凝块溶解率均显著升高(P<0.05，P<0.01，P<0.001)。

表1 各组凝血酶原、凝血时间、血栓形成时间、纤维蛋白含量比较

与对照组比较：1)P<0.05,2)P<0.01，3)P<0.001；下表同

2.2各组血栓湿重、干重、长度比较 与对照组比较，阳性组、高、中、低剂量组血栓湿重、干重、长度均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。见表2。

表2 各组血栓湿重、干重、长度比较

2.3各组耳廊静脉血管直径比较 见表3。给药后小鼠耳廓静脉血流由粒流变为线流增多，流速加速，血流量显著增加。明目疏脉片高、中、低剂量组给药后静脉血管直径差值显著高于对照组(P<0.05,P<0.001)。明目疏脉片对小鼠耳廓血管具有扩张、增进血流量及改进微循环作用。

表3 各组耳廓静脉血管直径比较

3 讨 论

本研究证明，明目疏脉片低、中、高剂量组均能明显增加小鼠、大鼠凝血酶原时间；并且同剂量时，与和血明目片相比，作用略强。明目疏脉片具有较好的溶解血凝块作用，强于和血明目片〔5〕。明目疏脉片能显著减少大鼠体外血栓长度，降低血栓的湿重及干重，显著延长大鼠颈动脉血栓形成时间，与和血明目片相比，作用略强，说明明目疏脉片具有明显抗血栓作用。本实验初步探讨明目疏脉片抗血栓作用机制，可能为明目疏脉片能减低纤维蛋白原含量,抑制血液凝固过程，从而抑制血栓的形成。和血明目片是目前眼科临床上常用的促进玻璃体腔积血吸收、扩张视网膜微血管增加视网膜供血供氧作用的药物，根据我们实验结果，明目舒脉片可较和血明目片有更明显的抗血栓和扩张血管作用。

4 参考文献

1Zhang YL,Xi MZ,Choi YB,etal.Antithrombotic effect of fermented ophiopogon japonicus in thrombosis-induced rat models〔J〕.J Med Food,2017;20(7):637-45.

2徐淑云.药理学实验方法学〔M〕.北京:人民卫生出版社,2001:1270.

3Bradford MM.A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding〔J〕.Anal Biochem,1976;72:248-54.

4付晓春,李少鹏,汪小根,等.荭草苷的抗血栓作用研究〔J〕.中国药房，2006;17(17):1292-4.

5陈 修，陈维洲，曾贵云.心血管药理学〔M〕.第2版.北京：人民卫生出版社，1997:570.