蒙药牛胆粉与荜茇提取物滴丸制备方法及药效学研究△

金 亮 毕力格 李汉青 范晓红 斯庆格

(内蒙古国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特 010065)

牛胆汁是牛科动物黄牛或水牛的胆汁。牛胆汁的药用，始载于汉代的《神农本草经》一书，列为中品。本品味苦性寒，具有清肝明目，利胆通肠，解毒消肿之功效，广泛用于治疗肝热目赤肿痛，小儿惊风，痈肿疮毒及便秘及消渴等疾病。牛胆粉(干燥胆汁)也为蒙药药材，具有平息协日、愈伤、解毒、明目之功效。蒙医临床用于协日病、配毒症疗效显著[1]。牛胆汁中含有多种胆酸类化学成分，其中包括鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸及猪去氧胆酸。

荜茇来源为胡椒科植物荜茇Piper Longum L.的干燥近成熟或成熟果穗，味辛，性温。蒙医用来调理胃火，祛巴达干、赫依，调理体素、滋补强壮、止痛。荜茇含有酰胺类生物碱、挥发油、脂类等成分，荜茇生物碱类分别为胡椒碱、几内亚胡椒碱、胡椒次碱、胡椒新碱、墙草碱、胡椒环碱等。荜茇主要具有调血脂、解热抗炎、镇痛、抗血小板聚集、改善动脉粥样硬化、降血压、抗菌、镇静、抗氧化、降血脂等作用[2]。

荜茇与牛胆粉配伍是经处方优化形成。本文对此制成滴丸，以便适应医药市场需求。

1 仪器与材料

聚乙二醇4000、聚乙二醇6000(PEG4000、PEG 6000，天津市大茂化学试剂厂)DY-201-100硅油、DY-201-350硅油(山东大易化工有限公司)，液体石蜡(上海大场化工厂)。

TDSJ-A型台式多功能实验滴丸剂(北京正大绿洲制药有限公司)，Sartorius BT25S电子天平，d=0.01mg，(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)

2 方法

称取600g牛胆粉，放入三角瓶中，加入1.2L的95%乙醇，封盖，放入超声波中提取，超声波温度30℃，时间30min，功率70%，每次提取1h，提取3次，每次超声提取结束后，提取液上加适量乙酸乙酯放置30min沉淀，等提取液沉淀后过滤，最后合并过滤液，回收浓缩，冷冻干燥得496g牛胆粉备用。

496g牛胆粉冻干粉加适量40%乙醇超声溶解，将层析柱里处理好的树脂1kg，缓慢加入40%乙醇牛胆粉溶液，吸附解析洗脱，收集60%和80%乙醇洗脱液，过滤，浓缩，冷冻干燥得产品。60%乙醇洗脱液冻干粉29.897g，80%乙醇洗脱液冻干粉21.182g。

荜茇有效部位的提取受乙醇浓度、溶剂用量、提取次数、提取时间等因素影响，本实验采用水-乙醇为提取溶剂，选用乙醇浓度(为体积百分比)为因素A(35～95%)，提取时间为因素B(1～3h)，提取次数为因素C(1～3次)，溶剂用量为因素D(6～10倍)。提取方法用L9(34)正交表安排实验方案，平行2次实验。计算100g药材提取胡椒碱量为评价指标，最佳提取工艺：65%乙醇，提取2h，提取次数为3次，溶剂用量为6倍。提取液50～65℃下减压浓缩，至无醇味，浓缩物冷冻干燥，-40℃或-86℃超低温预冻，冷冻干燥时间为24～30h，得到荜茇提取物。

选择几种合适的树脂进行动态吸附实验研究。分别称取处理好的、HPD-100、HPD-750、HPD-722、SIP1300、X-5型号的大孔吸附树脂各100g，分别装柱，精密量取荜茇提取物20%～40%乙醇溶液，上样，控制流速3～8mL/min，预吸附10～40min，然后3～5BV纯净水洗去颜色，再用20～95%乙醇梯度洗脱，收集各部位洗脱液，50～65℃下减压浓缩，至无醇味，浓缩物冷冻干燥，-40℃或-86℃超低温预冻，冷冻干燥时间为24～30h，得到各洗脱部位。紫外分光光度法测树脂中各洗脱部位荜茇总生物碱含量，HPLC法检测各洗脱部位胡椒碱含量。

称取D001大孔吸附树脂2kg，湿法装柱，加95%乙醇浸泡24h以上，95%乙醇洗至出口洗涤液在试管中加3倍量水不显浑浊为止，后用清水充分淋洗至无明显乙醇气味。使其液面高于树脂层约10cm处，用3BV的3%～5%HCl以4～6BV/h的流速通过树脂柱，并浸泡2～4h，而后用水以同样流速洗至流出液呈中性。用相同体积的3%～5%的NaOH以4～6BV/h的流速通过树脂柱，并浸泡2～4h，而后用水以同样流速洗至流出液呈中性，备用。柱高43cm，直径9cm，柱体积2734mL。称取荜茇提取物1365g，20%～40%乙醇溶解，紫外分光光度法测定荜茇总生物碱含量3.1mg/mL，上样流速50mL/min。预吸附30min，然后5BV40%乙醇洗去颜色，再用80%乙醇洗脱10BV，收集洗脱液， 50～65℃下减压浓缩，至无醇味，冷冻干燥，-40℃或-86℃超低温预冻，冷冻干燥时间为24～30h，得到荜茇有效部位42.2g。

样品测定：取树脂60%、70%和80%洗脱部位冻干粉，平行3份，精密称定，流动相溶解，注入色谱仪，测定，根据标准曲线求出胡椒碱含量，计算荜茇生物碱有效部位中荜茇总生物碱和胡椒碱百分含量，各树脂洗脱部位荜茇总生物碱含量为荜茇总生物碱百分含量为50%～95%，胡椒碱百分含量为50%～90%。

按照牛胆粉和荜茇复方提取物冻干粉(50:1～1:50)与聚乙二醇质量比1:2～8，将复方提取物冻干粉加入熔融的聚乙二醇(PEG6000)中，搅拌至混合均匀，得混合物。放置80℃水浴锅上溶解，以滴速25～50滴/min、滴距8～12cm，将熔融的混合物滴入冷凝液中，所述冷凝液为二甲基硅油运动粘度为100～350mm2/s，4～15℃冷凝成丸，收集滴丸，干燥，既得牛胆粉和荜茇蒙药组方配伍的滴丸。

3 牛胆粉和荜茇蒙药组方配伍药效实验

3.1 对大鼠胆汁分泌的影响：采用胆道插管法，取体重为180～200g雄性大鼠16只，随机分为两组，即空白对照组和给药组，每组8只雄性大鼠，空白组灌胃给予生理盐水羧甲基纤维素钠混悬液，给药组灌胃给予100mg/kg的牛胆粉和荜茇冻干粉，给药后30min，用20%乌拉坦麻醉，手术，插胆管，收集2h的胆汁分泌量。

实验结果说明，牛胆粉和荜茇冻干粉能明显增加大鼠胆汁的分泌量，见表1。

表1 牛胆粉和荜茇冻干粉对大鼠胆汁分泌的影响

3.2 对小鼠血清胆固醇的影响：采用高铁一硫酸显色法，取体重18～22g小鼠16只，随机分为两组，即空白对照组和给药组，各组8只小鼠，空白组灌胃给予生理盐水羧甲基纤维素钠混悬液，给药组灌胃给予300mg/kg的牛胆粉和荜冻干粉，连续给药4d。于最后一次给药后5h，摘除眼球取血，制备血清后，测定其胆固醇浓度。实验结果表明，给药组与空白对照组之间有显著差异，说明牛胆粉和荜茇配伍冻干粉对血清胆固醇有明显降低作用，见表2。

4 结论

牛胆粉(干燥胆汁)具有平息协日、愈伤、解毒、明目之功效。蒙医临床用于协日病、配毒症疗效显著。蒙医把荜茇定位为医治巴达干病类药物，认为其能祛巴达干、赫依、调理胃火、滋补强壮、祛寒温胃、利肺下气、祛痰、平喘。《无误蒙药志》中记载汉荜茇最大最好，鲜时味甘，性寒、重、柔，干品柔辣，消化后味甘，治龙病、培根病，哮喘，咳嗽。荜茇不仅有多种功效，也被作为香料或食品添加剂使用，主要因为其含有多种化学成分，至今报道有324个化合物。文献报道，荜茇酰胺类生物碱化合物是其主要药效成分，胡椒碱为荜茇生物碱含量较高的成分之一，是荜茇生物碱中具有代表性的活性成分，目前含有荜茇的蒙药制剂多以胡椒碱为指控评价指标。

本文牛胆粉和荜茇提取纯化工艺合理简单易操作，准确可行、分离度好、重现性好，适合于牛胆粉和荜茇及其制剂的质量控制。

牛胆粉和荜茇冻干粉滴丸制备工艺简单，滴丸的成型性和质量受滴速、滴距、药液及冷凝液温度等多种因素的影响,因此,优选滴丸制备工艺时，难于用某一个指标来衡量。

药效实验结果表明，牛胆粉和荜茇滴丸对大鼠有显著地利胆作用，能明显增加胆汁的分泌量；牛胆粉和荜茇滴丸对小鼠血清胆固醇浓度实验结果表明，给药组与空白对照组之间有显著差异，说明牛胆粉和荜茇配伍滴丸对小鼠血清胆固醇有明显降低作用。

[1]白万富，鞠爱华，杨乾，等.牛胆汁的化学成分及临床应用的研究进展[J].中华中医药杂志，2008，23(2)：149.

[2]包雪梅,那生桑,陆景坤.荜茇有效部位群调血脂作用研究[J].中国中药杂志,2013,38(6):909-913.