戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂盒在生鲜乳抗生素残留检测中的应用

文/崔晨光

（河北省石家庄市行唐县畜牧工作总站）

当前，随着人民生活水平的日益提高，对乳制品的需求量不断增加，促进了奶牛养殖业规模化的快速发展，生鲜乳及其制品已成为人们生活必不可少的食品之一。在奶牛养殖过程中，对奶牛疾病的治疗离不开抗生素的使用，经常被用来治疗奶牛的各种感染性疾病，而抗生素在代谢过程中可残留于生鲜乳中，如果人们饮用含抗生素残留的生鲜乳及其制品，也就相当于低剂量地摄入抗生素，从而破坏人体的正常机能，也易产生耐药性等问题，不利于人体健康和今后疾病的治疗。因此随着人们生活质量的提高和消费者食品安全意识的增强，在生鲜乳收购过程中，应加强对生鲜乳中抗生素的检测，将抗生素奶拒之门外。

河北省石家庄市行唐县作为奶牛养殖大县，基层单位在生鲜乳抗生素残留快速检测过程中最常用的为戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂盒（Delvotest®），该试剂由荷兰帝斯曼生产，是国际乳品联合会推荐的最适合中国国情用于生鲜乳的唯一的广谱检测方法，可检测到β-内酰胺类、磺胺类、四环素类、大环内酯类、氨基糖苷类、氯霉素等抗生素，其中对青霉素和磺胺类抗生素特别灵敏，是全球抗生素残留仲裁的“金标准”，其特点是灵敏度高、使用方便、结果可靠、经济有效、广谱检测。其原理是利用微生物嗜热芽胞菌在64 ℃条件下培养2.5～3.0 h后会产酸，引起指示剂BCP（溴甲酚紫）变为黄色，若牛生鲜乳中不含抗生素，培养后样品呈黄色；如有抗生素，嗜热芽胞菌生长受到抑制而无法产酸，样品中指示剂将不变色，为蓝紫色。本试验将戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂运用到生鲜乳抗生素残留检测中，以验证其在青霉素G、磺胺嘧啶两种抗生素的检测效果及灵敏度。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂“Delvotest®”：由北京优尼赛斯科技有限公司提供。对于青霉素G检出限为1～2 ppb；对于磺胺类药物检出限为25～100 ppb。

三元纯牛奶250 mL/盒，奶罐生鲜乳200 mL。

1.2 试验设备

K30电热恒温孵育器1 台，20～200 μL微量移液器1 把。

1.3 试验方法

先用裁纸刀或剪子将铝箔沿分割线切开，取出所用试剂微孔，但不要破坏剩余试剂的铝箔，以防培养基变干。用微量移液器将100 μL牛奶样品注入微孔内，每吸取一个奶样更换一个干净的吸头，避免污染。用封口膜将微孔密封，放入已预热至64 ℃的恒温孵育器中培养，3 h后取出观察颜色变化，也可按照对照组变黄为试验终止时间，如果底部2/3的固体介质是黄色，则为阴性；若底部2/3的固体介质是紫色，则为阳性。

2 样品制备

本试验主要采用青霉素G、磺胺嘧啶两种抗生素，将其配制成不同梯度溶液，添加到样品中进行检测检测。

2.1 空白对照

三元纯牛奶做空白对照，冰箱放置，备用。

2.2 添加抗生素的生鲜乳样品制备

在奶罐生鲜乳中添加青霉素G的浓度分别为1、2、3、4 ppb。添加磺胺嘧啶的浓度分别为 20、25、50、100、125 ppb。每个浓度做2个平行组，进行抗生素检测，防止结果出现偏差。

3 检测结果

3.1 试剂盒判定检测结果

用戴尔沃广谱抗生素检测试剂盒判定检测结果对照图（图1）。若生鲜乳样品中含有抗生素为阳性，试剂显示为蓝紫色，紫色越深说明抗生素含量越高。若生鲜乳样品中不含抗生素为阴性，试剂显示为黄色。

图1 戴尔沃广谱抗生素检测试剂盒判定检测结果对照图

3.2 试验检测结果

试验检测结果情况见表1。结果显示，三元纯牛奶作为对照样品，检测结果为阴性，奶罐生鲜乳检测结果为阴性，说明随机抽取的奶罐生鲜乳是合格的，是阴性样品，在奶罐生鲜乳添加了不同浓度的青霉素G和磺胺嘧啶后，检测的结果均为阳性。

3.3 青霉素G 检测结果

青霉素G 检测结果如图2所示。结果显示，青霉素G浓度在1 ppb时，戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂盒即可检出。

3.4 磺胺嘧啶检测结果

磺胺嘧啶检测结果如图3所示。结果显示，戴尔沃检测试剂盒对磺胺类药物十分敏感，在20 ppb时即可检出。

图2 青霉素G 检测结果

图3 磺胺嘧啶检测结果

4 小结

用戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂盒测定生鲜乳中抗生素的残留，优点为：（1）该方法灵敏度高，结果可靠，对于青霉素G检出限为1 ppb，磺胺类药物检出限为20 ppb，完全能够达到要求；（2）广谱抗生素检测性强，可检测β-内酰胺类、磺胺类、四环素类、大环内酯类、氨基糖苷类、氯霉素等抗生素；（3）使用方便，只需严格按照规定的方法进行操作，即能获得理想的效果，同时不要求检测人员具备较高的专业知识，无需对样品进行任何处理；（4）样品需要量少，只需100 μL即可测定，无需太复杂的检测设备；（5）经济便宜，与市售其它抗生素检测试剂条相比（市售进口β-内酰胺类抗生素快速检测试剂每条检测一个样品约20 元，国产约为10 元，磺胺类药物残留检测试剂盒国产约为8元），检测价格相对合理，易被广大养殖者所接受；缺点是相对于其它抗生素检测试剂盒检测（检测时间约为8 min），培养时间较长，约需3 h。

5 注意事项

5.1 由于戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂盒对于抗菌物质极其敏感（如抗生素、磺胺类药物以及其它消毒剂、清洗剂等），因此应在检测过程中避免与该类物质接触，在开始检测前应彻底清洗双手，在干净的台面进行检测；否则容易出现假阳性，影响检测结果。

5.2 本试剂检测时使用的是恒温培养设备，推荐使用干式恒温孵育器，该机器恒温，相对于其它恒温设备，不会出现过多的温度波动，在无条件的情况下可使用电热恒温水浴锅或电热恒温培养箱，但应注意在使用电热恒温水浴锅时，在样品加好后，使用封口膜将微孔密封，最好装进自封口塑料袋中封好口，放进水浴锅中，防止水淹没试剂，造成无效检测；电热恒温培养箱因为开关箱门易造成温度大幅变动，因此可适当增加培养时间，不局限于3 h，可按照阴性样品变成黄色的时间为终止试验的时间。

5.3 在试验过程中一定要加阴性和阳性样品作为对照，以保证结果的准确性。C