甲型H1N1流感病毒快速核酸检测方法探究

高洁 严敏 付婷 邵中军

甲型流感是全部流感病毒中对人体危害最大的病毒。研究发现,在我国2014年中有21万流行性感冒病例,其中43 例死亡［1,2］。现今依旧无特效药治疗 ,但早期治疗能够明显缩短治疗时间,缓解患者症状,减少并发症的发生。因此如何快速鉴别流感病毒是早发现早治疗的关键。本文探究甲型H1N1流感病毒快速核酸检测方法,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取在2015年3月～2016年3月呼吸道病毒筛查的获得的100例甲型H1N1流感患者作为研究对象,其中男 43 例 ,女 57 例 ,年龄 18～54 岁 ,平均年龄 (32.69±7.47)岁,病程2～14 d。纳入与排除标准：①全部患者均符合流感诊断标准。体温＞37.5℃,并伴有头痛、咽喉痛、咳嗽、流涕乏力等；②患者均同意其治疗方法并配合调研；③排除严重心脑血管疾病患者；④排除肝肾功能障碍者；⑤排除沟通障碍者及精神疾病患者［3］。

1.2 方法 患者均经荧光定量PCR检查和RT-PCR检查。具体如下。

1.2.1 设备及实验试剂 荧光定量PCR检查仪器为实时荧光定量PCR仪：美国AB公司ABI 7500FAST。RT-PCR检查为T professional型梯度PCR仪：德国Biometra公司；全部试剂均为仪器配套试剂盒。全部患者均由同一组护理人员使用灭菌棉签采集同一侧鼻拭子样本(2份)送至实验室。

1.2.2 病毒核糖核酸(RNA)提取 利用MagMAX-96核酸提取试剂,严格遵循说明书操作流程及无菌操作进行提取RNA［4］。

1.2.3 荧光定量PCR流程 用美国AB公司提供的试剂盒进行Real-time-PCR反应。反应条件为：逆转录及变形-预扩增-扩增-荧光收集-结果判读(待检样本FAM通道Ct值＜40为阳性,Ct值≥40为阴性)。其反应体系及反应条件参照2009年发布的《甲型H1N1流感检测方案》［5,6］。

1.2.4 RT-PCR流程 a.将采集的标本进行逆转录处理,b.预变性处理；c.进行预扩增的检测处理；d.扩增的检测(凝胶电泳 )；e.结果判读［7］。

1.3 观察指标 比较两种不同方法的检查符合率。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行处理。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

荧光定量PCR检查符合率为86.00%(86/100),RT-PCR检查符合率为75.00%(75/100),荧光定量PCR检查符合率高于RT-PCR检查,差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 100例患者两种方法检查符合率比较(n,%)

3 讨论

目前筛查流感病毒的技术主要有病毒分离培养法、免疫荧光法(IFA)、酶联免疫测定法及PCR等技术［8］。其中病毒分离培养法是诊断流感病毒的金标准,但是操作技术要求高,且耗时耗力。

常规的RT-PCR技术相对耗时较长,需要进行电泳检查,所用材料及操作均对环境要求较高,因此要求操作人员熟练掌握操作流程,且存在一定风险。荧光定量PCR检查,能够实现较好的操作效率,同时其对病毒RNA有较高的辨别能力,减低对环境的污染,可定量、定性分析,缩短检查的时间,为快速筛查流感病毒提供协助［9,10］。但是荧光定量PCR检测对实验条件及技术的要求较高,因此需要医师结合实际情况进行合理选择。

本次研究结果表明,荧光定量PCR检查符合率为86.00%(86/100),RT-PCR 检 查 符 合 率 为 75.00%(75/100),荧 光 定 量PCR检查符合率高于RT-PCR检查,差异具有统计学意义(P＜0.05)。荧光定量PCR能够有效的在较短时间中诊断出甲型H1N1病毒,缩短筛查时间,为早发现早治疗提供诊断依据。

综上所述,采用快速核酸检测方法筛查甲型H1N1流感病毒,能够有效缩短筛查时间,提高对病毒核酸检查符合率,为医师诊断提高依据,值得医师及医院推广。

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