麝香保心丸对高同型半胱氨酸血症大鼠内皮功能的影响

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高同型半胱氨酸血症(HHcy)在临床中很常见，伴发于高血压、代谢综合征等疾病，大量的流行病学调查和临床研究证实，HHcy是导致血管内皮功能障碍和动脉粥样硬化等血管损伤性疾病的一个独立危险因子[1]。麝香保心丸具有保护内皮功能、抗炎及抑制血管钙化等作用，在动脉粥样硬化及血管钙化等血管重塑性疾病的治疗中发挥了很大的作用[2 -3]，其能否保护同型半胱氨酸(Hcy)导致的内皮功能障碍尚不清楚。本研究在HHcy大鼠模型上，用麝香保心丸干预，观察内皮功能指标的变化，探讨麝香保心丸的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物及药品 雄性SD大鼠由汕头大学医学院实验动物中心提供，8周龄。L -蛋氨酸购自北京宝希迪科技有限公司，纯度>99%；一氧化氮(NO)试剂盒购自北京华英生物研究所，Hcy酶联免疫试剂盒购自上海史瑞可生物科技有限公司，一氧化氮合酶(eNOS)一抗、二抗及二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒购自武汉博士德；麝香保心丸购自上海和黄药业有限公司，生产批号：12050401。其余为进口或国产分析纯试剂。

1.2 HHcy动物模型制备 雄性SD大鼠随机分为3组，每组8只。正常对照组：用饮用水灌胃；HHcy组：L -蛋氨酸灌胃[1 g/(kg·d)，溶于饮用水中]；HHcy+麝香保心丸组：模型制作同HHcy组，加麝香保心丸灌胃[14 mg/(kg·d)]，每日1次。3组大鼠常规饲养，4周后称重，3%水合氯醛麻醉，心脏取血，置入含有乙二胺四乙酸(EDTA)的试管中，4 ℃离心分离血浆，-80 ℃保存。摘取主动脉，用冰生理盐水冲洗后，石蜡包埋用于染色。

1.3 Hcy和NO含量的测定 分别采用硝酸还原酶法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆NO和Hcy含量，具体步骤按试剂盒说明书操作。

1.4 免疫组织化学法检测主动脉组织eNOS的表达 采用4%多聚甲醛固定胸主动脉，石蜡包埋，制作4 μm厚切片，常规脱蜡入水，抗原修复，封闭非特异性抗原，滴加一抗过夜，滴加二抗，DAB显色，苏木素复染，盐酸酒精分化、脱水、透明、中性树胶封片，具体步骤按说明书进行。

2 结 果

2.1 大鼠血浆Hcy和NO含量的变化 HHcy组血浆Hcy水平明显高于正常对照组，提示HHcy模型建立成功，同时血浆NO含量下降；采用麝香保心丸干预后，血浆NO含量上升。详见表1。

表1 各组大鼠血浆Hcy和NO水平比较(±s) μmol/L

2.2 大鼠主动脉组织内皮eNOS表达的变化 与正常对照组相比，HHcy组主动脉组织内皮eNOS表达明显减少，用麝香保心丸干预后，主动脉组织内皮eNOS表达有所上调。详见图1。

A为正常对照组；B为HHcy组；C为HHcy+麝香保心丸组。

3 讨 论

现已证实，Hcy是导致动脉粥样硬化等心血管疾病的一个重要的独立危险因素，是体内蛋氨酸代谢的中间产物，血浆Hcy大于16 μmol/L即为HHcy。本实验采用L -蛋氨酸灌胃4周后，血浆Hcy水平明显升高，大鼠HHcy模型建立成功。同时发现HHcy组大鼠血浆NO水平明显低于正常组，血管内皮细胞eNOS的表达亦同步下调。NO是在eNOs作用下，催化左旋精氨酸转变成L -瓜氨酸而生成，血浆NO主要由血管内皮细胞合成分泌，是反映血管内皮功能的主要指标之一。本实验结果提示Hcy可明显损伤大鼠血管内皮细胞功能，导致NO分泌明显减少。

麝香保心丸是芳香温通类的代表药物，源于宋代经典名方《太平惠民和剂局方》中的苏合香丸。研究发现，麝香保心丸具有保护血管内皮、稳定逆转斑块[4]、抗炎[5]、促进治疗性血管新生及预防经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄等作用[6 -7]。长期以来，麝香保心丸在临床上作为一种治疗冠心病的常用有效药物，对缓解心绞痛症状等有较显著的作用，在Hcy导致的内皮细胞功能损伤中是否亦有保护作用尚不清楚。采用麝香保心丸干预后，大鼠血浆Hcy水平无明显下降，但血浆NO水平明显上升，血管内皮细胞表达eNOS同步上调，提示麝香保心丸具有保护血管内皮细胞功能的作用，并且该作用独立于降低血浆Hcy水平之外。

本实验发现麝香保心丸虽无降低血浆Hcy水平的作用，但可保护Hcy诱导的血管内皮功能损伤，这将为血管损伤的机制研究及防治提供新的思路和作用靶点，具体的分子作用机制和细胞内信号转导通路尚需进一步研究证实。由于植物提取物成分和有效成分作用靶点的复杂性，中药成分对保护血管内皮功能的药理学作用尚需进一步研究。