HPV E6/E7 mRNA基因在HPV 52、58型阳性患者宫颈病变组织中的表达

彭 梅,索玉平,屈重霄,赵丽娟,薛剑侠

(1山西省人民医院妇科,太原 030001;2山西省人民医院病理科;*通讯作者,E-mail:pengmei929@163.com)

宫颈癌是仅次于乳腺癌的女性恶性肿瘤,全世界每年确诊为宫颈癌的女性约有50万人,约25万人死亡[1]。高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的持续性感染是引起宫颈癌的关键因素[2],世界范围内宫颈癌患者中感染HPV的常见型别分别是HPV16、18、31、33、35、45、52和58型,其中HPV16和18型感染最高[3]。研究发现不同地区HPV感染型别存在差异,山西地区高危型HPV感染型别前5名为:HPV16,58,52,18,33。HPV16、18型仍然是世界公认的主要致癌亚型,而山西地区HPV52、58型感染却占较高比率[4],探究HPV52、58感染与宫颈病变的关系对于山西省的宫颈病变的防治有重要的意义。

虽然高危HPV的持续感染是发展成宫颈癌的主要因素,但多数患者属于一过性感染。研究认为HPV E6/E7基因的表达是诱发宫颈癌的始发因素,在高度鳞状上皮内瘤变和宫颈癌临床标本中均发现这两种基因过量表达的现象,当失去E2基因的抑制时E6/E7基因会过量表达,并逐步导致宫颈癌的发生[5]。本文研究了HPV E6/E7 mRNA在宫颈病变患者中的表达情况,探究HPV52、58型感染与宫颈癌发生的关系,为宫颈癌的预防及筛查提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

回顾分析2014-01～2016-12就诊于我院妇科门诊,通过取宫颈分泌物进行HPV DNA检测的女性患者,选取其中HPV52、58感染阳性并进一步行阴道镜及宫颈活检后的270例患者,根据检测结果分为宫颈炎症组和病变组(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌),将270例宫颈活检组织石蜡切片再进行E6/E7 mRNA检测。所有患者为山西籍各市县常住人口,年龄23-77岁,平均年龄43岁,检查前无生殖道炎症及宫颈病变、子宫切除病史,在行阴道镜及宫颈活检前3 d未进行妇科检查、宫颈筛查、阴道给药及性生活。

1.2 试剂与仪器

用HPV E6/E7 mRNA检测诊断试剂盒(购自科蒂亚生物技术有限公司,型号QuantityVirus冷光仪)对14种HR-HPV(HPV16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66和68)进行检测。

1.3 标本采集与处理

对来我院妇科门诊进行宫颈癌筛查妇女,用HPV采样刷置于宫颈口顺时针旋转4-5圈,刷头放入洗脱管中保存送检验科进行HPV-DNA检测。对符合入选标准(HPV52、58阳性)者进一步行阴道镜及宫颈活检,将宫颈活检组织依次经过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等过程处理。

1.4 检测方法

1.4.1 病理学检查 对包埋的石蜡组织进行切片,依次进行脱蜡、洗去二甲苯、苏木精染色、蓝化和分色、伊红染色、脱水、透明、封固。显微镜下观察染色切片组织,根据第八版妇产科学的诊断标准,分别诊断为宫颈炎性改变、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、宫颈浸润癌。

1.4.2 HPV E6/E7 mRNA检测 采用科蒂亚生物技术有限公司提供的HPV E6/E7 mRNA检测(链DNA信号扩增法)试剂盒,参照试剂盒说明书进行操作。每批实验均设空白对照及质控对照,根据冷光仪检测出的光子数换算出E6/E7 mRNA拷贝数后判定结果。

1.4.3 HPV DNA检测方法 HPV基因分型检测试剂盒对21种HPV亚型进行检测,其中高危型15种:HPV16,18,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,低危型6种:HPV6,11,42,43,44,CP8304(81),试剂盒购自凯普生物化学科技公司;主要仪器为PCR扩增仪。参照试剂盒说明书进行操作。

1.5 统计学分析

用SPSS 16.0软件进行统计学分析,计数资料以率表示,两组之间率的比较采用卡方检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV E6/E7 mRNA在各个病理级别的组织中的表达

在270例患者中,活检为正常宫颈炎症的患者有83例,其中48例HPV E6/E7 mRNA检测结果为阳性,阳性率为57.83%;活检为CINⅠ的患者有49例,其中38例HPV E6/E7 mRNA检测结果为阳性,阳性率为77.55%;活检为CIN Ⅱ的患者有45例,其中42例HPV E6/E7 mRNA检测结果为阳性,阳性率为93%;活检为CINⅢ的66例患者和活检为宫颈癌的27例患者,HPV E6/E7 mRNA检测结果均为阳性,阳性率达100%;各病理组HPV E6/E7 mRNA阳性表达随着病变级别的升高,呈现递增的趋势。宫颈病变组与炎症组之间HPV E6/E7 mRNA检测阳性表达差异具有统计学意义(P<0.05,见表1)。

表1 270例宫颈组织不同病理级别中E6/E7 mRNA检测结果

*表中P值为与宫颈炎症组比较

2.2 HPV E6/E7 mRNA表达在宫颈组织中的检测性能

在宫颈组织活检阳性(CINⅡ,CINⅢ和宫颈癌)的138例患者中,E6/E7 mRNA表达阳性者135例,HPV E6/E7 mRNA对CINⅡ以上诊断的灵敏性为97.83%,而在活检阴性(宫颈炎症和CINⅠ)的132例患者中,E6/E7 mRNA表达阳性者86例,HPV E6/E7 mRNA对CINⅡ以上诊断的特异性为34.85%(见表2)。

表2 宫颈活检和HPV E6/E7 mRNA方法的检测结果 (例)

3 讨论

高危型HPV的持续感染是引起宫颈癌的主要因素。HPV病毒是由衣壳和双链DNA组成,目前已经发现的HPV亚型有200余种,与宫颈病变相关的有30余种,根据其致病力不同,可将其分为高危型、低危型及其他型[6]。低危型HPV常常引起生殖道疣等良性病变,高危型则与宫颈癌前病变和宫颈癌密切相关。研究发现,不同HPV型别表现出不同的地理分布特点和致癌性,世界范围内宫颈癌患者中感染HPV的常见型别分别是HPV16、18、31、33、35、45、52和58型,其中HPV16和18型感染最高[3]。我国宫颈癌中最主要的8个高危HPV型别HPV16、18、58、33、52、31、45、59[7],赵丽娟等[4]研究指出山西省门诊人群中HPV16、58、52、18、33为主要的HPV感染型别。

随着人们对HPV致癌机制的进一步认识,HPV致癌基因E6/E7检测逐渐引起重视。HPV E6、E7基因是HPV的两个致癌片段,可分别与抑癌基因p53和pRB结合,调节受感染细胞周期,使其失控,最终导致宫颈癌的发生,E6/E7 mRNA是HPV癌基因片段的转录产物,E6/E7 mRNA过量表达是预测宫颈病变进展及风险的分子标志[8]。本文研究了HPV E6/E7 mRNA在已做过宫颈活检的患者中的表达情况,分析其与活检各病理级别的相关性,发现E6/E7 mRNA的阳性率随着病变级别的升高而升高,宫颈活检病变组与炎症组阳性率差异具有统计学意义(P<0.01),这与李晓林等[9]研究结果相似,提示E6/E7 mRNA在宫颈疾病发病和病理级别升高中起到重要作用,因此E6/E7 mRNA检测可以预测宫颈病变的进展情况。

国外学者Molden等[10]对宫颈病变患者进行2年随访发现E6/E7 mRNA较HPV DNA具有更高特异性(85.7%)及阳性预测值(37.5%),特别是对于CINⅡ以上患者具有更好的特异性及阳性预测值。而本研究E6/E7 mRNA检测对CINⅡ以上的灵敏性达到97.83%,检测的特异性为34.85%。结合相关研究显示:E6/E7 mRNA检测与HPV DNA检测均可用于宫颈癌筛查。

综上,女性宫颈HPV 52、58型阳性感染患者的宫颈活检组织中E6/E7 mRNA的表达水平随宫颈组织病变级别升高呈上升趋势,HPV52、58型阳性且E6/E7 mRNA高表达的患者在临床上需密切随访并予以高度重视,从而及早发现和处理CINⅡ以上高级别病变,阻断病情进展,降低宫颈癌的发生率。