miR-187在宫颈癌中的表达与临床病理关系的研究

吴晓玲 周桂华

摘   要：目的  探讨miR-187在宫颈癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法  收集78例宫颈癌组织标本，同时收取同期手术的60例正常宫颈组织标本，采用实时荧光定量PCR检测方法检测两种组织中miR-187的表达量并进行比较，同时分析癌组织中miR-187的表达水平与临床病理特征的关系。结果  宫颈癌组织中miR-187的表达量低于正常宫颈组织标本，统计学意义显著（P<0.001）;宫颈癌组织中miR-187的表达水平与宫颈癌组织的分化程度、患者的临床分期及有无淋巴结转移情况有关（P<0.05），而与患者的年龄、肿块类型、肿瘤大小及组织学类型无关（P>0.05）。结论  miR-187在宫颈癌组织中低表达，可能作为其诊断与治疗的重要靶点。

关键词：miR-187;宫颈癌;实时荧光定量PCR

中图分类号：R365                                   文献标识码：A                                 DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.16.019

文章编号：1006-1959（2018）16-0069-03

Expression of miR-187 in Cervical Cancer and Its Relationship with Clinicopathological Features

WU Xiao-ling，ZHOU Gui-hua

（Department of Laboratory Medicine，Hunan Maternal and Child Health Care Hospital，Changsha 410008，Hunan，China）

Abstract：Objective  To investigate the expression of miR-187 in cervical cancer and its relationship with clinicopathological features.Methods  78 cases of cervical cancer tissues were collected，60 normal cervical tissue specimens were collected at the same time from simultaneous operation.The expression of miR-187 in two kinds of tissues was detected and compared by real-time fluorescence quantitative PCR，and the relationship between the expression of miR-187 and clinicopathological features was analyzed. Results  The expression of miR-187 in cervical cancer was significantly lower than that in normal cervical tissue，with statistical significance（P<0.001）.The expression of miR-187 in cervical cancer was related to the degree of differentiation，clinical stage and lymph node metastasis （P<0.05），but not to age，tumor type，tumor size and histological type（P>0.05）.Conclusion  Low expression of miR-187 may be an important target for diagnosis and treatment of cervical cancer.

Key words：miR-187;Cervical cancer;Real-time fluorescent quantitative PCR

宫颈癌（cervical cancer）是妇科肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一，已成为世界各地妇女面临的具有挑战性的健康问题[1]。虽然高危型HPV感染是宫颈癌及其癌前病变发生的主要原因，然而并非所有感染高危型HPV的女性均会发生宫颈癌，这表明还有其他因素导致宫颈癌的發生与发展，因此，对宫颈癌的危险因素进行及时有效的检测十分必要[2-4]。微小RNA（miRNA/miR）是一类长度约为19～25个核苷酸的小的非编码和内源调节RNA分子，其可以结合特定基因的3'非翻译区（3'-UTR）以抑制mRNA翻译，然后损害蛋白质过程，对基因表达进行转录后的调节[5]。近年来，很多研究者发现miR-RNA在肿瘤性疾病的发展中扮演着重要角色，比如一些miR-RNA的表达能够抑制乳腺癌的发生发展等[6]。大量研究发现，上调一些致癌miR-RNA或者下调一些抑癌miR-RNA能够通过调控肿瘤细胞的细胞周期、血管生成、侵袭和转移等来促进肿瘤的发展[7，8]。miR-187作为miRNA超家族中的一种，已经表明能够抑制前列腺癌、卵巢癌、肝细胞癌等肿瘤的发展。本文检测了miR-187在宫颈癌组织与正常宫颈组织的表达及分析了miR-187的表达与临床病理特征的关系，旨在了解miR-187和宫颈癌的关系，为宫颈癌的诊治提供潜在靶点。

1资料与方法

1.1一般资料  收集2014年1月～2016年12月在湖南省妇幼保健院做宫颈癌根治术或宫颈锥切术的宫颈癌组织标本78例，收取同期非宫颈癌手术（子宫肌瘤、子宫脱垂手术等患者）的正常宫颈组织手术标本60例。所有正常宫颈组织标本均经过严格组织病理检查无其它相关病变;所有宫颈癌患者术前均经病理活检证实癌变，且术前均未接受任何放化疗。所有患者临床资料完整，同时均未合并其他肿瘤或者癌前病变。所有标本收集后立刻速冻放入-80 ℃保存。

1.2 RNA的提取及逆转录  用Trizol法参照TRIzol Reagent试剂说明书提取总RNA，并用琼脂糖凝胶电泳法检测RNA的完整性。用TaKaRa逆转录试剂盒按说明书进行RNA的逆转录。

1.3实时荧光定量  PCR所有引物合成均购自上海生工，序列如下：miR-187，forward 5′-ACACTCCAGCTGGGGGCCGACGTTGTGTT-3′ and reverse 5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′;内参U6，forward 5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′ and reverse 5′-AACGCTTCACGAA-3′。PCR反應体系如下：预变性95 ℃，5 min，变性95 ℃，45 s，退火55 ℃，30 s，延伸72 ℃，30 s，共40个循环。实时荧光定量PCR的结果采用2-△△Ct法计算表示，并将正常宫颈组织miR-187的表达量设为1。

1.4统计学分析  采用SPSS Statistic19.0软件进行统计学分析，计数资料用（x±s）表示，组间比较用t检验，相关性分析用？字2检验。以α=0.05作为检验标准，P<0.05表示差异具有统计学意义，P<0.001表示统计学意义显著。

2结果

2.1 miR-187在宫颈癌组织与正常组织中的表达情况  用实时荧光定量PCR检测78例宫颈癌组织与60例正常组织中miR-187的相对表达量，结果表明，癌组织中miR-187的表达量（0.688±0.489）低于正常宫颈组织（1.301±1.023），统计学意义显著（P<0.001），见图1。

2.2 miR-187的表达与临床病理特征的关系  荧光定量PCR检测结果得出，miR-187在宫颈癌组织中的表达量平均为0.688，以此把78例宫颈癌组织样本分为高表达组与低表达组。通过分析miR-187的表达水平与临床病理特征的关系，表明miR-187的表达与宫颈癌患者的癌组织分化程度（P=0.002）、临床分期（P=0.025）、淋巴结转移情况（P<0.001）有关，差异有统计学意义。而与患者的年龄（P=0.819）、肿块类型（P=0.485）、肿块大小（P=0.241）和组织学类型（P=0.259）无关，见表1。

3讨论

越来越多的证据表明，很多miRNA是宫颈癌诊断和治疗的重要靶点[9]。miR-187是近年来研究较多的一种miRNA，比如在肾癌、肝细胞癌和结直肠癌等中都有了深入的研究[6，10，11]。在本文研究中，我们发现miR-187在宫颈癌组织中的表达显著低于正常宫颈组织，说明miR-187可能是宫颈癌发生发展的肿瘤抑制因子。Fei D[9]等通过检测miR-187在骨肉瘤的研究结果发现：骨肉瘤组织中miR-187的表达量显著低于相应的癌旁组织，同时骨肉瘤细胞株中的表达也低于正常骨细胞株。在结直肠癌、肝细胞癌中的研究中也发现miR-187在癌组织中的表达均低于正常组织[6，11]。本研究还发现，miR-187在宫颈癌组织中的表达与患者的癌组织分化程度、临床分期及淋巴结转移情况有关，而与其他临床病理特征无关。Fei D[9]等在骨肉瘤的研究中发现，miR-187在骨肉瘤组织中的表达与患者的TNM分期与淋巴结转移情况有关。这与我们在宫颈癌中的研究结果相似。这可能意味着miR-187也许能抑制癌细胞发生侵袭与转移，进而其表达下降会导致肿瘤的不良预后。Han X等[11]研究也发现miR-187在肝细胞癌组织及癌细胞株中的表达显著低于正常肝组织，该研究发现miR-187能通过直接作用胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）而抑制肝癌细胞的增殖，迁移和侵袭。这些研究都表明miR-187能抑制相应肿瘤的发生发展，这和我们的研究结果相吻合。

近年来，研究者对miR-187是通过何种机制影响肿瘤的发生发展也进行了探索。研究发现，MiR-187通过靶向作用BCL6基因可以诱导弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞的凋亡;且miR-187通过作用雄激素调节基因ALDH1A3可以影响前列腺肿瘤细胞的生物学行为[12，13]。同时miR-187还通过作用丝裂原活化蛋白激酶12（MAPK12）和E盒结合锌指蛋白2（ZEB2）抑制骨肉瘤的发展[9，14]。现阶段宫颈筛查及疫苗的应用对宫颈癌的预防起了一定作用，但宫颈癌的发病率仍然居高不下，其发展的具体作用机制还需进一步研究[2]。研究发现，宫颈癌的发生发展与许多基因表达相关，比如高危型HPV感染细胞后通过促进其高表达E6与E7蛋白，后者再通过调节p53及pRb的表达及介导mTOR信号传导等途径促进宫颈癌及其他肿瘤的发生发展[15，16];Her2的过表达与宫颈癌的发展也有一定关系等[17]。

综上所述，miR-187的表达与宫颈癌的发生和发展之间存在显著相关性，但是为何在癌组织中miR-187的表达降低以及其降低后产生的效应是什么？其分子机制还需进一步研究。

参考文献：

[1]Wentzensen N，Schiffman M.Accelerating cervical cancer control and prevention[J].Lancet Public Health，2018（3）：e6-e7.

[2]Li Y，Xu C.Human Papillomavirus-Related Cancers[J].Adv Exp Med Biol，2017（1018）：23-34.

[3]Van Ostade X，Dom M，Tjalma W，et al.Candidate biomarkers in the cervical vaginal fluid for the（self-）diagnosis of cervical precancer[J].Arch Gynecol Obstet，2018，297（2）：295-311.

[4]Satapathy S，Batra J，Jeet V，et al.MicroRNAs in HPV associated cancers：small players with big consequences[J].Expert Rev Mol Diagn，2017，17（7）：711-722.

[5]Bertoli G，Cava C，Castiglioni I.MicroRNAs：New Biomarkers for Diagnosis，Prognosis，Therapy Prediction and Therapeutic Tools for Breast Cancer[J].Theranostics，2015，5（10）：1122-1143.

[6]Huang QB，Ma X，Zhang X，et al.Down-Regulated miR-30a in Clear Cell Renal Cell Carcinoma Correlated with Tumor Hematogenous Metastasis by Targeting Angiogenesis-Specific DLL4[J].PLoS One，2013，8（6）：e67294.

[7]Ma X，Shen D，Li H，et al.MicroRNA-185 inhibits cell proliferation and induces cell apoptosis by targeting  VEGFA directly in von Hippel-Lindau-inactivated clear cell renal cell carcinoma[J].Urol Oncol，2015，33（4）：161-169.

[8]Zhao S，Yao D，Chen J，et al.Circulating miRNA-20a and miRNA-203 for screening lymph node metastasis in early stage cervical cancer[J].Genet Test Mol Biomarkers，2013，17（8）：631-636.

[9]Fei D，Zhao K，Yuan H，et al.MicroRNA-187 exerts tumor-suppressing functions in osteosarcoma by targeting ZEB2[J].Am J Cancer Res，2016，6（12）：2859-2868.

[10]Wang ZS，Zhong M，Bian YH，et al.MicroRNA-187 inhibits tumor growth and invasion by directly targeting CD276 in colorectal cancer[J].Oncotarget，2016，7（28）：44266-44276.

[11]Han X，Wang X，Zhao B，et al.MicroRNA-187 inhibits tumor growth and metastasis via targeting of IGF-1R in hepatocellular carcinoma[J].Mol Med Rep，2017，16（2）：2241-2246.

[12]Huang F，Jin Y，Wei Y.MicroRNA-187 induces diffuse large B-cell lymphoma cell apoptosis via targeting BCL6[J].Oncol Lett，2016，11（4）：2845-2850.

[13]Casanova-Salas I，Masia E，Arminan A，et al.MiR-187 Targets the Androgen-Regulated Gene ALDH1A3 in Prostate Cancer[J].PLoS One，2015，10（5）：e125576.

[14]Cui C，Shi X.miR-187 inhibits tumor growth and invasion by directly targeting MAPK12 in osteosarcoma[J].Exp Ther Med，2017，14（2）：1045-1050.

[15]Gupta S，Kumar P，Das BC.HPV：Molecular pathways and targets[J].Curr Probl Cancer，2018，42（2）：161-174.

[16]Hoppe-Seyler K，Bossler F，Braun JA，et al.The HPV E6/E7 Oncogenes：Key Factors for Viral Carcinogenesis and Therapeutic Targets[J].Trends Microbiol，2018，26（2）：158-168.

[17]Oh DY，Kim S，Choi YL，et al.HER2 as a novel therapeutic target for cervical cancer[J].Oncotarget，2015，6（34）：36219-36230.

收稿日期：2018-4-27;修回日期：2018-5-13

編辑/杨倩