子宫内膜癌中单核细胞趋化蛋白-1表达及其与巨噬细胞浸润的关系

廖红　熊树华　肖仲清　刘佳

【摘要】目的：分析子宮内膜癌中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达及其与巨噬细胞浸润的关系。方法：纳入2016年1月-2017年12月60例在本院治疗的子宫内膜癌患者，同时纳入同期在本院治疗的子宫内膜不典型增生患者60例和增生期子宫内膜患者60例。采用免疫组化SP法检测所有患者子宫内膜中的MCP-1蛋白表达和CD68标识巨噬细胞浸润表达情况，分析子宫内膜癌中MCP-1蛋白表达与CD68标识巨噬细胞浸润两者之间的关系。结果：在增生期子宫内膜、子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生中MCP-1的阳性表达率分别为11.67%（7/60）、78.33%（47/60）和13.33%（8/60），三者比较差异有统计学意义（P<0.05）。在增生期子宫内膜、子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生中CD68标识巨噬细胞的阳性表达率分别为6.67%（4/60）、81.67%（49/60）和18.33%（11/60），三者对比差异有统计学意义（P<0.05）。子宫内膜癌组织中MCP-1蛋白表达与CD68标识巨噬细胞浸润均明显高于增生期子宫内膜和子宫内膜不典型增生患者（P<0.05）。子宫内膜癌组织中MCP-1蛋白与CD68标识巨噬细胞浸润之间呈正相关关系（r=0.913，P<0.05）。结论：子宫内膜癌的发生、发展与MCP-1及巨噬细胞的异常表达之间有密切的关系，子宫内膜癌组织中浸润的MCP-1和巨噬细胞能够促进肿瘤淋巴管和血管的形成，加速肿瘤的浸润和转移。

【关键词】子宫内膜癌；子宫内膜不典型增生；增生期子宫内膜；单核细胞趋化蛋白-1表达；CD68标识巨噬细胞浸润；相关性

Expression of Monocyte Chemoattractant Protein-1 in Endometrial Cancer and Its Relationship with Macrophage Infiltration/LIAO Hong，XIONG Shuhua，XIAO Zhongqing，et al.//Medical Innovation of China，2019，16（27）：-124

【Abstract】Objective：To analyze the expression of monocyte chemoattractant protein-1（MCP-1）and its relationship with macrophage infiltration in endometrial cancer.Method：Sixty patients with endometrial cancer treated in our hospital from January 2016 to December 2017 were enrolled in the study，meanwhile，60 patients with atypical endometrial hyperplasia and 60 patients with proliferative endometrium were enrolled in the study.Immunohistochemical SP method was used to detect the expression of MCP-1 protein and macrophage infiltration with CD68 marker in endometrium of all patients.The correlation between the expression of MCP-1 protein and macrophage infiltration with CD68 marker was analyzed.Result：The positive expression rates of MCP-1

in proliferative endometrium，endometrial cancer and atypical endometrial hyperplasia were 11.67%（7/60），78.33%（47/60）and 13.33%（8/60），respectively，the difference was statistically significant（P<0.05）.In proliferative endometrium，endometrial cancer and atypical endometrial hyperplasia，the positive expression rates of macrophage infitration with CD68 marker were 6.67%（4/60），81.67%（49/60）and 18.33%（11/60），respectively，the difference was statistically significant（P<0.05）.The expression of MCP-1 protein and macrophage infitration with CD68 marker in endometrial carcinoma were significantly higher than those in proliferative endometrium and atypical endometrial hyperplasia（P<0.05）.There was a positive correlation between MCP-1 protein and macrophage infiltration with CD68 marker in endometrial cancer（r=0.913，P<0.05）.Conclusion：The occurrence and development of endometrial cancer are closely related to the abnormal expression of MCP-1 and macrophages，MCP-1 and macrophages infiltrated in endometrial cancer tissue can promote the formation of lymphatic vessels and blood vessels，and accelerate the invasion and metastasis of tumors.

【Key words】Endometrial cancer；Atypical endometrial hyperplasia；Proliferative endometrium；Monocyte chemoattractant protein-1 expression；CD68 marking macrophage infiltration；Correlation

First-authors address：Jiangxi Maternal and Child Health Hospital，Nanchang 330006，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.27.033

单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）作为CC趋化因子家族成员的组成之一，属于系分子量15kD的糖蛋白，内部共包含76个氨基酸，前体部位有99肽，

其中含有23个氨基酸的信号肽[1]。MCP-1主要是由人和鼠的单核细胞、成纤维细胞、内皮细胞、淋巴细胞所产生的或由肿瘤细胞所分泌产生[2]。MCP-1能够通过对肿瘤相关巨噬细胞（TAMS），尤其是单核-巨噬细胞产生趋化，从而在炎症、肿瘤、动脉粥样硬化等多种疾病的病灶部位发挥其生物学效应，参与多种肿瘤的发生发展、过程[3-4]。此次研究通过选取2016年1月-2017年12月本院收治的子宫内膜病变患者，取所有患者的标本，检测分析其子宫内膜中的MCP-1与CD68标识巨噬细胞浸润及两者的相关性。现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料纳入2016年1月-2017年12月在本院治疗的60例子宫内膜癌患者，同时纳入同期在本院治疗的子宫内膜不典型增生患者60例和增生期子宫内膜患者60例。纳入标准：诊断符合子宫内膜癌、子宫内膜增生及增生期子宫内膜；年龄32~57岁；均为女性；疾病分期Ⅰ~Ⅳ期；临床资料完整。排除标准：合并其他子宫内膜病变；不愿参加此次研究。该研究已经伦理学委员会批准，患者知情同意并签署知情同意书。

1.2方法采用北京博奥森公司提供的兔抗人多克隆MCP-1抗体浓缩液，工作浓度为1︰200；采用北京西雅金桥生物技术有限公司提供的鼠抗人单克隆CD68抗体即用型。采用福州迈新生物技术有限公司提供的DAB显色试剂和S-P免疫组化试剂盒。抽取患者的病理标本，石蜡包埋存档，连续切片4张，厚度为5 μm。采用SP二步法进行免疫组化检测，取已知的病理切片作为阳性参照对象，以PBS缓冲液作为代替一抗的阴性对参照。MCP-1免疫组化阳性产物定位于肿瘤细胞胞质中，呈现为棕黄色细颗粒状。CD68免疫组化阳性产物定位于巨噬细胞胞质中，呈现为棕黄色细颗粒状。

1.3观察指标与评定标准（1）分析子宫内膜病变中MCP-1表达阳性率与CD68标识巨噬细胞浸润的情况。阳性率判定标准：按照Ozdemir方法结合病理切片中阳性物质的表达强度和量将其分为4级，其中阳性细胞数<5%或无阳性物质表达为（-）；阳性细胞数在5%~25%或显色较浅为（+）；阳性细胞数在26%~50%或显色深为（2+）；阳性细胞数>50%或显色深为（3+）。（2）分析子宫内膜癌组织中MCP-1和CD68标识巨噬细胞浸润的关系。

1.4统计学处理采用SPSS 23.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。有序分类变量资料用秩和检验，相关性运用Spearman相关分析检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1增生期子宫内膜、子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生患者一般资料比较60例子宫内膜癌患者，年龄32~57岁，平均（44.32±5.36）岁；按照2000年FIGO标准对其进行组织学分级和临床病理分期：Ⅰ期23例，Ⅱ期14例，Ⅲ期16例，Ⅳ期

7例；G1级35例，G2级19例，G3级6例；有淋巴结转移8例，无淋巴结转移52例；病灶浸润>1/2肌层49例，局限于黏膜层及浸润<1/2肌层11例。60例子宫内膜不典型增生患者，年龄33~56岁，平均（44.35±5.58）岁；60例增生期子宫内膜患者，年龄32~57岁，平均（44.56±5.67）岁。三者年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2子宫内膜病变中MCP-1表达与CD68标识巨噬细胞浸润在增生期子宫内膜、子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生中MCP-1的阳性表达率分别为11.67%（7/60）、78.33%（47/60）和13.33%（8/60），三者对比差异有统计学意义（P<0.05）。在增生期子宫内膜、子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生中CD68标识巨噬细胞的阳性表达率分别为6.67%（4/60）、81.67%（49/60）和18.33%（11/60），三者对比差异有统计学意义（P<0.05）。子宫内膜癌组织中MCP-1蛋白表达与CD68 标识巨噬细胞浸润均明显高于增生期子宫内膜和子宫内膜不典型增生患者，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.3子宫内膜癌组织中MCP-1和CD68标识巨噬细胞浸润的关系子宫内膜癌组织中的MCP-1蛋白与CD68标识巨噬细胞浸润呈正相关关系（r=0.913，P=0.000），见表2。

3讨论

子宮内膜癌是女性生殖系统常见的一种上皮恶性肿瘤，多发于子宫内膜，常见于围绝经期和绝经后的妇女，对女性的生活质量和身心健康造成严重的影响[5]。相关研究证实，在我国每年约有20万的新发子宫内膜癌病例[6]。其导致的死亡率目前居于妇科常见恶性肿瘤的第3位（仅次于卵巢癌和宫颈癌），严重威胁女性的生命安全[7]。研究发现，在不同地区该病的发病率也各不相同，其发病原因主要与生活方式密切相关[8]。近些年来随着人们生活方式和生活习惯的不断改变，子宫内膜癌的发病率呈现出逐年上升的趋势，目前已经居于女性生殖系统恶性肿瘤的第2位（仅次于宫颈癌）[9]。绝经后出血或围绝经期出血是子宫内膜癌最常见的临床症状[10]。子宫内膜癌的发病机制目前尚不明确，一般临床根据发病机制主要与生物学行为特点将其分为雌激素依赖型（Ⅰ型）和非雌激素依赖型（Ⅱ型）两类，前者多数为子宫内膜样癌，部分为黏液腺癌；后者多为浆液性癌，透明细胞癌等[11]。因此早期发现、早期治疗前期病变是临床关注的重点。

子宫内膜腺基质细胞和上皮细胞在正常生理条件下均可分泌MCP-1[12]。有研究指出，MCP-1在腺上皮细胞内的表达水平与基质细胞相比明显较高[13]。但是MCP-1在腺上皮细胞内的表达一般不受调节因素的调節[14]。与之相反的是，基质细胞在肿瘤坏死因子a（TNF-a）、PDGF、IFN-1及IL-1等因素的作用下可表达为低组成性、高诱导性的MCP-1[15]。此外也有大量研究证实，在正常子宫内膜中MCP-1的表达表现为性激素依赖性，可能与月经周期有密切的关系[16-17]。MCP-1的表达在子宫内膜增生期大于分泌期，并且在经前期达到最高水平，排卵期则水平最低[18]。而上述这种周期性的变化特点与子宫内膜中巨噬细胞数量的变化呈正相关[19]。在经前期巨噬细胞的含量达到最高，而在排卵期则最少[9]。可以看出，雌孕激素能够通过对MCP-1的表达实施调节进而调节子宫内膜中巨噬细胞的变化[20]。本研究中，子宫内膜癌组织中的MCP-1蛋白与CD68标识巨噬细胞浸润之间呈正相关关系（r=0.913，P=0.000）。研究结果提示，阳性MCP-1蛋白的表达强度对子宫内膜腺癌患者临床病理特征的影响与CD68阳性巨噬细胞表达强度对子宫内膜腺癌患者临床病理特征的影响相一致，这也进一步证实了MCP-1和巨噬细胞通过协同作用，促进宫颈鳞癌的浸润转移。

巨噬细胞是炎症和肿瘤的桥梁。在瘤微环境中，巨噬细胞被诱导分化和极化，由M1型转变为M2表型的肿瘤相关巨噬细胞，从而促进肿瘤发生发展。在宫颈癌组织中，CD68标识巨噬细胞通过增加免疫抑制因子，减少免疫促进因子，引起免疫抑制，促使宫颈癌的浸润转移。

本研究还发现在子宫内膜癌组织中MCP-1蛋白与CD68标识的巨噬细胞的阳性表达率均明显高于子宫内膜不典型增生和增生期子宫内膜（P<0.05），说明MCP-1和巨噬细胞参与了子宫内膜癌的发生发展过程，也进一步提示MCP-1蛋白与CD68标识的巨噬细胞可能通过分泌某些促淋巴管生成的因子，进而促进肿瘤新生淋巴的生成，从而参与了肿瘤细胞的转移。因此笔者设想，是否可以通过阻断MCP-1能够阻碍巨噬细胞的聚集，从而延缓或阻断肿瘤的发生发展过程，这也可以为肿瘤的治疗提供新的思路。

综上所述，MCP-1蛋白与CD68标识的巨噬细胞参与了子宫内膜癌的发生发展过程，可为临床治疗提供一定的参考。

参考文献

[1]王位，葛静，单莉莉，等.单核巨噬细胞系THP-1对子宫内膜癌细胞系RL952增殖和侵袭能力的影响及其分子生物学机制[J].临床和实验医学杂志，2017，16（8）：765-767.

[2]兰秀君.单核细胞趋化蛋白-1在抗中性粒细胞胞浆抗体相关系统性小血管炎中的研究进展[J].西部医学，2018，30（2）：303-307.

[3]吴桂梅，赵小峰，汪瑶，等.大鼠单核细胞趋化蛋白-1基因的生物信息学分析[J].安徽农业科学，2019，47（1）：93-95.

[4]秦翠梅，刘可娜，于洪建.盆腔炎患者血清C-反应蛋白与白介素-2和单核细胞趋化蛋白-1及血液流变学的变化[J].中华医院感染学杂志，2018，28（2）：250-253.

[5]崔世红，高亚南，张琳琳，等.重度子痫前期胎盘组织核转录因子5和单核细胞趋化蛋白-1的表达与巨噬细胞浸润[J].中华围产医学杂志，2016，19（12）：920-926.

[6]吴桂梅，赵小峰，汪瑶，等.大鼠单核细胞趋化蛋白-1基因的生物信息学分析[J].中国老年学杂志，2017，37（15）：93-95.

[7]董坤，牛平，苏岑，等.帕金森病患者外周血单核细胞趋化蛋白-1及巨噬细胞炎性蛋白-1α水平与非运动症状的相关性研究[J]中风与神经疾病，2017，34（4）：312-315.

[8]薛荣，张宏伟，朱兰，等.单核细胞趋化蛋白-1与重要器官纤维化研究进展[J].中国职业医学，2015，42（5）：572-574.

[9]李彩霞，江玲，邓伟，等.子宫内膜癌中单核细胞趋化蛋白-1表达及其与巨噬细胞浸润的关系[J].实用临床医药杂志，2015，19（1）：75-78.

[10]卢宇青.Wnt10a/Wnt10b及其Wnt/β-catenin通路在子宫内膜癌患者中的作用机制研究[J].中国医学创新，2017，14（19）：22-25.

[11]刘丙营.PTEN基因与肿瘤抑制蛋白p53在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义[J].中国当代医药，2016，23（8）：58-60.

[12]吕巧英.子宫内膜癌肿瘤微环境的免疫调控机制进展[J].复旦学报（医学版），2016，43（4）：475-478.

[13]王媛媛，赵俊龙，刘娟，等.HEK293T细胞表达的单核细胞趋化蛋白1促进巨噬细胞迁移[J].细胞与分子免疫学杂志，2016，32（2）：149-152.

[14]李征.单核细胞趋化蛋白1和血管内皮生长因子在膀胱癌组织表达的相关性[J].武汉大学学报（医学版），2016，37（3）：426-429.

[15]马营营，黄煜，颜莉莉，等.ERK信号转导通路在CXCL12促进子宫内膜癌细胞增殖和侵袭中的作用[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2016，23（2）：250-254.

[16]叶园英，黄煜，颜莉莉，等.小干扰RNA沉默CXCR4和CXCR7对人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2017，24（4）：389-394.

[17]袁佳利，刘静，夏艳辉，等.单核细胞趋化蛋白-1与自身免疫性疾病研究进展[J].实用医院临床杂志，2017，14（2）：132-135.

[18]周琪，杜洪灵，陆渊波.单核细胞趋化蛋白-1和转化生长因子-β1在子宫内膜异位症中的表达情况[J].中国妇幼保健，2015，30（15）：2329-2330.

[19]祖恩慧，梁杰，袁蕾，等.单核细胞趋化蛋白-1在HPV感染导致宫颈癌发展中的作用[J].中华医院感染学杂志，2016，26（16）：3786-3787.

[20]吴燕祯，秦福杰，李玉香，等.子宫内膜癌337例患者临床特征分析[J].中国医学创新，2015，12（16）：141-143.

（收稿日期：2019-07-17）（本文编辑：程旭然）