细胞蜡块免疫标记及基因检测在浆膜腔积液中的临床应用意义

郑建国，王敏，刘影

（廊坊市第四人民医院，河北 廊坊 065700）

0 引言

由于浆膜腔积液是临床多种疾病常见表现，其性质的判断，对于临床诊断和治疗具有重要意义，恶性肿瘤患者在疾病晚期往往会伴有浆膜腔积液现象，通常行细胞病理学诊断，且具有较大的优势[1-2]。因此我们采用细胞蜡块技术，结合免疫组化染色诊断的应用，能够有效对其进行鉴别诊断，并帮助判断预后等、对于确诊的肺腺癌患者进行基因检测，从而对于临床分子靶向药物筛选提供新型的检测标本来源。为进一步进行验证，本文选择我院患者开展分析，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

择取在2017 年1 月至2018 年12 月到我院就诊的浆膜腔积液患者，有145 例进行脱落细胞学检查，采用细胞蜡块技术，制作收集其细胞蜡块共218个。其中男性、女性例数分别为70 例、75 例，年龄28～91 岁，平均（65.46±6.84）岁。其中66 例诊断为恶性浆膜腔积液，其中31 例行EnVision 二步法免疫组化染色。

1.2 方法

（1）细胞蜡块：将送来检查的液体需要在室温下放置沉淀，时间约为20min，然后取出200mL，分别放入到4 个离心管中，并进行20min 离心处理，速度为3000r/min，将上清液去掉，然后同福尔马林（10%）充分混匀，进行离心处理，红细胞多者，加入冰乙酸乙醇混悬液去除，沉淀物再加入95%乙醇混匀离心沉淀，使用滤纸将沉淀物进行包裹，接着行脱水、切片等处理。

（2）免疫组化：选择PAX-8、CK7、TTF-1、CK5/6、Caleretinin,、WT-1、P63、CK20、P53、Ki67、CgA、CD56、NSE、ER、PR 等抗体，采用福州迈新公司试剂，EnVision 二步法免疫组化染色，具体步骤按照试剂盒说明书进行。

（3）EGFR 基因检测：采用ARMS-PCR 方法，基因提取后进行EGFR 检测，操作步骤按照试剂盒说明书进行。

2 结果

145 例患者中，胸水128 例（88.28%），腹水15 例（10.34%），心包液2 例（1.38%），66 例确诊为浆膜腔恶性积液，其中31 例进一步免疫组化检查。胸水中19 例肺腺癌转移，1 例肺鳞状细胞癌转移，1 例转移恶性黑色素瘤，1 例恶性间皮瘤，2 例肺小细胞癌转移，1 例卵巢浆液癌转移；腹水中：2例肺腺癌转移，2 例胃腺癌转移，1 例结肠腺癌转移，2 例卵巢癌转移。肺腺癌中有10 例检测发现有EGFR不同外显子突变，并进行分子靶向药治疗。

3 讨论

在临床中，对浆膜腔积液的性质进行准确判断对于科学、合理治疗的意义重大，特别是恶性胸腔积液患者，因为受到积液的影响，对影像学检查，内镜活检获取标本等造成重大影响，从而影响疾病的鉴别、诊断与治疗等[3-4]。但是浆膜腔积液的成分较为复杂，而且细胞的种类较多，如果仅行传统涂片鉴别，对于恶性肿瘤诊断分型很困难，又存在不能长期保存及重复使用，无法免疫组化及基因检测，是无法有效满足临床诊断要求的[5]。而细胞蜡块则能够通过离心处理，将干扰结果的红细胞因素去除，细胞的组织学结构特征更明显，可进行多次切片用以免疫标记，还可以进行EGFR 基因突变检测，因此具有恶性积液检出率高，能够准确诊断肿瘤分型，判断查找原发部位，利于鉴别诊断等优势[6-7]。CK7抗体同CK20 抗体进行组合，能够对腺癌的起源进行鉴别；而同TTF-1、NapSinA 进行组合，能够准确诊断肺腺癌转移；与PAX-8、WT-1、ER、PR、P53、Ki67 等对于卵巢癌转移诊断，尤其是在卵巢浆液性癌中表达极高。CR 是间皮细胞特异性抗体CK5/6、WT-1、D2-40 在对间皮瘤以及间皮细胞进行鉴别的时候，联合应用能够提升诊断准确率。对于肺腺癌进一步进行EGFR 基因突变检测，则能够帮助对EGFR-TKI靶向治疗的敏感情况进行预测。就现阶段而言，在治疗癌症病患的时候，治疗观念正在向着循证医学、精准医疗，靶向性治疗等模式进行转变，所以需要对病理标本进行免疫组化检查，以便对于肿瘤准确诊断分型，查找原发部位，从而指导治疗方案判断预后，进行基因检测、对于肿瘤患者进行靶向治疗、合理且科学的选择治疗药物，具有重大意义[9-10]。

综上所述，对于浆膜腔积液患者而言，选择细胞蜡块免疫标记、基因检测方式进行检测能够对积液的性质进行鉴别，提高恶性浆膜腔积液检出率，诊断恶性肿瘤类型，指导查找原发部位，支持判断预后，能提供分子靶向药物基因检测新型标本，帮助临床医生便于科学且具有针对性的制定治疗方案。