rhIL-1RA对MCD饮食诱导NASH小鼠炎症的干预作用及机制的研究

王瀚

（浙江大学医学院附属妇产科医院，浙江 杭州 310006）

0 引言

非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis，NASH）是全球范围内威胁人体肝脏的主要疾病之一，在欧美等发达国家，NASH是慢性肝病发病的首要病因[1]。NASH在病理变化中肝细胞脂肪变性和肝小叶内炎症浸润发生情况很普遍，其中白介素-1（IL-1）在这一过程中发挥了很重要的作用[2]。重组白介素-1受体拮抗剂（Interleukin-1 Receptors Antagonist，IL-1RA）是人体内产生的一种IL-1的拮抗剂，在NASH的发生发展变化中起到抑制IL-1诱导炎症细胞引发炎症的作用，但是由于机体自身产生的IL-1RA是有限的，目前这种治疗不能得以广泛开展[3]。本研究旨在探讨rhIL-1RA对MCD饮食诱导NASH小鼠炎症的作用及其作用机制，现将研究报道如下。

1 实验材料

1.1 实验动物

SPF级雄性3周龄C57BL/6J小鼠90只（购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司），体重15-20 g。随机数字法将实验动物分为3组，每组30只，标记为正常对照组、模型组、干预组。先给予普通SPF级饲料适应性喂养1周；MCS饲料喂养正常对照组小鼠，MCD饲料喂养模型组、干预组小鼠，每日常规给予饮水，连续喂养4周后处死。

1.2 材料与试剂

人重组白介素-1受体拮抗剂（购于上海伍洋生物医药技术有限公司）；引物（购于上海生工生物工程股份有限公司）；油红O染色液（购于珠海Baso）。

1.3 实验仪器

7180全自动生化分析（日本日立公司）；Tissuelyser全自动样品快速研磨仪（上海净信科技）；冷冻离心机（美国Beckman公司）；全自动酶标仪（美国Bio-Rad公司）。

2 实验方法

2.1 动物模型制备及干预

MCS饲料喂养正常对照组小鼠，MCD饲料喂养模型组、干预组小鼠，所有小鼠每日常规给予正常饮水，连续喂养4周后处死。模型组小鼠每日予1 mL生理盐水腹腔注射，干预组小鼠每日人重组白介素-1受体拮抗剂20 mg/kg腹腔注射。

2.2 取材及观察指标

小鼠在各组所对应的饲料条件下饲养4周后，禁食12 h，称重，眼球取血，切除肝脏称重。取左叶肝脏用4%多聚甲醛溶液固定组织，制作石蜡切片行HE染色，在镜下观察其组织病理变化。小鼠全血室温静置30 min，离心，取上清液，采用自动化生化分析仪测定血清 ALT、AST、HDL、LDL、TChol、TG。

2.3 统计学分析

3 实验结果

3.1 实验前后三组小鼠体重、肝重变化情况

试验前，三组小鼠体重比较，其之间的差异不明显（P＞0.05）；实验后，模型组、干预组与正常组相比体重、肝重减少（P＜0.05）；干预组小鼠与模型组相比体重、肝重无明显差异（P＞0.05），见表1。

表1 实验前后三组小鼠体重、肝重变化情况（±s）

表1 实验前后三组小鼠体重、肝重变化情况（±s）

组别 体重 实验后肝重-实验前 实验后 -正常组 20.05±0.85 25.98±1.24 0.96±0.12模型组 19.78±0.79 15.23±0.65 0.42±0.06干预组 19.96±0.81 16.75±0.71 0.46±0.08

3.2 实验后三组小鼠肝功能、血脂情况比较

模型组与干预组较正常组的ALT和AST高，其差异明显（P＜0.05）；且干预组小鼠的ALT较模型组小鼠降低，其差异明显（P＜0.05）；MCD饮食下的小鼠的HDL、LDL、TC、TG指标要低于对照组，差异明显（P＜0.05），见表2。

表2 实验后三组小鼠肝功能、血脂情况比较（±s）

表2 实验后三组小鼠肝功能、血脂情况比较（±s）

组别 ALT（U/L） AST（U/L） HDL（mmol/L） LDL（mmol/L） TC（mmol/L） TG（mmol/L）正常组 23.15±3.65 153.44±27.33 2.49±0.16 0.71±0.06 3.49±0.32 1.63±0.20模型组 187.46±36.99 276.38±48.27 1.13±0.09 0.33±0.04 1.79±0.18 1.11±0.15干预组 109.54±21.69 265.09±40.82 1.21±0.10 0.32±0.03 1.88±0.19 1.15±0.18

3.3 实验后三组小鼠HE染色组织比较

实验后模型组小鼠的脂肪样变性、炎症反应均较对照组和干预组严重，其细胞内有较大较多的脂肪滴，表现出严重的脂肪样变性，细胞体积明显增大，胞浆红染增多；而正常组肝细胞内无明显空泡、脂肪滴，结构清晰，肝小叶结构较完整，细胞无明显增大，胞浆染色均一；干预组细胞形态介于上述两者之间。

4 结果与讨论

许多研究都发现，NASH的发病与人体机体的免疫功能紊乱有很大的关系，肝脏内的巨噬细胞可以分泌很多炎性因子，可以造成NASH患者肝组织不断发生炎症反应、进行肝细胞重塑，最终进入到肝硬化、肝功能衰竭的地步[4-5]。有少数研究发现，阻断一些炎性因子的作用途径可大大改善NASH患者的预后和体征，但是由于抑制的细胞炎性因子往往是单一的，其效果经常不能达到最佳。因此找到抑制效果最佳的细胞因子抑制剂是目前研究该疾病治疗的重点，在此基础上再去寻找多靶点的药物往往可以达到事半功倍的效果[6-8]。

大多数对NASH患者炎症因子的研究在TNF-α、IL-6上面，较少有研究提到IL-1对NASH发展发生过程中的重要性。本研究探讨了rhIL-1RA对MCD饮食诱导NASH小鼠炎症的作用及其作用机制。通过MCD饮食建立的NASH小鼠模型在使用rhIL-1RA后其各项指标均有不同程度的改善，在病理学上可以看到明显的好转，可以认为rhIL-1RA是一种有效的抗NASH药物。