辽宁某蛋鸡养殖场禽白血病病例诊断报告

辛凌翔，王朋朋，冯崇伦，白光烨，佟 琪，孙洪磊

(1.中国农业大学动物医学院，北京海淀100193 ； 2.中国兽医药品监察所，北京海淀100081)

禽白血病(Avian Leukosis，AL)是由禽白血病病毒(Avian Leukemia Virus，ALV)和禽肉瘤病毒(Avian Sarcoma Virus，ASV)引起的以禽类造血组织中某些细胞成分增生为主的肿瘤性传染病的统称，是危害养禽业的主要疾病之一，呈世界性分布[1]。ALV在自然状态下只感染鸡，但是不同品种或者品系在感染后，会出现不同的抵抗或者发病状态[2]，由于ALV存在多个亚群，感染的毒株不同其症状和病理特征也会不同[3]，且部分症状与其他肿瘤性疾病相似，这也给临床疾病诊断带来了难度[4]。2019年3月辽宁某蛋鸡养殖场饲养的育成期蛋鸡因感染J亚群ALV发病，报告如下。

1 流行病学调查

辽宁某蛋鸡养殖有限公司建设于2013年，为商品蛋鸡饲养场，建有育雏舍、育成舍、产蛋鸡饲养舍，并配备饲料加工及鸡蛋储存舍。该场可容纳饲养成年产蛋鸡12万只，每栋鸡舍采用全进全出式饲养模式。2019年3月份该场饲养的4万只90日龄育成期蛋鸡出现发病，主要症状为采食量减少，异常消瘦，剖检死亡鸡见肝脏肿大，呈土黄色，部分病死鸡有肝出血症状，每日死淘10只左右，病情持续1个月，饲料中添加脱霉剂，投喂抗生素等措施均无效，病鸡扔持续出现。此次发病鸡全部出自同一批次的青年蛋鸡，成年鸡或育雏鸡未出现类似发病现象。经与驻场兽医沟通，得知该场免疫程序如表1所示。

2 临床剖检症状

临床上经对该养禽场发病鸡进行剖检观察，均可见病鸡腹腔内有大量出血，肝脏肿大、破裂，肉眼可见肝脏表面被覆有较大的出血块，肝脏质地变脆，切面湿润，呈现豆腐渣样病变，部分病鸡肝脏呈现为土黄色；脾脏肿大；卵泡变性粘连坠入腹腔，形成卵黄性腹膜炎；肠壁变薄、粘连。剖检结果如中插彩版图1所示。

图1 临床剖检症状

表1 辽宁某蛋鸡养殖场免疫程序

3 病理组织学病变

选取发病鸡只肺脏、肝脏以及脾组织，经甲醛固定以后，制作病理切片，经H.E.染色后在显微镜下观察。从切片中可以看出，肺脏组织切片较为正常(如中插彩版图2A所示)，肺房结构清晰，无异常病变；肝脏中有聚集性肿瘤细胞，细胞核大偏于细胞一侧，胞浆内有红染颗粒为典型的禽白血病引起的髓细胞瘤(如中插彩版图2B所示)；脾脏切片显示出红白髓结构消失，表明该病鸡已经处于较强的免疫抑制状态(如中插彩版图2C所示)。

图2 组织H.E.染色结果

4 病原核酸检测

剖检病死鸡，选取适量大小的肝脏组织，研磨后离心取上清液，分别提取病原基因组RNA和DNA，利用病原特异性引物进行RT-PCR和PCR检测。各引物扩增目的片段长度分别为：禽白血病病毒(ALV-J亚群)700 bp、马立克病病毒(MDV)158 bp、网状内皮组织增生症病毒(REV)438 bp、鸡传染性贫血(CIAV)298 bp、禽腺病毒(FAdV)494 bp、禽戊型肝炎病毒(AHEV)750 bp、禽呼肠孤病毒(ARV)485 bp和禽源空肠弯曲杆菌589 bp，RT-PCR和PCR结果见图3。结果显示，8份肝脏样品的ALV-J均为阳性；8份肝脏样品的AHEV、MDV、ARV、REV、CIAV、FAdV和禽源空肠弯曲杆菌均为阴性。将出现阳性条带的检测产物送测序公司测定序列，检测产物命名为A1-G1和A1-G2，序列用于进化分析，进化树分析见图4。结果显示，A1-G1与A1-G2有99%的同源性，他们与ev/J-O DQ500039、ev/J-R DQ500044、ev/J-C14 DQ500034同源性最高，ALV gp85基因同源性为98%。

5 诊断结果与建议

经检测确诊该鸡场感染了ALV，但迄今为止针对ALV还未有切实有效的治疗方法，一经发现只能淘汰阳性鸡只。由于ALV感染依赖于垂直传播，所以减少种鸡群的感染率和建立无白血病的种鸡群是控制本病的最有效措施。ALV净化可采取以下程序：(1)在种鸡育成期和产蛋期，采集泄殖腔拭子或蛋清，用ELISA对ALV抗原进行检测，淘汰阳性鸡；(2)受精蛋在隔离条件下出雏、饲养，连续进行4代，建立无病鸡群；(3)根据具体情况按照一定时间间隔对鸡群进行病毒分离，确保根除ALV阳性鸡只；(4)将ALV阴性鸡群隔离饲养，加强饲养管理，减少应激。

图3 病原核酸PCR检测结果

M：DNA分子量标准 ； 1～8泳道 ： 8份肝脏样品

图4 基于ALV gp85基因序列的进化树