自制D-二聚体质控品的临床应用

徐 洋，孙伟峰

（南京医科大学附属无锡人民医院医学检验科，江苏南京 214023）

D-二聚体是来源于纤维蛋白溶解酶水解交联纤维蛋白的降解产物，目前在各临床实验室已被广泛应用，在静脉血栓栓塞性疾病的排除诊断、弥散性血管内凝血（DIC）诊断及溶栓药物临床诊治中的动态连续监测和效果评价方面，有较高的应用价值。虽然D-二聚体检测在临床上的应用快速增长，但是涉及方法学、质量控制、标准化及临床应用中的很多相关问题值得深入探讨。我院检验科同时检测自制质控品与普通标本，对自制质控品的应用效果进行了评价，考察了其重复性、稳定性等质控性能，以验证我院检验室自制D-二聚体质控品的差异性和稳定性，为临床使用提供保障。

1 资料与方法

选取本科室门急诊、住院患者D-二聚体检测的剩余标本131份，根据D-二聚体检测结果分为混合血浆高值区组（500～1050μg/L）60份和低值区组（200～500μg/L）71份两组，分别制备两组混合血浆。自制质控品制备完成后，将评测结果与厂家配套试剂质控品标准进行比较。

1.1 仪器和试剂 美国IL公司ACL TOP 700全自动血凝仪，D-二聚体检测配套试剂由该公司提供。

1.2 方法 本研究中131份患者血浆D-二聚体检测值介于200～1050μg/L（该仪器最佳试剂线性反应范围），凝血正常，乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒均为阴性，且无溶血、脂血、黄疸。

1.2.1 自制质控品处理分装：将混合血浆充分混匀后分装至无菌冻存管，每支0.4ml，共制备高、低值区两组质控品。各分装140支左右，封盖后直立于-20℃冰箱中冷冻贮存。待测定时取出冷冻血浆，置37℃水浴中轻轻摇动使其快速融化。

1.2.2 自制质控品的测评方法[1]： ⑴批内变异测定：在日常测定患者D-二聚体水平时，随患者标本对20支自制D-二聚体定量质控品进行批内一次性变异测定，统计这20支自制D-二聚体定量质控品的平均值()、标准差（s）及变异系数(CV)。⑵批间变异测定及批间稳定性考核：一月内每日取出1支自制质控品，融化后与待测标本平行检测，月末统计计算批间变异及质控品的平均值()、标准差（s）及变异系数(CV)。考核连续4个月检测结果的稳定性，对每个月的月平均值()、月标准差（s）及累积的平均值()、标准差（s）进行统计学分析。

1.3 统计分析 采用SPSS 19.0统计软件，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 批内变异 20支两种不同浓度的D-二聚体自制质控品，低值血浆批内CV为3.38%，高值血浆批内CV为3.70%，提示重复性较好。见表1：

表1 20支两种不同浓度的D-二聚体自制质控品批内CV测定结果（µg/L)

2.2 批间变异及批间稳定性连续统计4个月的每日D-二聚体检测结果，两种自制D-二聚体质控品每个月的批间CV值均＜5.00%，表明质控品批间变异较小。单因素方差分析结果显示，不同月份之间比较、任一月份与累计均值比较差异均无明显差异（P＞0.05）。见表2：

表2 两种不同浓度D-二聚体质控品批间变异及稳定性分析（±s ，µg/L）

表2 两种不同浓度D-二聚体质控品批间变异及稳定性分析（±s ，µg/L）

时间 低值区 高值区检测结果 CV(%) 检测结果 CV(%)1月（31天） 307.65±12.95 4.21 741.42±28.72 3.87 2月（28天） 307.57±15.11 4.91 744.93±30.14 4.05 3月（31天） 310.45±15.15 4.88 746.65±29.60 3.96 4月（30天） 308.07±15.01 4.87 740.77±29.21 3.94累积（120天） 308.46±14.43 4.68 743.43±29.14 3.92

2.3 与厂家提供配套的质控血浆数据作对比 美国IL公司340μg/L的质控品CV为7.70%，729μg/L的质控品CV为4.50%；本科室自制的质控品，308.46μg/L的自制质控品CV为4.68%，743.43μg/L的自制质控品CV为3.92%，低于厂家的质控品CV值，符合厂家配套的高、低质控物的精密度。

3 讨论

目前，不同厂家生产的试剂中抗D-二聚体单克隆抗体存在特异性差异，原因是针对的纤维蛋白降解碎段上的位点各不相同，降解碎段的大小亦不均一[2]；此外，血凝仪免疫比浊法测定会受到乳胶颗粒特征的影响，颗粒大小不等会严重影响其聚集时的吸光特性，且每个厂家采用的参考测量程序和校准品溯源性的不同。因此，不同厂家的试剂测定同份血浆的D-二聚体结果也不具备可比性，无法进行连续质量控制。

目前，D-二聚体尚没有国际约定的参考测量程序和校准品，另外市场采购的质控物的价格昂贵，质控物每瓶复溶大多只有1ml的量，限制了其在常规实验室的推广使用[3]。国内有关自制D-二聚体质控品的主要制备方法是从新鲜血浆制备纤维蛋白，经过尿激酶的降解作用使纤维蛋白降解成D-二聚体，然后再加上不同基质，制备成模拟血浆[4]。但上述方法操作流程繁琐，且基质成分，如聚乙二醇衍生物等对乳胶颗粒增强免疫比浊等检测方法有干扰作用。也有报道，医院检验室将病人D-二聚体检测后剩余的标本按浓度调配处理后分装冻存，用于日间测定，由于混合血浆与送检临床标本性质较为一致，可以排除基质效应的干扰，性质相对稳定，能满足室内质控的需要[3]。

我院为大型综合性三甲医院，日常D-二聚体检测工作量大，容易收集所需要的剩余血浆，结合本院的实际工作情况，故选择将病人D-二聚体检测后剩余的标本用于日间测定，作为D-二聚体质控品的制备方法，并对D-二聚体的定量检测进行质量监测，以期为开展该项目检测室内质控提供规范化模式。本研究结果显示，本室自制混合血浆的批内变异、批间变异及累积总变异均小于5%，且具有良好的稳定性；同时，本室自制混合血浆的检测结果与厂家提供配套的质控血浆数据作对比，自制的混合血浆能达到厂家配套高、低质控物的精密度要求，说明本室自制的质控品能满足日常检测室内质控的需要。

综上所述，将自制D-二聚体混合血浆应用于室内质控，可降低医疗成本，帮助检验科室实现持续的质量改进，且自制D-二聚体质控品的检测结果稳定性好、精密度符合相关质控的规定和要求。但同时也必须意识到，虽然D-二聚体的检测方法很多，但在没有统一标准品的情况下，各不同分析系统测定结果之间存在显著差异。对于新的不同定量分析系统，需要用新系统对制备的质控物重新定值后才能用于质量控制，即使应用于室间质评，也应根据检测体系的不同严格分组。