硝酸盐转运蛋白（Sialin）与口腔癌的相关性研究

陈国栋，欧阳嘉杰，许锦心，陈伊燕

（佛山市顺德区第一人民医院/南方医科大学顺德医院 口腔医学中心，广东 佛山 528000）

0 引言

口腔癌作为口腔及颌面部常见的一种癌症，在我国的发病率较高，每年有近5 万新发病例，且患者多为中晚期，预后较差，严重影响患者的身心健康[1]。目前的研究提示，口腔癌诊断标志物缺乏一定的特异性，为早期诊断带来了一定困难，影响口腔癌的及时治疗[2]。而最新的研究将目标放在了与血管生成密切相关的一氧化氮（NO）分子上，研究显示哺乳动物唾液腺细胞中存在特定的硝酸盐转运蛋白（Sialin），且多种癌组织中的硝酸盐浓度有显著的升高，提示着二者的紧密关系[3]。本研究旨在通过对口腔癌组织的研究，探究Sialin 与口腔癌的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2018 年1 月至2018 年8 月我院收治口腔癌患者50 例，取其口腔癌组织、癌旁组织及临近正常组织，患者年龄23-76 岁，平均（51.28±10.57）岁，男28 例，女22 例。纳入标准:①所有患者均经过病理学诊断为口腔癌；②术前未进行任何放化疗；③签署治疗研究知情同意书。排除标准:①合并患有其他系统严重疾病的患者；②发生其他系统癌细胞转移的患者。同时选取同期于我院体检的正常人群口腔组织50 例作为对照组，比较三组样本提供者的一般临床资料，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究通过医院伦理委员会审批。

1.2 方法

所有样本均使用10%甲醛进行固定，并用石蜡进行包埋，以4 m 进行连续切片，切片组织进行常规烤片、脱蜡、微波抗原修复以及清除内源性过氧化物酶，使用兔多克隆抗体Sialin 进行孵育一抗，后孵育二抗，以二氨基联苯胺（DAB）显色，苏木精复染，无水乙醇脱水后，封片观察。对照组使用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照组。

1.3 观察指标

采用双盲法由2 位经验丰富的临床病理专家分别进行单独判断，每张切片共观察5 个视野，每个视野计数200 个肿瘤细胞，共计数1000 个细胞。计算阳性细胞的占比情况，阳性细胞数≤10%为1 分，11%-50%为2 分，51%-75%为3 分，＞70%为4 分；后按染色强度进行评分:无色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分；最后按照两项评分乘积将结果分为4 个等级:0-2 分为“-”，3-4 分为“+”，6-8 分为“++”，9-12 分为“+++”。

1.4 统计学分析

采用SPSS 22.0 统计软件进行数据分析，计数资料以率表示，采用χ 2 检验或Spearman 秩相关检验进行统计学分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Sialin 在口腔癌、癌旁组织及正常口腔组织中的表达情况

Sialin 的阳性表达率大小为:口腔癌组织＞癌旁组织＞正常口腔组织，三者表达阳性率有显著的不同（P＜0.05），口腔癌组织中阳性表达率为94.00%，癌旁组织为62.00%，具体见表1。

表1 Sialin 在口腔癌、癌旁组织及正常口腔组织中的表达情况

2.2 Sialin 表达与口腔癌临床病理因素的相关性

Sialin 的表达与口腔癌的分期和分化程度有关（P＜0.05），与患者的年龄、性别、肿瘤直径、淋巴结转移无显著相关性（P＞0.05），具体见表2。

3 讨论

在既往的许多研究中均发现，口腔癌的发生发展和NO 具有密切的关联，普通肿瘤的生长和NO 密切相关，NO 能够调节肿瘤生长的重要过程，其中包括血管生成、细胞凋亡、细胞周期以及肿瘤的转移侵袭等，目前关于NO 的作用途径仍处于研究中，其中NO 非酶源途径，即硝酸盐-NO 途径在口腔癌中的研究较少，而其作用主要依赖于体内的硝酸盐转运机制。有研究表明[4]，在哺乳动物的唾液腺细胞中存在特定的硝酸盐转运蛋白，即Sialin，能够将细胞内的硝酸盐向细胞外转运，通过口腔厌氧菌的代谢作用，将其转化为亚硝酸盐，最后进一步还原成NO，发挥生理作用。

表2 Sialin 表达与口腔癌临床病理因素的相关性

通过比较口腔癌组织中Sialin 的表达情况和口腔癌患者的临床资料，结果显示Sialin 的表达与口腔癌的分期和分化程度有关（P＜0.05），与患者的年龄、性别、肿瘤直径、淋巴结转移无显著相关性（P＞0.05）。这表明通过对组织中的Sialin 进行阳性率检测，能够对患者的诊断分期进行判断，对临床诊断治疗具有相当重要的意义。

综上所述，Sialin 作为体内重要的硝酸盐转运蛋白，在口腔癌的发生中具有一定的特异性，同时与患者的临床分期、肿瘤分化程度具有显著相关性，对其进行检测有利于临床诊断研究。