酶联免疫法测定合肥市售鱼虾链霉素残留量的探讨

王香存 班恒 沈凡

摘要  [目的]测定合肥市售鲫鱼和河虾的链霉素残留量，并与国家标准对比，评价其残留情况。[方法]于2018年10—12月在合肥市蜀山区、庐阳区、瑶海区、包河区共16个水产品市场、农贸市场和大型超市随机购买不同品种的鱼虾，采用酶联免疫吸附方法检测其中链霉素的残留量。[结果]合肥市售鱼虾中链霉素的检出率为100%，残留范围为1.50～11.88 μg/kg，平均含量为4.40 μg/kg。[结论]根据国家标准《动物源性食品中链霉素残留量测定方法酶联免疫法》（GB/T 21330-2007）的规定，水产品中链霉素的检测下限为50.0 μg/kg，此次试验检测鱼虾中链霉素的残留量均符合国家标准。

关键词合肥市;鲫鱼;河虾;酶联免疫法;链霉素

中图分类号：S859.84文献标识码：A文章编号：2095-3305（2019）03-121-03

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2019.03.052

链霉素是一种从革兰氏阳性的灰色链霉菌培养液中提取出来的氨基糖苷类抗生素，在食品行业，链霉素常见于农产品和水产品中，作为抗菌药物使用。但是过量使用链霉素，会造成其在动物源性食品中残留，对人类健康造成危害，尤其对听觉神经毒性较大，长期使用会对人体肾脏和听觉神经造成不可逆转的损害，还会使细菌产生耐药性。因此，链霉素残留检测方法是否快捷、准确、高效，对食品安全具有重要的意义。

该试验采用酶联免疫间接竞争法检测鱼虾样本中的链霉素残留情况。试验原理是样品吸光度值与其链霉素残留量呈负相关关系。酶联免疫竞争性试验中，酶标板上预包被偶联抗原和待测样品中残留的链霉素一起竞争抗链霉素抗体，当加入酶标记物后，再加入四甲基联苯胺（TMB）底物显色，测得其吸光度，再将试验结果与标准曲线比较，就可以得到样品中链霉素的残留量。将试验结果得到的链霉素残留量与国家标准对比分析，即可粗略得出合肥市售鲫鱼和河虾链霉素残留情况。

1材料与方法

1.1样品采集

课题小组于2018年10月至12月在合肥市蜀山、庐阳、瑶海、包河4个区共16个水产品市场、农贸市场和大型超市分别随机采购了鲫鱼和河虾。采样后在冰箱-20℃进行低温保存。

1.2试验仪器与试剂

1.2.1仪器匀浆机（T10，德国IKA公司）;离心机（H1650，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）;酶标仪（SpectraMax M，美国MD公司）。

1.2.2试剂链霉素检测试剂盒（深圳芬德生物技术有限公司），其余化学试剂均为分析纯。

1.3试验方法

1.3.1样品处理分别配置PB缓冲液（1. 2 g NaH2PO4·2H2O和2. 175 g NaH2PO4·2H2O加入去离子水1 000 ml溶解，0.05 mol/L）、复溶液以及工作洗涤液。将配好的洗涤液稀释20倍。处理待测鱼虾样品，取肉，粉碎并制成匀浆。然后称取2 g去除脂肪的匀浆待测样品，加入8 ml PB缓冲液（0.05 mol/L），将其充分震荡混匀。在56℃的水浴环境下放置0.5 h后，接着在室温下上离心10 min，转速为4 000 r/min。用移液器取1 ml上清液加入离心管中，再加入1 ml正己烷，充分混匀，室温下4 000 r/min转速离心。用移液器取50 ml用于分析。

1.3.2酶联免疫法检测链霉素含量分别将标准品和样本取50 μl/孔加入到微孔中，分别向每个微孔中加入50 μl抗体工作液，混匀，在室温条件下避光反应30 min。将孔内的液体甩干，向每孔中加入350 μl工作洗涤液充分洗涤，共洗涤5次，最后用吸水纸拍干。向每个微孔中加入100 μl酶标记物，室温条件下避光反应30 min。重复洗涤操作。然后，向每孔中加入底物液A 50 μl，再加底物液B 50 μl，混匀，在室温条件下避光显色15 min。最后，在每孔中加入50 μl终止液，混匀，终止反应。终止反应10 min内，用酶标仪在450 nm和630 nm波长处测定每孔吸光度值。

1.3.3绘制标准曲线根据标准品数据（表1）绘制标准曲线（图1）。

1.4统计学分析

试验结果以x±s表示，采用SPSS 22.0软件中的t检验进行统计分析处理。P<0.05即有统计学意义。

2结果与分析

2.1样品检测结果

从表2来看，合肥市售鱼虾中链霉素的检出率为100%，残留范围为1.5～11.88 μg/kg，链霉素平均残留量为4.40 μg/kg，均在国家标准范围之内。

2.2数据分析对比

如图2a所示，在全部样本中，尽管河虾中链霉素残留浓度均值高于鲫鱼，但无显著性差异（P>0.05）。如图2b所示，鲫鱼中链霉素残留浓度均值按从大到小排列为：包河区>瑶海区>蜀山区>庐阳区，但是各区样本数据没有显著性差异（P>0.05）。如图2c所示，河虾中链霉素水平在各区变化趋势与鲫鱼相同。然而，经统计学分析发现，包河区河虾中链霉素残留量显著高于其他3个区（P<0.05）。

3讨论

3.1鱼虾中链霉素残留的原因

所有样品中链霉素的检出率为100%，但其残留量均在国家标准范围之内。引起鱼虾中链霉素残留的因素主要有鱼虾生病、鱼虾防腐、饲料添加等，因此建议水产养殖户加强生产和运输管理，合理用药，为消费者提供放心安全的水产品。

3.2可能影响试验结果的因素

3.2.1温度当室温低于25℃，或者试剂和待测样品的温度高于25℃的情况下，所测得的吸光度值会偏低。

3.2.2洗涤操作不当在洗板过程中如果过度洗涤，或者洗涤不充分，可能会导致所测得的数值偏大或者偏小。洗板拍干后应立即进行下一步操作，否则可能会出现板孔干燥的情况，使得标准曲线不成线性，重复性不好。

3.2.3孵育不完全在整个孵育过程中，都应该用盖板膜封住酶标板，避免反应。

3.3鱼虾中链霉素残留情况评价

此次调查中采集的样品均为可食用的鱼虾，是人们日常食用的水产品。链霉素在水产品防治感染性疾病方面发挥了重要作用，但其毒副作用大，尤其对听觉神经毒性较大，长期使用会使细菌产生耐药性，还会对人体肾脏和听觉神经造成不可逆转的损害。依据国家标准《动物源性食品中链霉素残留量测定方法酶联免疫法》（GB/T 21330-2007）的规定，水产品中链霉素的残留量检测下限为50.0 μg/kg，因此此次试验鱼虾中链霉素的残留量符合国家标準。

4结论

（1）样品鱼虾中链霉素的检出率为100%，残留范围为1.5～11.88 μg/kg，平均含量为4.40 μg/kg，所有鱼虾样品中链霉素的残留量均符合国家标准。

（2）虽然检测鱼虾样品中链霉素的残留结果均在国家标准范围内，但其检出率为100%，仍需要完善水产品药物残留监控体系，加强监管，并提高养殖人员的技术和素养，从源头上控制滥用抗生素的现象，保证食品安全。

参考文献

[1] 戴晓丽，柯璐.酶联免疫法测定猪肉组织链霉素残留量的探讨[J].福建畜牧兽医，2013，35（3）：18-20.

[2] 佐发玉，刘秀萍，寇叙，等.锦州市市售牛奶中抗生素残留的调查及检测分析[J].辽宁医学院学报，2009，30（4）：321-325.

[3] 李丽，高舒榭，魏连冬，等.南阳市猪产品中四环素族抗生素残留量的调查结果与分析[J].中国猪业，2011，5（12）：49-50.

[4] 杨永涛，栾丽杰.济宁市售淡水鱼中喹诺酮类抗生素残留及其健康风险评价[J].安徽农业科学，2015，43（26）：141-143.

[5] 陈怀宇，黄周英，林育腾.泉州市售牛奶中抗生素残留的分析[J].泉州师范学院学报，2005（4）：106-110.

责任编辑：李杨